HPLC法同時測定強力腦清素片中紫丁香苷與異嗪皮啶含量

董 芳

（臨沂市藥品不良反應監測中心，山省臨沂276000）

HPLC法同時測定強力腦清素片中紫丁香苷與異嗪皮啶含量

董 芳

（臨沂市藥品不良反應監測中心，山省臨沂276000）

目的應用高效液相色譜法同時測定強力腦清素片中紫丁香苷、異嗪皮啶的含量。方法采用高效液相色譜法，Agilent SB－C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；檢測波長265 nm；柱溫：40℃；流動相A為1%冰醋酸水溶液，B為乙腈，執行梯度洗脫程序。結果系統適應性試驗精密度、重復性、穩定性、回收率均符合規定，紫丁香苷與異嗪皮啶平均回收率分別為101.65%、99.37%，RSD分別為1.27%、0.94%。結論該方法簡便、快速、準確、可靠，可用于強力腦清素片的質量控制。

強力腦清素片；高效液相色譜法；紫丁香苷；異嗪皮啶

強力腦清素片載于《衛生部藥品標準》中藥成方制劑第十七冊，系由刺五加浸膏、五味子浸膏、鹿茸精等藥材組成的中藥復方制劑。功能為補腎健脾、養心安神。臨床主要用于脾腎兩虛，心神失養引起的心悸失眠，食欲不振，神疲乏力，尿頻陽痿，神經衰弱，非器質性性功能衰退及婦女更年期綜合癥見上述證候者。因原標準中無含量測定項目，刺五加浸膏又是主要有效部位，為保證該復方制劑的臨床應用有效，特在原質量標準中，增加了對刺五加流浸膏的主要成分紫丁香苷、異嗪皮啶兩種有效成分的含量測定，以期達到對其質量標準提高與完善提供數據支持。本文采用高效液相色譜（HPLC）法同時測定兩種有效成分的含量，并對色譜條件進行了方法學驗證與考察，結果表明此法簡便、準確、重現性好。

1 實驗材料

1.1 樣品來源 強力腦清素片（廣州白云山和記黃埔中藥有限公司、哈藥集團三精制藥四廠有限公司、亞寶藥業集團股份有限公司）。

1.2 儀器與試藥 Agilent 1260高效液相色譜儀：四元泵，在線脫氣機，自動進樣器，二極管陣列檢測器（DAD）；Agilent Chem Station色譜工作站；紫丁香苷（中國食品藥品檢定研究院，批號：111574－200603）；異嗪皮啶（中國食品藥品檢定研究院，批號：110837－201206）。乙腈、甲醇為色譜純、冰醋酸為分析純。

2 方法與結果［1～10］

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent SB－C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；檢測波長265 nm；柱溫：40℃；流動相：A－1%冰醋酸水溶液，B－乙腈；進樣量：10μL；流速：1 mL·min－1；按表1梯度程序進行洗脫，檢測時間40 min。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取對照品紫丁香苷、異嗪皮啶對照品，7.50 mg，12.32 mg，置200 mL量瓶中，加50%甲醇適量超聲溶解，并定容至刻度，搖勻，得混合對照品溶液，結果見圖1。

表1 梯度洗脫程序

圖1 混合對照品溶液色譜圖

圖2 樣品溶液色譜圖（紫丁香苷、異嗪皮啶）

2.3 供試品溶液制備 稱取強力腦清素片粉碎形成的粉末0.5 g，置25 mL量瓶中，加50%甲醇20 mL，浸潤，超聲30 min，于室溫放冷，加50%甲醇定容至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，即得，結果見圖2。

2.4 標準曲線的制備 精密吸取“2.2”項下混合對照品溶液適量，分別按2、4、6、8、10、20μL進樣，按“2.1”項下色譜條件測定兩種組分的峰面積，以峰面積對濃度進行線性回歸，繪制標準曲線，求得各自的回歸方程，分別為Y＝229．23X－2．347 7，r＝0．999 9；Y＝2 843X＋32．18，r＝0.999 9。結果表明兩個組分在各自濃度范圍內呈良好的線性關系，線性范圍為0.075～0.75μg、0.123 2～1.232μg。

2.5 精密度試驗 按“2.1”項下色譜條件混合對照品溶液重復進樣6次，進樣量10μL，紫丁香苷、異嗪皮啶的峰面積的RSD分別為0.48%、0.52%（n＝6）。結果表明，儀器進樣精密度良好。

2.6 重復性試驗 精密稱取同一批號的供試品6份，按“2.1”項下條件進行測定，計算測得紫丁香苷、異嗪皮啶含量的RSD分別為1.14%、1.17%（n＝6）。

2.7 穩定性試驗 取于室溫放置的供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12、16 h進樣測定。紫丁香苷、異嗪皮啶峰面積的RSD分別為1.32%、1.11%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下16 h內穩定。

