結腸癌組織中Beclin1及Bcl-2表達變化及意義

任宇鵬，宋純，張昊

(遼寧省腫瘤醫院，沈陽110042)

結腸癌的惡性行為以腫瘤體積的迅速生長及浸潤為特點。自噬相關性蛋白Beclin1參與惡性腫瘤的發生發展，主要作用于自噬性活性激活的細胞程序性死亡過程中［1］。抗調亡基因 Bcl-2為促癌基因，對腫瘤細胞惡性增生行為的啟動有重要作用［2］。Beclin1、Bcl-2對腫瘤細胞生長及浸潤等惡性行為可能有協同作用，在細胞調亡通路中具有相關性［3，4］。本研究觀察結腸癌組織中Beclin1、Bcl-2表達變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2013年6月～2014年5月遼寧省腫瘤醫院大腸外科手術治療的結腸癌患者97例，男59例、女38例，年齡(63±27.9)歲，術前均未接受化療、放療等抗腫瘤治療，術中均切除腫瘤;除外腫瘤未切除姑息造瘺病例。術中分別取腫瘤組織、癌旁組織、距離腫瘤邊緣6 cm以上的正常結腸組織。

1.2 方法

1.2.1 Beclin1、Bcl-2檢測方法 采用免疫組化法。組織標本以4%甲醛緩沖液固定、脫水、透明、浸蠟、石蠟包埋，切片后進行脫蠟，PBS洗滌。加入Ⅰ抗，孵育過夜后加Ⅱ抗，37℃孵育30 min。DAB顯色，蘇木素復染后自來水洗凈，鹽酸乙醇分化后流水沖洗，脫水，透明。二甲苯干燥前中性樹膠封片。以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。根據染色陽性細胞百分比和陽性細胞著色強度兩項綜合判斷結果［5，6］。陽性細胞占細胞總數百分比:≤10%為1分、10%～50%為2分、50%～70%為3分、＞70%為4分。著色強度:無染色為0分，淺棕黃色為1分，較深棕黃色為2分，深棕黃色伴濃染顆粒為3分。根據兩項分數之和判定結果:1分為陰性(－); 2～3分為弱陽性(+);4～5分為中度陽性(++); 6～7分為強陽性(+++)。+、++、+++均為陽性;－和+為低表達，++和+++為高表達。

1.2.2 統計學方法 采用PASW Statistics18.0統計軟件。計數資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗;相關關系采用Spearman等級相關分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Beclin1、Bcl-2檢測結果 Beclin1陽性表達于細胞質，Bcl-2陽性表達于細胞質及細胞膜。結腸癌組織Beclin1、Bcl-2表達陽性率分別為80.4%(78/ 97)、75.3%(73/97)，癌旁組織分別為60.8%(59/ 97)、64.9%(63/97)，正常結腸組織分別為36.1% (35/97)、26.8%(26/97);結腸癌組織Beclin1、Bcl-2表達陽性率均高于癌旁組織及正常結腸組織(P均＜0.01)。

2.2 Beclin1、Bcl-2表達與結腸癌臨床病理參數的關系 Beclin1表達與結腸癌腫瘤浸潤深度、腫瘤直徑、TNM分期有關(P均＜0.01);Bcl-2表達與結腸癌腫瘤直徑、TNM分期有關(P均＜0.05)。見表1。

2.3 結腸癌組織Beclin1、Bcl-2表達的關系 結腸癌組織中Beclin1、Bcl-2表達呈正相關(r=0.324，P＜0.01)。

3 討論

目前，結腸癌發病率居所有腫瘤第3位，且呈逐年升高趨勢。結腸癌多以貧血或急性腸梗阻為首發癥狀，發現時多為晚期。因此，尋找早期診斷結腸癌的特異性標志物至關重要［7］。Bcl-2為抗調亡基因，定位于人染色體18q21上，在惡性腫瘤細胞質及細胞膜表達［8］。自噬相關基因Beclin1定位在人染色體17q21上，在調節自噬活性激活細胞程序性死亡過程中發揮重要作用［9］，但其抑癌或促癌活性目前仍存在爭議。研究發現，Beclin1及Bcl-2過表達與乳腺癌、肝癌、胃癌、舌癌等腫瘤體積及TNM分期密切相關［10，11］。本研究發現，Beclin1在結腸癌組織中表達陽性率高于正常結腸組織及癌旁組織;其表達與腫瘤直徑、TNM分期及浸潤深度均有關，Beclin1高表達提示腫瘤體積更大，TNM分期更差，而且往往浸破漿膜層。在正常結腸癌組織及癌旁組織均有Beclin1表達，提示Beclin1可能在結腸癌早期即有升高趨勢，伴隨腫瘤惡性行為的全過程。Beclin1雖然作為抑癌基因出現，但其生物學行為中可能同時伴有促癌基因活動，或伴有在其作用通道中發揮主導作用的促癌基因［12］。Bcl-2作為一個重要刺激因子，在腫瘤血管生成與發展中發揮重要作用。本研究顯示，Bcl-2在結腸癌細胞質及細胞膜均有表達，其在結腸癌組織中表達陽性率高于正常結腸組織及癌旁組織;其表達水平與腫瘤直徑及TNM分期有關。

表1 Beclin1、Bcl-2表達與結腸癌臨床病理參數的關系(例)

PTEN的下游通路PI3K/AKT信號通路是獨立于其他通路之外的生長因子信號轉導系統，對細胞的生長、增殖、凋亡、代謝等具有重要作用，并主導細胞的惡性轉變［13，14］。研究發現，Beclin1及Bcl-2活性均與抑癌基因PTEN活性缺失相關。Beclin1是Bcl-2的結合蛋白，Bcl-2的抗自噬活性與Beclin1表達密切相關。Bcl-2通過下調Vps34和Beclin相關Vps34酶活性進行自噬活性的調節，這種自噬活性對腫瘤的發生、發展、侵襲及轉移等惡性行為具有重要的調節功能［15］。本研究顯示，結腸癌組織Beclin1、Bcl-2表達呈正相關，即Beclin1及Bcl-2在同一結腸癌組織中表達共同上調，進一步證明了二者在結腸癌中的協同作用。但Beclin1及Bcl-2協同作用的確切機制仍需進一步深入研究。

總之，Beclin1、Bcl-2高表達與結腸癌的發生及惡性生長行為相關，提示結腸癌的不良預后;二者可能作為結腸癌的標志物，為結腸癌靶向治療提供新的目標基因。

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