電針豐隆穴對高脂血癥大鼠血脂及肝臟組織炎癥細胞因子的調控作用

樂薇，張紅星，王瓊，黃國付，周利，覃鵬飛

高脂血癥是指由于機體脂類代謝失調而導致血液中一種或幾種脂質或成分明顯異常。高脂血癥是動脈粥樣硬化形成的危險因素之一，脂質在血管內皮沉積而引起動脈粥樣硬化產生冠心病和周圍血管病變，機體炎癥在此類疾病的發生、發展過程中起到關鍵作用。近幾年非藥物療法治療高脂血癥受到重視，尤其是臨床應用針刺療法治療高脂血癥，有了較大的進展，療效也較為顯著，顯示出獨特的優勢[1]。本實驗通過觀察電針豐隆穴對高脂血癥大鼠肝臟組織中腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白細胞介素-1β(interleukin-1β， IL-1β)、干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)的蛋白水平變化的影響，明確電針通過抑制促炎反應從而達到對高脂血癥的治療作用。

1 材料與方法

1.1 材料 ①實驗動物：SPF級健康SD雄性大鼠30只，體質量180～200g，由湖北省動物實驗中心提供，動物合格證號為[SCXK(鄂) 2008-0004]。②主要試劑與儀器：大鼠TNF-α、 IL-1β、IFN-γ的ELISA檢測試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技有限公司)，OLYMPUS AU2700型全自動生化分析儀(日本OLYMPUS公司)，LH202H型韓氏穴位神經刺激儀(北京華威有限公司)，32#1寸健衛士牌不銹鋼針灸針(長25mm，直徑0.25mm，型號S3210，中美合作泰成科技發展有限公司)。

1.2 方法 ①分組及處理：30只大鼠隨機分為3組：正常組、模型組、電針組，每組10只大鼠。正常組：普通飼料喂養8周，期間不予任何治療；模型組：高脂飼料喂養4周，造模成功[2]+高脂飼料繼續喂養4周，期間不予任何治療；電針組：高脂飼料喂養4周，造模成功+(高脂飼料+電針豐隆穴)4周。②造模：模型組、電針組大鼠用高脂飼料(豬油10%，蛋黃粉5%，膽固醇1%，丙基硫氧嘧啶0.2%，脫氧膽酸鈉0.5%，蔗糖5%，基礎飼料78.3%)喂養[3]。③治療方法：取穴參照《實驗針灸學》[4]，選取雙側豐隆穴，模擬人體經穴定位。豐隆穴在大鼠膝關節外側后三里下1mm，腓骨小頭下約5mm 處。用32#1寸針灸針，對豐隆穴直刺7mm，快速捻轉至針下沉澀感后，接韓式穴位神經刺激儀，等幅疏密波，頻率為2～100Hz，電流強度2mA，以動物肢體微顫為度，每次治療30min，每天1次，連續30d。常規溫度、濕度及統一飲水喂養。

1.3 評定標準 ①所有大鼠通過腹主動脈采血4～5ml，送我院檢驗科，采用全自動生化分析儀，檢測血漿中總膽固醇(Total cholesterol，TC)、甘油三酯(Triglyceride，TG)、高密度脂蛋白(High-density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白(Low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)含量。②ELISA檢測大鼠肝臟組織炎癥因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ的蛋白水平變化：將大鼠肝臟組織加入適量生理鹽水搗碎，然后1000r/min離心10min，取上清液。設標準孔8孔，每孔中各加入100μl 標準品稀釋液，第1孔中加入1000pg/ml的標準品100μl，混勻后從第1孔中用加樣器吸出100μl移至第2孔，混勻后用加樣器再吸出100μl 移至第3孔，如此反復作對倍稀釋至第5孔，最后，從第7孔中吸出100μl棄去，使之體積均為100μl。第8孔為空白對照，在反應板待測品孔中，每孔各加入待測樣品100μl；將反應板充分混勻后置37℃孵育120min；用稀釋20倍后的洗滌液將反應板充分洗滌5次，放濾紙上印干；標準孔及待測品孔中各加入第一抗體工作液50μl；將反應板置37℃孵育60min，洗板，每孔各加入酶標抗體工作液100μl；將反應板置37℃ 60min；洗板；每孔各加底物工作液100μl，并將反應板置37℃暗處5～10min；每孔各加入50μl(1滴)終止液混勻；在492nm 處測吸光值(OD450)。以標準品的濃度為橫軸，OD值為縱軸在半對數紙上作圖，畫出標準曲線；根據樣品之OD值在該曲線上查出相應蛋白含量。

2 結果

治療30d后，各組大鼠血脂水平比較，與正常組比較，模型組大鼠TC、TG及LDL-C均顯著升高(P<0.01，0.05)，HDL-C顯著降低(P<0.05)；與正常組比較，電針組的TC、LDL-C均顯著升高(P<0.01)，TG、HDL-C差異無統計學意義。與模型組比較，電針組大鼠TC、TG及LDL-C均顯著降低(P<0.01，0.05)，HDL-C顯著升高(P<0.05)。見表1。

