丹參的化學成分分離及其抗氧化活性研究

黃海亮

丹參的化學成分分離及其抗氧化活性研究

黃海亮

研究丹參的化學成分分離與抗氧化活性, 對丹參的化學成分進行溶液分離, 使用Fenton體系和還原體系對丹參中化學成分的抗氧化活性進行研究。丹參中所含化學成分的抗氧化性和還原能力強。丹參具有較強的抗氧化活性, 能夠有效預防心腦血管疾病發展、擴張血管, 具有防止腦血栓等藥用價值。

丹參；化學成分分離；抗氧化活性

丹參主要能夠入藥的部位是其干燥根和根莖, 丹參由于外觀為紅色又被稱做赤參, 在我國大部分地區都能夠種植丹參。丹參能夠緩減患者的痛感、消除淤血、疏通經絡、促進氣血活動、恢復患者神智及緩解疲勞的功效, 可以用于治療胸悶、心絞痛、腹脹腹痛、四肢麻痹、失眠、月經失調及經痛、浮腫及潰瘍等癥狀。本文主要闡述了丹參的化學成分分離的方法及以其抗氧化活性的研究, 現分析如下。

1 丹參化學成分及其抗氧化活性

丹參的化學成分主要分為兩大類, 脂溶性化學成分和水溶性化學成分。丹參中的脂溶性化學成分中二萜醌類化學成分占最大比重, 其中又以橙黃色的丹參酮和橙紅色的隱丹參酮為主［1］。丹參中水溶性化學成分中以酚酸類水溶性化學成分居多, 酚酸類水溶性化學成分中主要有丹參素、迷迭香酸、丹酚酸、原兒茶醛等化學成分［2］。醫學界目前對于丹參中的水溶性化學成分的研究中, 掌握準確的化學成分主要有丹參素、迷迭香酸、原兒茶醛、丹酚酸A、B、C、D、E、F、G等［3］。丹參素是由2個HO分子、1個OH分子及以1個CH2分子和COOH分子構成, 迷迭香酸是由2個O分子、2個HO分子和2個OH分子及1個COOH分子構成。

2 丹參的化學成分分離

將丹參碾成粉狀, 使用4倍分量70%濃度的乙醇浸泡提取4次, 將丹參溶液濃縮至100 L, 然后提取溶液, 在常溫中放置24 h后, 使用清液將溶液中的乙醇去除, 將溶液加熱至室溫, 將溶液的pH值調至3, 將乙醇濃度壓縮至80%醇沉,將溶液中的乙醇過濾提取致無醇狀態, 將溶液的pH值調至5,使用乙酸乙酯對溶液萃取3次, 將溶液濃縮得到提取物45 L,后添入45 L石油醚, 將溶液中的沉淀物溶于乙酸乙酯中, 得到無水硫酸溶液, 將其脫水, 最終分離出含丹酚酸類化合物的樣品4.01 L。

將富含丹酚酸類化合物的樣品放置燒杯中, 使用硅膠進行第1次正相分離, 放置8 h后, 使用正己烷或乙酸乙酯進行第2次洗脫, 后分成6份樣品, 分別為Fr1、Fr2、Fr3、Fr4、Fr5、Fr6。將Fr2樣品使用SephadexLH-20柱層析, 然后使用比例為40：9的甲醇進行水梯度對Fr2樣品洗脫, 得到含有迷迭香酸的樣品, 接著使用CG161柱層析, 再使用比例為40：9的甲醇進行水梯度對含有迷迭香酸的樣品洗脫,最終得到迷迭香酸。將Fr4樣品使用SephadexLH-20柱層析,然后使用比例為60：13的甲醇進行水梯度對Fr4樣品洗脫,得到含有丹酚酸B的樣品, 接著使用CG161柱層析, 再使用比例為60：13的甲醇進行水梯度對含有丹酚酸B的樣品洗脫, 最終得到丹酚酸B。將Fr5樣品在常壓下使用硅膠柱層析,后使用正己烷或乙酸乙酯進行梯度洗脫, 后得到25 g的樣品,對25 g樣品使用SephadexLH-20柱層析, 然后使用比例為50：17的甲醇進行水梯度對25 g樣品洗脫, 得到含有丹酚酸A的樣品, 接著使用CG161柱層析, 再使用比例為50：17的甲醇進行水梯度對含有丹酚酸A的樣品洗脫, 最終得到丹酚酸A。

