滸苔粉對肉雞免疫機能及盲腸微生物區系的影響

王述柏，史雪萍，周傳鳳，朱風華，林英庭

（青島農業大學動物科技學院，山東 青島266109）

目前全世界海藻粉產量達5萬噸，許多國家建有海藻飼料加工廠，將海藻粉作為飼料添加劑廣泛應用于畜禽飼養，我國海藻粉的生產及應用還處于起步階段[1]。滸苔（Entermorpha prolifera）屬綠藻門石莼目石莼科滸苔屬的藻類植物，具有味道鮮美、營養全面、藻體嫩綠、野生資源豐富、極易生長繁殖等特點，是一種極具開發價值的海洋藻類。據報道，飼喂滸苔粉可明顯降低肉兔血液低密度脂蛋白膽固醇和甘油三酯的含量[2]，提高生長豬日增重和料重比[3]，提高肉雞胃腸道消化酶活性和飼料利用率[4-5]。目前有關滸苔粉在畜禽體內的作用機制、適宜添加方式及合理添加水平等有待于進一步探討。本試驗在前期研究的基礎上，研究了肉雞飼糧中不同滸苔粉添加水平對其免疫機能及腸道微生物群落的影響，旨在為新型非常規飼料資源-滸苔粉在家禽生產中的合理開發應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗動物：400只1日齡健康愛拔益加（AA）肉仔雞（購自青島正大集團肉種雞場）。

滸苔粉常規營養成分含量經實驗室測定分別為：粗蛋白9.15%，粗纖維6.02%，粗脂肪0.75%，灰分27.11%，鹽分8.42%，鈣1.46%(均為干物質中所占比例)。

疫苗：新支妥（雞新城疫LaSota株+傳支H120二聯疫苗）、銳必法（雞傳染性囊病耐熱保護劑活苗）和雞新城疫Ⅳ系（均購自普瑞生物藥業有限公司）。

1.2 試驗設計 供試雞按完全隨機原則分為4組。每組5個重復，每重復20只。第1組為對照組，飼喂基礎飼糧，第2組、第3組和第4組于基礎飼糧中分別添加1%、2%、4%滸苔粉，第2組、第3組和第4組飼糧中食鹽添加量分別減少0.08%、0.17%、0.25%（使各組飼糧食鹽含量均為0.35%）,其他組成成分與對照組相同。預試期5 d，正試期30天。基礎飼糧組成及營養水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養水平

1.3 免疫程序 1日齡檢測試驗雞新城疫母源抗體效價平均為5（log2），各組間無顯著差異。試驗雞免疫程序見表2。

1.4 飼養管理 試驗雞均按肉雞飼養管理規程常規飼養，自由采食、飲水，飼養管理條件完全一致。

表2 試驗雞免疫程序

1.5 檢測指標及方法

1.5.1 免疫學指標 分別于21日齡、35日齡，自各試驗組隨機取5只雞，每重復1只，心臟采血，2 mL加抗凝劑，用于檢測淋巴細胞轉化率，2～3 mL不加抗凝劑，制備血清，-20℃保存，用于檢測新城疫抗體效價。

新城疫抗體效價和淋巴細胞轉化率：新城疫抗體效價采用HI試驗測定，結果以log2的平均值表示。血液淋巴細胞轉化率采用MTT法測定，結果以刺激指數（SI值）表示[6]。

免疫器官指數：各試驗組隨機取5只雞，每重復1只，21日齡和35日齡屠宰后摘取肉雞免疫器官（胸腺、脾臟、腔上囊）并稱重。計算免疫器官指數。

免疫器官指數（g/kg）=免疫器官重量（g）/活重（kg）×100%。

1.5.2 盲腸微生物群落 試驗雞于42日齡早飼前，自每組每重復隨機取1只雞，頸動脈放血處死，迅速剖腹并結扎盲腸的開口端，滅菌手術刀切取盲腸，酒精棉球消毒結扎開口端后，放入已滅菌塑料袋中。在超凈工作臺上立即稱取0.50 g盲腸內容物于已滅菌試管中，加入滅菌稀釋液4.5 mL，加入滅菌玻璃珠，用力振搖使之充分溶解，靜置15min，逐級稀釋至10-3～10-7倍，分別吸取稀釋液10μL，大腸桿菌接種于麥康凱培養基，37℃培養24 h，乳酸桿菌和雙歧桿菌分別接種于MRS培養基和TPY瓊脂培養基，37℃厭氧培養48 h，每個稀釋度做兩個重復。選擇最適宜的稀釋梯度（以20～300個菌落為宜），對3種微生物進行平板菌落計數，求其平均值并計算每克腸道內容物所含的細菌數。數據以每克盲腸內容物中菌落（CFU）的對數值（log CFU/g）表示[7]。

