豬細小病毒病的診斷及防治措施

劉歡+劉好朋++賀東生

摘要：從臨床癥狀、病理變化、診斷方法等多方面詳細介紹了豬細小病毒病的發病特點、診斷和預防措施，旨在引起獸醫工作者對該病的重視，同時也為豬場診斷、預防該病提供理論基礎。

關鍵詞：豬細小病毒；臨床癥狀；診斷方法；防制措施

中圖分類號：S858.28 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2014）12-0019-02

豬細小病毒病是由細小病毒（PPV）引起的豬傳染病，廣泛存在于豬群中，感染率高，一些養殖戶仔豬出生后死亡的現象越來越突出，造成很大經濟損失。2014年7月，韶關市某豬場發現以1～2胎為主的新母豬發病，表現為分娩延遲，產死胎、木乃伊胎，有部分健康活仔，窩產仔數偏少，母豬均表現正常，發病率100%。筆者經臨床檢查、解剖觀察、實驗室檢驗等方法確診為豬細小病毒病，現將該病的診療情況進行報告，并結合實際經驗，對豬細小病毒病的防治措施進行介紹。

1 臨床癥狀

1.1 母畜生殖障礙

PPV感染的主要臨床癥狀是母畜生殖障礙，表現為頭胎或經產母豬產出大部分死胎、木乃伊胎、畸形胎及正常胎兒，或產少數不久即死的虛弱仔豬。

1.2 生殖臨床癥狀

生殖臨床癥狀與發生感染的妊娠階段有關。妊娠母豬特別是頭胎的妊娠母豬如感染該病，在其全部妊娠期內均可發生流產。當妊娠早期（6～35 d）受到感染時，胎兒死亡率可高達80%～100%，母豬迅速吸收死亡胎兒，導致不孕和重復發情[1]；母豬在妊娠中期（35～70 d）感染病毒后，常形成不同程度的木乃伊胎兒，在分娩時排出；母豬在妊娠中期（70～114 d）感染病毒后，因胎兒自身免疫反應而抵御病毒得以存活，但長期帶毒[2]。一般來講，母豬在免疫中后期感染病毒后死產發生率10%[3]。公豬感染后，受精率或性欲沒有明顯的影響，但成為長期帶毒者。

2 病理變化

2.1 母豬

母豬流產時，肉眼可見子宮內膜有輕微炎癥，胎盤部分鈣化，胎兒在子宮內死亡后被軟組織吸收。組織學病變為母豬的妊娠黃體萎縮，子宮上皮組織和固有層有局灶性和彌散性單核細胞浸潤。感染胎兒死后可見多種組織和器官有范圍廣泛的細胞壞死、炎癥和核內包涵體[4]。

2.2 胎兒及仔豬

大多數死胎、死仔或弱仔可見皮下充血或水腫、出血、體腔積有淡紅或淡黃色滲出液、脫水等；肝、脾、腎有時腫大、脆弱或萎縮；個別死胎、死仔皮膚出血，弱仔生后半小時先在耳尖，后在頸、胸、腹部及四肢上端內側出現淤血、出血斑，半天內皮膚變紫而死亡。組織學檢查，可見死胎或死仔大腦灰質、白質和軟腦膜有以增生的外膜細胞、組織細胞和漿細胞形成的血管套為特征的腦膜腦炎變化，一般認為是豬細小病毒感染的特征性病變[5]。

3 實驗室檢驗

根據流行病學臨床癥狀和病理變化可做出初步診斷，確診需進一步做實驗室診斷。

3.1 細菌培養

無菌采集病死豬的淋巴結、肺、肝、脾等病料，將病料接種于麥康凱血瓊脂平板、巧克力瓊脂平板及肉湯培養基中，37℃恒溫培養48 h，未見致病菌生長。

3.2 病原分離

取流產胎兒、死亡仔豬的腦、肺臟、腎等病料經研磨、稀釋、過濾處理后接種PK-15細胞系或者ST細胞系，然后再37℃ 5% CO2條件下培養，進行病毒分離。

3.3 病原鑒定

3.3.1 PPV熒光抗體染色 通過免疫熒光技術觀察胎兒組織的病毒抗原是診斷PPV的最好方法[6]。該方法可直接鏡檢組織冰凍切片。取疑似病豬的扁桃體或者母豬產出的死胎、木乃伊胎，然后將各種組織做冰凍切片，用熒光抗體診斷液染色待檢PPV標本片，將染色標本片置濕盒中，放入37℃培養箱作用30 min。取出用PBS液（pH 7.2～7.6）沖洗和漂洗15 min（中間換液1次），再用去離子水沖洗除鹽，放置標本片讓其自然干燥，然后滴加磷酸甘油，蓋上潔凈的蓋玻片，放于熒光顯微鏡下觀察。若發現細胞內有亮綠色熒光顆粒集結，而對照無現象，則可判定有 PPV 抗原。