2.8 加樣回收率試驗 分別精密稱取已知含量的樣品粉末6份，每份精密加入混合對照品溶液2 mL，加甲醇適量，超聲溶解，并定容至刻度，搖勻，以0.45μm微孔濾膜濾過，按“2.1”項下色譜條件測定各組分的含量，計算回收率。紫丁香苷、異嗪皮啶的平均加樣回收率分別為101.65%、99.37%，RSD分別為1.27%、0.94%。

2.9 樣品的測定 精密稱取樣品3批，按“2.3”項下方法制備供試品溶液。按照“2.1”項下色譜條件進行測定。根據峰面積積分值，采用外標法計算出各組分的含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定

3 討論

考慮到兩個成分要同時檢出，結合DAD檢測器的特性，開通220、254、265、300、320 nm 5個通道，異嗪皮啶確實最大吸收在344 nm，參照《中國藥典》2010年版（一部），在220 nm測定3種成分。用3 d等吸收線，265 nm與344 nm確實吸收度有差異，因顧慮到紫丁香苷是主流質控指標，就偏向使用265 nm，也并未多開通一個344 nm的通道，也可以用可變波長方式來實現。異嗪皮啶的峰是標準品的濃度偏小，在樣品中，異嗪皮啶的峰的吸收度不是很小。所以最終選擇220 nm作為檢測波長，本試驗在綜合各波長的基礎上，選擇265 nm作為檢測波長，兼顧兩種成分的檢出，保證試驗結果的可靠性與準確性。

目前，隨著《中國藥典》2010年版（一部）對多種成分控制中藥質量的方法收載的頻次逐步增多，多種成分同方法同時檢測逐步成為質量控制的必然要求，對中藥質量監控的全面性與系統性提出了更高的要求。本試驗在衛生部藥品標準的基礎上，建立了紫丁香苷、異嗪皮啶同時測定HPLC方法，為以后該產品標準的升級與完善提供參考數據，相信隨著研究的深入，以后會有更多的技術手段與方法將多藥味多種成分同時測定進行整合。

［1］ 葉文婷，盧綿，歐陽惠芳，等.HPLC法測定強力腦清素片中紫丁香苷含量［J］.今日藥學，2009，19（12）：52－53.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版第三增補本［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2014：80.

［3］ 丁海昕，韓秋云，蘇海波，等.強力腦清素片質量標準研究［J］.海峽藥學，2008，20（4）：16－19.

［4］ 鄭清瑗，李書淵，仇潔.強力腦清素片中異秦皮啶的含量測定［J］.中藥材，2003，26（11）：814.

［5］ 王洪杰，曲艷，邱宇虹.通過HPLC法測定異嗪皮啶含量提高強力腦清素片質量標準［J］.黑龍江醫藥，2011，24（3）：351－352.

［6］ 周國平，張莉靜.刺五加片中總異秦皮啶含量的高效液相色譜法研究［J］.中成藥，2001，23（2）：92－94.

［7］ 陳廣耀，盧承前，馬雙成.反相高效液相色譜法測定刺五加片中紫丁香甙的含量［J］.中國中藥雜志，1999，24（8）：472－473.

［8］ 王龍云.黃芪刺五加片中紫丁香苷含量測定［J］.中醫藥信息，2010，27（2）：95－96.

［9］ 杜波，王金杰，荊維榮.高效液相色譜法測定復方刺五加片中紫丁香苷的含量［J］.黑龍江醫藥，2011，24（1）：6－7.

［10］張崇禧，張倩，蔡恩博，等.HPLC比較刺五加莖與短梗五加莖中紫丁香苷及異嗪皮啶的含量［J］.中成藥，2010，32（2）：254－256.

Simultaneous determ ination of syringoside and isofraxidin in Qiangli Naoqingsu Tablets by HPLC

DONG Fang
（Linyi Center for Adverse Drug Reaction Monitoring，Linyi276000，China）

ObjectiveTo establish an HPLCmethod for simultaneous determination of syringoside and isofraxidin in Qiangli Naoqingsu Tablets.MethodsHPLC method was adopted with Agilent SB－C18column（4.6 mm×250 mm，5 μm）.The detection wavelength was 265 nm，the column temperature was 40℃.The mobile phase A was solution of 1% acetic acid and mobile phase B was acetonitrile by gradient elution.ResultsThe precision，repeatability，stability and recovery of system suitability test were in line with regulations.The average recoveries of syringoside and isofraxidin were 101.65%，99.37%with RSD of1.27%，0.94%，respectively.ConclusionThemethod was simple，rapid，accurate，reliable，and can be used for the quality control of Qiangli Naoqingsu Tablets.

Qiangli Naoqingsu Tablets；HPLC；Syringoside；Isofraxidin

R927.2

A

2095－5375（2015）08－0444－003

董芳，女，副主任藥師，研究方向：藥品檢驗，E－mail：271056705＠qq.com