扶正化積合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

仕海濤

山東省日照市婦幼保健院，山東日照276826

扶正化積合劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

仕海濤

山東省日照市婦幼保健院，山東日照276826

目的建立扶正化積合劑的質(zhì)量控制方法。方法對(duì)扶正化積合劑中黃芪、淫羊蕾、三七進(jìn)行薄層色譜鑒別;采用高效液相色譜法對(duì)黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果扶正化積合劑中黃芪、淫羊蕾、三七的薄層色譜均斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無(wú)干擾;黃芪甲苷進(jìn)樣量在0.2102～4.2040 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9997)，平均回收率為96.8%，RSD為0.87%(n=6)。結(jié)論本研究建立的薄層色譜法和高效液相色譜法專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，可用于扶正化積合劑的質(zhì)量控制。

扶正化積合劑;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);薄層色譜法;高效液相色譜法;黃茂甲苷

扶正化積合劑是山東省日照市婦幼保健院(以下簡(jiǎn)稱“我院”)自行研制用于治療氣虛血疲、痰濕積聚，癥見疲乏無(wú)力、四肢倦怠、精神不振，痰涎壅盛，舌體胖、舌質(zhì)黯或有疲斑、疲點(diǎn)，苔厚膩，脈沉弦滑的醫(yī)院制劑，處方由黃芪、炙黃芪、仙鶴草、法半夏、茯荃、三七、雞血藤、淫羊蕾、醋鱉甲、砂仁等十味中藥組方而成，具有補(bǔ)氣扶正、活血化疲、化痰散結(jié)功能，用于晚期肺癌、胃癌、食管癌等見上證者。為了有效控制扶正化積合劑的質(zhì)量，本文參照《中國(guó)藥典》2010年版中的有關(guān)鑒別方法，采用薄層色譜法對(duì)本制劑中三七［1］11、黃芪［1］283、炙黃芪［1］283、淫羊蕾［1］306、進(jìn)行鑒定分析，筆者參照《中國(guó)藥典》2010年版一部黃芪項(xiàng)下黃芪甲苷的含量測(cè)定方法及其有關(guān)資料對(duì)其中的黃芪甲苷含量進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果顯示本方法專屬性強(qiáng)，簡(jiǎn)便易操作，結(jié)果準(zhǔn)確，且重現(xiàn)性好，可用于控制扶正化積合劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-10ATVP高效液相色譜儀及其工作站(日本島津公司);精密電子天平(瑞士Sartorius);HHS21.4電熱恒溫水浴鍋(上海醫(yī)療器械三廠);三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠);HS3120超聲波清洗器(天津市蘭博實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備有限公司);GZX-9076MBE型數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱溫控議(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療儀器廠)。

1.2 試藥

黃芪甲苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):0781-200311);黃芪對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):120974-200609);淫羊蕾對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):120941-200807);三七對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào):110737-200415);甲醇、乙腈為色譜純，水為三重蒸餾水，甲酸、甲醇、乙醇、乙酸乙醋、硫酸、三氯甲烷、正丁醇、丁酮、氨水、三氯化鋁、氫氧化鈉均為分析純，扶正化積合劑(日照市婦幼保健院制劑室制備，批號(hào):140511、140523、140618、10706)，陰性對(duì)照品為我院制劑室制備，所用藥材均符合《中國(guó)藥典》2010年版一部有關(guān)要求;硅膠G薄層板、硅膠H薄層板(青島勝海化工有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

本制劑的鑒別主要是對(duì)君藥(黃芪、炙黃芪)、淫羊蕾、三七進(jìn)行了鑒別。

2.1.1 黃芪的薄層色譜鑒別取本品10 mL，加乙酸乙醋提取3次，每次20 mL，合并乙酸乙醋提取液，濃縮至約1 mL，作為供試品溶液。另精密稱取黃芪對(duì)照藥材1.0 g，并加入乙酸乙醋20 mL，超聲10 min后濾過，濾液濃縮至1 mL左右，將其作為對(duì)照藥材溶液。參考《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB項(xiàng)下的薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn):各吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液均為5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，展開劑為三氯甲烷-甲醇(8.5∶1.5)，進(jìn)行展開，取出并晾干，置NH3蒸氣中熏制，365 nm波長(zhǎng)下行紫外光燈檢視。供試品溶液色譜圖片顯示，在與對(duì)照藥材溶液色譜的相應(yīng)位置處，呈現(xiàn)相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液色譜顯示其他藥味無(wú)干擾。見圖1(封三)。

2.1.2 淫羊藿的薄層色譜鑒別取淫羊蕾苷對(duì)照品，加甲醇制成每1毫升含0.1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取鑒別項(xiàng)下供試品溶液和淫羊蕾對(duì)照品溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以乙酸乙醋-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品色譜顯示其他藥味無(wú)干擾。見圖2(封三)。