2 數據處理

試驗數據采用Excel軟件整理，SPSS11.5軟件One-way ANOVA進行方差分析，LSD法進行組間差異顯著性檢驗。表中數據以“平均數±標準差”表示。

3 結果與分析

3.1 滸苔粉對肉仔雞血清新城疫抗體效價的影響 肉仔雞血清新城疫抗體效價見表3。由表3可知，21日齡時各試驗組均顯著高于1組（對照組）（P＜0.05）；35日齡時2組、3組、4組分別較對照組高6.20%、16.80%、13.40%，3組、4組與對照組差異顯著（P＜0.05）。

表3 肉仔雞血清新城疫抗體效價 （log2）

3.2 滸苔粉對肉仔雞血液淋巴細胞轉化率的影響

肉仔雞血液淋巴細胞轉化率見表4。由表4可知，試驗組淋巴細胞轉化率均不同程度高于對照組。21日齡，2組、3組和4組顯著高于1組（P＜0.05）；35日齡，2組和3組極顯著高于1組（P＜0.01）；4組顯著高于1組（P＜0.05）。

表4 肉仔雞血液淋巴細胞轉化率 （SI值）

3.3 滸苔粉對肉仔雞免疫器官指數的影響 肉仔雞免疫器官指數見表5。由表5可知，各試驗組肉雞的胸腺指數和腔上囊指數與對照組（1組）無顯著差異（P＞0.05）。21日齡，3個試驗組肉仔雞的脾臟指數均略高于對照組，差異不顯著（P＞0.05）；35日齡，3個試驗組脾臟指數均顯著高于對照組（P＜0.05)。

表5 肉仔雞免疫器官指數 （g/kg）

3.4 滸苔粉對肉仔雞盲腸微生物區系的影響肉仔雞盲腸微生物數量見表6。由表6可知，盲腸大腸桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌數量各組間差異均不顯著（P＞0.05）。

4 討論

4.1 滸苔粉對肉雞免疫機能的影響 雞血清抗體效價和血液淋巴細胞轉化率可分別反映其體液免疫和細胞免疫能力。鐘禮云[8]、徐大倫等[9]研究發現，滸苔多糖和滸苔的甲醇提取物均能夠明顯促進T、B淋巴細胞的增殖反應。本試驗表明，飼糧中添加滸苔粉可不同程度提高肉仔雞新城疫抗體效價，提高肉仔雞血液淋巴細胞轉化率，脾臟指數亦均高于對照組，說明滸苔粉對肉雞免疫能力有促進作用。滸苔粉含有豐富的硫酸多糖，硫酸多糖可通過與淋巴細胞和吞噬細胞表面的受體結合、調節環磷酸腺苷（cAMP）和Ca2+等信使分子的濃度，影響細胞內的信息傳遞過程，誘生酶及多種細胞因子，激活補體、巨噬細胞和T、B淋巴細胞等來增強機體的免疫[8-10]，可見，滸苔粉提高動物免疫機能的作用機制與其所含的生物活性成分有關。

4.2 滸苔粉對肉仔雞腸道微生物的影響 呂琴等[11]報道，不同種類海藻對大鼠盲腸內微生物區系及腸內環境具有不同的影響。滸苔粉含有多種生物活性成分，主要有滸苔多糖、脂溶性色素、蛋白質多肽、甾醇、脂肪酸等[12]。李凌緒等[13]報道，滸苔的乙醇提取物對甜椒灰霉菌、鏈格孢菌有較強的抑制作用。孫國強等[14]報道，滸苔粉對奶牛牛糞中大腸桿菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌菌落數無顯著影響。本試驗結果表明，試驗組肉仔雞盲腸乳酸桿菌、雙歧桿菌的數量有提高的趨勢，但與對照組無顯著差異，對肉仔雞盲腸大腸桿菌數量亦無顯著影響。

4.3 滸苔粉的應用前景及存在問題 海藻飼料是一種極有研究價值、經濟價值和開發利用潛力的野生飼料資源。滸苔粉作為飼料產品的研究開發雖已取得了一定的進展，但存在很多不足，如因不同種類、不同產地滸苔粉營養成分的較大差異性，導致其在飼料中應用方法的不統一；高鹽分滸苔的脫鹽處理技術；滸苔配套配方技術的實際測定等，上述問題有待進一步研究。

5 結論

飼料中添加1%～4%滸苔粉，可顯著提高肉仔雞血清新城疫抗體效價、血液淋巴細胞轉化率和脾臟指數，對盲腸大腸桿菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌數量無顯著影響。可見，飼用滸苔粉可提高肉仔雞免疫能力。

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