雙波長HPLC法同時測定復方水楊酸甲酯軟膏中鹽酸麻黃堿和水楊酸甲酯的含量Δ

時正媛，曾蔚欣，楊 麗，貝 雷，孫路路#（.首都醫科大學附屬北京世紀壇醫院藥劑科，北京 00038；.北京市食品藥品監督管理局，北京 00038）

復方水楊酸甲酯軟膏為常用的醫院制劑，可用于外傷消腫、肌肉疼痛及凍瘡等的治療，其主要成分為鹽酸麻黃堿和水楊酸甲酯。目前，鹽酸麻黃堿和水楊酸甲酯含量測定的方法主要有熒光分析法[1]、毛細管氣相色譜法[2-3]及高效液相色譜（HPLC）法[4-7]。為此，筆者參考了相關文獻[1-7]，建立了雙波長HPLC法同時測定復方水楊酸甲酯軟膏中鹽酸麻黃堿和水楊酸甲酯的含量，以為有效控制復方水楊酸甲酯軟膏的質量提供參考。

1 材料

1260型HPLC儀，包括四元泵、標準型自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器（美國安捷倫公司）；AG285型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

鹽酸麻黃堿、水楊酸甲酯對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：171241-201007、110707-201011，純度：99.7%、99.4%）；復方水楊酸甲酯軟膏（首都醫科大學附屬北京世紀壇醫院制劑室自制，批號：20140525、20140526、20140528，規格：20 g/支，每100 g軟膏含鹽酸麻黃堿2.5 g、水楊酸甲酯7.08 g）；甲醇、乙腈均為色譜純，磷酸、三乙胺均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：磷酸三乙胺溶液（流動相A，取磷酸1 ml，用純化水溶解并稀釋至1 000 ml，加三乙胺1 ml混勻）-乙腈（流動相B），梯度洗脫程序見表1；柱溫：室溫；流速：1.0 ml/min；進樣量：20 μl；檢測波長：鹽酸麻黃堿為207 nm，水楊酸甲酯為304 nm。

表1 梯度洗脫程序Tab 1 Gradient elution program

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取鹽酸麻黃堿、水楊酸甲酯對照品適量，精密稱定，加無水乙醇溶解并稀釋，制成每1 ml約含鹽酸麻黃堿500 μg、水楊酸甲酯1.416 mg的混合貯備液；精密量取混合貯備液適量，加無水乙醇溶解并稀釋，制成每1 ml約含鹽酸麻黃堿50 μg、水楊酸甲酯0.141 6 mg的混合溶液，即得對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密量取復方水楊酸甲酯0.2 g，置于100 ml量瓶中，加無水乙醇適量，于40～50 ℃水浴加熱，緩慢振搖至溶解，放冷至室溫，加入無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液 按復方水楊酸甲酯軟膏處方比例制備不含鹽酸麻黃堿、水楊酸甲酯的陰性樣品，并按“2.2.2”項下方法制備，即得陰性對照溶液。

2.3 系統適用性試驗

取“2.2”項下對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，色譜見圖1。結果顯示，鹽酸麻黃堿、水楊酸甲酯保留時間處樣品中的輔料與溶劑無干擾，分離度為103.32，理論板數分別為30 579.36、599 948.01。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品溶液（波長為207 nm）；B.對照品溶液（波長為304 nm）；C.陰性對照溶液（波長為207 nm）；D.陰性對照溶液（波長為304 nm）；E.供試品溶液（波長為207 nm）；F.供試品溶液（波長為304 nm）；1.鹽酸麻黃堿；2.水楊酸甲酯Fig 1 HPLC chromatogramsA.control solution（at 207 nm）；B.control solution（at 304 nm）；C.negative control solution（at 207 nm）；D.negative control solution（at 304 nm）；E.test sample solution（at 207 nm）；F.test sample solution（at 304 nm）；1.ephedrine hydrochloride；2.methyl salic-ylate

2.4 線性關系考察

精密量取“2.2.1”項下混合貯備液1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、30.0 ml，分別置于100 ml量瓶中，加無水乙醇定容至刻度，搖勻，制成系列濃度的對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。以質量濃度（x，μg/ml）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得鹽酸麻黃酮、水楊酸甲酯的回歸方程分別為y＝24.19x+71.36（r＝0.999 9），y＝30.12x+37.02（r＝0.999 8）。表明鹽酸麻黃堿、水楊酸甲酸質量濃度分別在5.0～150.0、0.014 16～0.424 8 μg/ml范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

2.5 精密度試驗

取“2.2.1”項下對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣6次。結果，鹽酸麻黃堿、水楊酸甲酯峰面積的RSD分別為0.92%、0.63%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取樣品（批號：20140526）適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別放置于0、2、4、6、8 h時進樣測定。結果，鹽酸麻黃堿、水楊酸甲酯峰面積的RSD分別為1.20%、0.96%，表明供試品溶液在8 h內穩定性良好。

2.7 重復性試驗

取樣品（批號：20140526）適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣6次。結果，鹽酸麻黃堿、水楊酸甲酯峰面積的RSD分別為1.36%、0.99%，表明該方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取樣品（批號：20140526）0.2 g，按其所含鹽酸麻黃堿和水楊酸甲酯量的80%、100%和120%，精密加入一定量的鹽酸麻黃堿、水楊酸甲酯對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣并計算加樣回收率，結果詳見表2。

表2 加樣回收率試驗結果（n＝3）Tab 2 Results of recovery tests（n＝3）

2.9 樣品含量測定

取3批樣品適量，按“2.2”項下方法制備供試品溶液、對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，結果見表3。

表3 樣品含量測定結果（n＝3，%）Tab 3 Results of content determination of samples（n＝3，%）

3 討論

復方水楊酸甲酯軟膏中鹽酸麻黃堿和水楊酸甲酯的紫外吸收特征不同：鹽酸麻黃堿在207 nm波長處有最大吸收，水楊酸甲酯在207、304 nm波長處均有最大吸收，但在207 nm波長處水楊酸甲酯的保留時間有干擾，不適合用于復方水楊酸甲酯軟膏中水楊酸甲酯的含量測定。因此，為了同時測定復方水楊酸甲酯軟膏中兩種組分的含量，故選擇鹽酸麻黃堿的檢測波長為207 nm、水楊酸甲酯的檢測波長為304 nm。

乳膏基質中含有凡士林和司盤80，為了不影響測定且保護色譜柱，需將其進行處理。本研究采用40～50 ℃水浴加熱使基質溶解，放冷后過濾，取續濾液作為供試品溶液，提取效果較好。

綜上所述，該方法操作簡便、準確、重復性好，可用于復方水楊酸甲酯軟膏的質量控制。

[1]周曉霞，魏永巨.熒光分析法測定中藥透骨香中水楊酸甲酯的含量[J].河北師范大學學報，2013，37（1）：82.

[2]薛磊冰，趙佳麗，鄒燕，等.毛細管氣相色譜法同時測定麝香鎮痛膏中樟腦、水楊酸甲酯的含量[J].藥物分析雜志，2013，33（9）：1 607.

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[6]徐建白，唐云，龐東穎，等.HPLC法測定活絡酊中水楊酸甲酯[J].中草藥，2011，42（10）：2 026.

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