2.1.3 三七的薄層色譜鑒別精密量取本品25 mL，加飽和狀態(tài)的正丁醇提取，共計(jì)3次，每次30 mL，合并其提取液，用1%NaOH溶液洗滌，共計(jì)2次，每次25 mL，濾液蒸干，并加入甲醇約2.5 mL溶解，將其作為供試品溶液備用。另取三七對(duì)照藥材1.0 g，加水10 mL，攪勻，加飽和狀態(tài)的正丁醇10 mL，均勻振蕩10 min，放置2 h，離心取上清液，加3倍量的正丁醇飽和水，振蕩均勻，放置并使之分層，取正丁醇層，蒸干，濾液蒸干，并加甲醇約1 mL溶解，將其作為對(duì)照藥材溶液。參考《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB項(xiàng)下薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液均為5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，于低于10℃下以三氯甲烷-乙酸乙醋-甲醇-水(15∶50∶25∶10)的下層溶液作為展開劑，進(jìn)行展開。試驗(yàn)完畢，取出薄層板并晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)清晰顯現(xiàn)。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，有相同顏色的熒光斑點(diǎn)出現(xiàn)，陰性對(duì)照品溶液色譜顯示其他藥味無(wú)明顯干擾。見圖3(封三)。

2.2 檢查

按照《中國(guó)藥典》2010年版附錄ⅠJ合劑項(xiàng)下的要求，進(jìn)行相關(guān)的檢查。

2.2.1 相對(duì)密度相對(duì)密度的檢查按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅦA應(yīng)不低于1.02，采用比重瓶法測(cè)定。結(jié)果顯示，三批樣品(批號(hào):140511、140523、140618)的相對(duì)密度測(cè)定結(jié)果分別為1.06、1.03、1.02。根據(jù)三批樣品測(cè)定的結(jié)果，暫確定本制劑的相對(duì)密度不得低于1.02。

2.2.2 pH值按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅦG法測(cè)定應(yīng)為4.0～6.0。結(jié)果顯示，三批樣品(批號(hào):140511、140523、140618)的pH測(cè)定結(jié)果分別為4.24、4.79、5.24。根據(jù)三批樣品測(cè)定的結(jié)果，暫確定本制劑的pH控制在4.0～6.0。

2.2.3 最低裝量檢查按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅫC最低裝量檢查法。本制劑為多劑量包裝，每一瓶裝量為200 mL。按規(guī)定的方法檢查，結(jié)果表明裝量均不小于標(biāo)示量的97%。

2.3 黃茂甲苷含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件色譜柱:Hypersil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇-水(68∶32);檢測(cè)波長(zhǎng):205 nm;柱溫:40℃;流速:1 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL;黃芪甲苷的保留時(shí)間為:25.971 min。

2.3.2 黃芪甲苷對(duì)照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品10.51 mg，用甲醇定容至25 mL的容量瓶中，制成濃度為0.4204 mg/mL的對(duì)照品溶液備用。

2.3.3 黃芪甲苷供試品溶液的制備精密量取本品20 mL，用飽和的正丁醇溶液提取，共計(jì)3次，每次35 mL，合并濾液，用NH3溶液充分洗滌，共計(jì)2次，每次35 mL，棄去NH3溶液，濾液蒸干，并加水約10 mL振搖溶解，室溫放置，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑d= 1.5 cm，柱高H=12 cm)，洗脫，棄去水液，再加30 mL左右的40%乙醇洗脫，棄去洗脫液，并用80 mL左右的70%乙醇洗脫，收集洗脫液，放干，加甲醇溶液使之溶解，后移入10 mL的容量瓶中，搖勻，即得，備用。

2.3.4 線性關(guān)系考察試驗(yàn)精密吸取黃芪甲苷對(duì)照品溶液0.5、1、2、4、6、8 mL，用甲醇定容至10 mL容量瓶中，并取同黃芪甲苷對(duì)照品溶液10 μL左右分別進(jìn)樣。以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)行線性回歸，結(jié)果回歸方程為:Y=1691.615X+4.154，r=0.9997，線性范圍為: 0.2102～4.2040 μg，表明在此范圍內(nèi)線性關(guān)系較好。

2.3.5 陰性空白試驗(yàn)取缺黃芪、炙黃芪的陰性對(duì)照品按照扶正化積合劑的方法制備相關(guān)溶液，再參考“2.3.3”項(xiàng)下供試品溶液的方法制備陰性對(duì)照品溶液，參考“2.3.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果，在黃芪甲苷對(duì)照品相同位置上無(wú)干擾峰(圖4)，表明處方中其他藥味對(duì)黃芪甲苷的測(cè)定未形成明顯干擾。

2.3.6 精密度試驗(yàn)取對(duì)照品溶液，參考“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)測(cè)定，連續(xù)6次，結(jié)果顯示，對(duì)照品溶液中的黃芪甲苷溶液峰面積的RSD為0.85%(n=6)，提示其精密度試驗(yàn)良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)取樣品溶液，參考“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依據(jù)“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，分別在0、5、10、15、20、25 h進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，在25 h內(nèi)供試品溶液的黃芪甲苷峰面積的RSD為1.04% (n=6)，提示該方法穩(wěn)定性較好。