各組大鼠肝臟組織炎癥因子蛋白水平比較，與正常組比較，模型組炎癥因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ均有顯著性升高(P<0.05，0.01)。與正常組比較，電針組炎癥因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ差異均無統計學意義。與模型組比較，電針組炎癥因子均有明顯降低(P<0.05，0.01)。見表2。

組別nTCTGHDL-CLDL-C正常組101.58±0.360.49±0.210.88±0.280.23±0.07模型組1011.05±3.01b0.68±0.19a0.62±0.19a5.34±1.11b電針組104.89±0.81bd0.51±0.17c0.78±0.12c1.15±0.28bd

與正常組比較，aP<0.05，bP<0.01；與模型組比較，cP<0.05，dP<0.01

組別nTNF-αIL-1βIFN-γ正常組10320.65±101.68101.33±55.32141.85±87.66模型組10890.37±109.89b340.47±67.68b267.89±89.73a電針組10416.32±102.86d159.31±68.57d179.21±87.89c

與正常組比較，aP<0.05，bP<0.01；與模型組比較，cP<0.05，dP<0.01

3 討論

高脂血癥是現代醫學的名詞，中醫學并無高脂血癥的病名，根據臨床表現將其歸入“眩暈”、“胸痹”、“血瘀”、“痰濕”等病證范疇[5]。中醫學對于高脂血癥的認識源于《內經》的“膏脂學說”，膏源于水谷，屬津液之一，并能化入血中，是人體營養物質之一，脂亦源于水谷，為津液中之精微，過多的脂則形成膏。針灸療法對脂質及脂蛋白的代謝具有良性的雙向調節作用，豐隆穴是經過臨床檢驗的能調節血脂水平的有效經驗用穴[6]。豐隆穴屬足陽明胃經的絡穴，可以聯絡胃、脾二經。因此針刺該穴具有“一絡通二經”之效，能疏通表里兩經之氣血，和胃健脾、化痰利濕，為祛痰要穴。

膽固醇是人體生命活動的重要物質基礎，它參與構成細胞膜，也是合成體內激素的重要成分之一[7]。HDL-C將各組織中的膽固醇轉送到肝臟進行代謝，而LDL-C的作用是將膽固醇從肝臟運送至全身組織。當LDL-C過量時，它攜帶的膽固醇便積存在動脈血管壁上，誘發動脈粥樣硬化，因此LDL-C也被稱為“壞的膽固醇”[8]。本研究結果表明，經過8周后，模型組大鼠血脂各項指標較正常組均有明顯差異性，表明較長時間的高脂飲食導致大鼠體內脂質代謝紊亂，具有嚴重的危害性。電針組的TG、HDL-C與正常組比較沒有顯著差異性，而且其與模型組比較大鼠血脂各項指標均有明顯差異性，說明電針豐隆穴能顯著降低TC、LDL-C的水平，促進膽固醇從外周組織轉送至肝臟，對治療高脂血癥具有非常顯著性的效果。

大量研究數據表明[9]，長期血脂代謝異常會導致單核/巨噬細胞的數量增多，加劇血管內皮細胞損傷，脂質代謝清除障礙，這就是炎癥的起始階段。IFN-γ最初叫巨噬細胞活化因子，可介導T細胞對巨噬細胞的激活，促進IL-1、6、8，TNF-a等炎癥因子的分泌。TNF-α是介導肝臟損傷的主要因子，在肝臟脂質代謝障礙中扮演了重要角色[10]。研究表明TNF-α可降低胰島素對其受體的誘導活化，下調胰島素受體、過氧化酶體增殖物激活受體-γ等的表達[11]，從而影響葡萄糖和脂肪的代謝。高濃度的TNF-α可減少外周組織脂肪分解，并促進肝細胞TG的合成及聚集，從而加速肝臟脂肪沉積的進程。IL-1β作為炎癥細胞分化的主要調節因子，促進激活的巨噬細胞分化和浸潤，還能可以上調黏附分子和其他細胞因子的表達，從而加強炎癥反應[12-13]。

本試驗顯示，與正常組比較，模型組炎癥因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ均有顯著性升高，提示高脂血癥模型大鼠處于炎癥狀態，炎癥因子的表達與血脂水平呈正相關表明血脂異常、炎癥反應之間存在著相互誘導、相互協同的密切關系。

國外研究發現他汀類降脂藥物具有參與對細胞增殖、凋亡、細胞內信號轉導等多種功能的調控、抑制炎癥反應等降脂以外的作用[14]。從本次試驗結果：電針組炎癥因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ較正常組均無顯著差異性；而與模型組比較，電針組炎癥因子均有明顯降低。因此，我們可以推論出針刺豐隆穴能有效抑制促炎癥因子的釋放，通過減輕高脂血癥所引發的機體內環境的炎癥級聯反應，能在一定程度上減緩高脂血癥疾病的進展，達到調節血脂的目的，對臨床上針刺豐隆穴治療高脂血癥疾病的有效性提供理論支持。

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