3 丹參化學成分的抗氧化活性研究

目前對于化學成分的抗氧化活性研究方式主要是使用Fenton體系、鄰苯三酚自氧化體系、還原體系、DPPH體系、抗卵黃脂質過氧化體系進行分析和研究［4］。本文使用其中兩種方式分析丹參化學成分的抗氧化活性。

3.1 Fenton體系 Fenton體系主要是對于丹參中化學成分進行OH清除, 其工作原理是在Fenton與丹參中的化學成分發生化學反應, 產生OH, 由此可得出丹參中化學成分的OH數量［5］。

檢測方式：使用2.5 ml的乙酸乙酯溶液(7 mmol/L), 然后加入1.5 ml硝酸鈉溶解劑(pH 7.6；0.3 mmol/L), 攪拌均勻后加入2.5 ml磷酸鹽溶液(含二乙烯三胺；2.8 mmol/L), 充分攪拌后加入純凈水, 于常溫中放置, 后測得丹參中化學成分的OH數量。見表1。

3.2 還原體系 實驗使用高錳酸鉀比色法則判斷丹參中化學成分的還原能力, 當Fe3+分子與丹參中化學成分發生反應還原成Fe2+時, 與高錳酸鉀發生反應形成有色溶液, 溶液的顏色越深, 表示化學成分的還原能力越強［6］。

實驗方法：在試管中放入2 ml的丹酚酸A樣品, 加入3 ml硫酸亞鐵緩沖溶液(pH 6.7；0.3 mmol/L), 3 ml高錳酸鉀溶液, 攪拌均勻, 在常溫中放置2 h, 后加入純凈水3 ml, 測得丹酚酸A的還原能力。見表2。

表1 丹酚酸B對OH分子的清除率(%)

表2 丹酚酸A的還原能力

4 討論

丹參是一種唇形科鼠尾草屬植物, 我國中醫學對于丹參在病理治療方面有著獨特的研究, 是傳統中醫學中經常使用的一種藥材, 且丹參中所含的化學成分非常豐富, 能夠制成抗氧化劑, 并廣泛應用于治療各種疾病中。醫學界目前對于水溶性酚酸類化學成分的研究有許多新發現, 其中表面丹參中的化學成分具有較強的抗氧化活性效果, 有著非常好的藥用價值。

丹參能夠效預防心腦血管疾病, 能夠發揮擴張血管、防止腦血栓作用。而丹參有特殊的化學成分, 有較強的抗氧化活性, 具有能夠有效預防心腦血管疾病發展、擴張血管、防止腦血栓等藥用價值。丹參中的化學成分廣泛應用在臨床治療心腦血管疾病中的藥物制作中, 如復發丹參丸、丹參注射液、復方丹參口服液等。本文主要討論了丹參的化學成分分離以及丹參化學成分抗氧化活性的實驗, 實驗證實了丹參具有很好的抗氧化活性作用。

［1］余世春, 琚小龍, 段廣勛. 丹參的化學成分和藥理活性研究概況(綜述). 安徽衛生職業技術學院學報, 2002, 1(2):43-47.

［2］梁曉原. 云南丹參酚酸類成分水醇法制備工藝的初步研究. 云南中醫學院學報, 2001, 24(4):6-8.

［3］王志平, 范晉勇.丹參提取液的樹脂吸附及醇沉工藝對比研究.離子交換與吸附, 2013, 19(6):554-560.

［4］任德成, 杜冠華, 張均田.總丹酚酸對腦缺血再灌注性損傷的保護作用.中國藥理學通報, 2002, 18(2):275-277.

［5］杜冠華, 裘月, 張均田.丹酚酸 A 對大鼠心肌缺血再灌注性損傷的保護作用.藥學學報, 1995, 30(10):731-735.

［6］劉穎琳, 劉耕陶.丹酚酸 A 體外對人血清低密度脂蛋白氧化修飾的抑制作用.藥學學報, 2002, 37(2):81-85.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.21.209

2015-07-13］

462000 漯河市第二人民醫院藥劑科