2.3.8 重復(fù)性試驗(yàn)精密量取同一批號(hào)的樣品(批號(hào): 140511)6份，每份10 mL，參考“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。結(jié)果顯示，供試品溶液中黃芪甲苷的平均含量值為0.1417 mg/mL，RSD為0.63%(n=6)，提示該方法重復(fù)性較好。

2.3.9 加樣回收率試驗(yàn)精密量取已知含量的樣品溶液6份(批號(hào):140511，測(cè)得含量為0.1417 mg/mL)，分別準(zhǔn)確加入黃芪甲苷對(duì)照品，搖晃均勻，參考“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，用外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果顯示，黃芪甲苷的平均回收率為96.8%，RSD為0.87% (n=6)。見表1。

2.3.10 樣品測(cè)定取4個(gè)批號(hào)下的扶正化積合劑(批號(hào):140511、140523、140618、140706)，參考“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依據(jù)“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定其相應(yīng)的峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算樣品的含量，測(cè)定3次，取其平均值。見表2。

3 討論

3.1 試驗(yàn)方法的選擇

本研究利用薄層定性來鑒別黃芪、淫羊蕾、三七，結(jié)果其分離度好，專屬性強(qiáng)。另外，在《中國(guó)藥典》2010年版中，黃芪藥材的含量測(cè)定方法已經(jīng)采用HPLC法［1］［212］，另有資料顯示含黃芪的復(fù)方制劑現(xiàn)多采用HPLC法測(cè)定黃芪甲苷的含量［2-8］。本文采用HPLC法對(duì)扶正化積合劑中黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定，操作簡(jiǎn)單，分離度好，靈敏度高。

3.2 試驗(yàn)波長(zhǎng)的選擇

采用高效液相色譜法測(cè)定黃芪甲苷的含量，需選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)。參考《中國(guó)藥典》2010年版一部項(xiàng)下黃芪采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，由于該檢測(cè)器普及程度低，不便操作，故筆者參照有關(guān)資料［9］選用紫外檢測(cè)器檢測(cè)。由于黃芪皂苷種類較多，結(jié)構(gòu)相近，紫外掃描只在200 nm有末端吸收，因此定在200 nm處檢測(cè)［10-15］，實(shí)驗(yàn)表明，波長(zhǎng)越長(zhǎng)，噪聲越小，但靈敏度越低;越靠近200 nm，靈敏度越高，但噪聲越大，綜合考察這兩個(gè)因素，本實(shí)驗(yàn)選取205 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，測(cè)得的黃芪甲苷峰峰形好，取得了滿意的效果。

3.3 試驗(yàn)流動(dòng)相的選擇

在選用流動(dòng)相時(shí)，筆者分別使用甲醇-水(68∶32)［16］、乙腈-水(32∶68)［17］、(40∶60)［18］、(35∶65)［19-20］、(1∶2)［21-22］等進(jìn)行試驗(yàn)。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)，流動(dòng)相甲醇-水(68∶32)峰形好，響應(yīng)值大，理論板數(shù)高。流動(dòng)相乙腈-水(32∶68)峰形好，理論板數(shù)雖然高，但響應(yīng)值略小，其他3種流動(dòng)相峰形不理想，故筆者以甲醇-水(68∶32)作為流動(dòng)相，取得了滿意的分離效果和測(cè)量效果。

3.4 試色譜條件的選擇

對(duì)樣品制備時(shí)4次正丁醇提取后的水液按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備成樣品，按既定色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果在黃芪甲苷對(duì)照品相同位置處未發(fā)現(xiàn)色譜峰，可見本實(shí)驗(yàn)采用的提取方法提取率高。

綜上所述，本研究建立的薄層色譜法和高效液相色譜法專屬性強(qiáng)，簡(jiǎn)便易操作，結(jié)果準(zhǔn)確，且重現(xiàn)性好，可用于扶正化積合劑的質(zhì)量控制。

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Quality standard of Fuzheng Huaji Mixture

SHI HaitaoRizhao Maternity and Child Care Hospital，Shandong Province，Rizhao276826，China

Objective To establish the method for quality control of Fuzheng Huaji Mixture.Methods Astragali Radix，Eplmedii Folium，Notoginseng Radix Et Rhizoma in Fuzheng Huaji Mixture were indentified by TLC.The content of AstragalosideⅣin Fuzheng Huaji Mixture was determined by HPLC.Results The spots of Astragali Radix，Eplmedii Folium，Notoginseng Radix Et Rhizoma in Fuzheng Huaji Mixture on the TLC plate were clear，and the negative control sample had no interference，a good linearity was obtained for AstragalosideⅣin the range of 0.2102-4.2040 μg(r= 0.9997).The average recovery was 96.8%，RSD=0.87%(n=6).Conclusion The method is specific，accurate and reproducible，it can be used for quality control of Fuzheng Huaji Mixture.

Fuzheng Huaji Mixture；Quality standard；TLC；HPLC；AstragalosideⅣ

R284

A

1673-7210(2015)02(c)-0091-04

2014-11-22本文編輯:衛(wèi)柯)