3.3.2 PPV酶標抗體直接染色法 在普通生物顯微鏡下觀察染色情況，若未接種PPV的正常對照細胞片中細胞核無棕色著染現象，而接種的PPV的細胞片中細胞核著染，即可確診。

3.2.3 普通RT-PCR方法檢測 根據PPV的基因序列，設計、合成特異性引物，采用普通RT-PCR方法檢測死亡胎兒、仔豬相關組織病料內的PPV，若顯示陽性即說明感染該病毒。

3.3.4 血凝試驗（HA） 在96微孔板中進行，自左至右每孔中預先加入50 μL生理鹽水（或者PBS溶液），然后取病毒原液或者收獲液（將出現病變的細胞培養物反復凍融3次，2 000 r/min離心10 min，除去細胞碎片，收獲病毒液）。自左至右按1∶2、1∶4、1∶2n作倍比稀釋，每孔加入50μL，最后—孔設為對照。后每孔再加入50 μL的0.5%豚鼠紅細胞（或者1%雞紅細胞），在微型振蕩混合器上振蕩1 min混勻后，置37℃溫箱中作用15～30 min，判定結果，以50%的紅細胞能發生凝集判為終點，樣品出現凝集終點的最高稀釋度定為HA滴度。

3.4 抗體檢測

3.4.1 血凝抑制試驗（HI） 取發病仔豬組織浸出液制備成血凝素，并稀釋成8個血凝單位。取患病初產母豬血清1 mL，注入試管中，后再向試管中加入8個凝集單位的血凝集1 mL，搖勻，然后再向試管中加入1%的雞血細胞，置37 ℃恒溫培養箱中30 min，觀察試管中有無凝集現象。以100%抑制凝集的血清最大稀釋度為該血清的滴度，即血清效價。凡是被PPV陽性血清抑制血凝者，該病毒即為PPV[7]。

3.4.2 酶聯免疫吸附試驗（ELISA） 相對于HI是個更好的選擇。鑒別ELISA還可以區別PPV感染的動物和接種疫苗的動物。

4 防制措施

4.1 嚴防引進豬帶毒，發病豬場做好控制

引入豬的健康問題直接影響豬場的安全。豬場應避免從外地購進種豬、仔豬，尤其是禁止從疫區購進。規模化豬場在引進種豬、小型養殖場和家庭豬場在引進仔豬的時候，應選擇規范化的、無規定疫病的豬場，引進時，必須進行檢測，確認抗體為陰性后方可引入，引回的生豬須在本場的隔離圈舍隔離觀察，觀察期限按照當地衛生監督所規定執行，一般為15～30 d。引進公豬精液時，必須進行檢查，PPV陰性者方可使用。發病豬場應特別防止小母豬在第1胎受孕時被感染，或把其配種期拖延到9月齡，因為此時母源抗體已消失[8]。

4.2 嚴格控制豬群，做好隔離和消毒

養殖生產過程中，一旦發現產死胎和木乃伊胎的母豬，必須做到緊急隔離飼養，母豬、仔豬等帶毒豬在隔離過程中，必須配備專門的飼養員、飼養用具等，并與健康豬群所用器具嚴格分開，避免交叉感染。一旦發病，對豬舍徹底清洗消毒，乙醛消毒劑、高濃度的次氯酸鈉（2 500 μg/L）或者7.5%過氧化鈉溶液能達到理想的消毒效果。同時，做好滅蚊、滅鼠工作，避免蚊子等吸血昆蟲的叮咬和疫病傳播。對那些流產或產木乃伊胎同群的幸存仔豬不能留作種用，同樣第1胎發病母豬的后代也不留作種用。對死亡豬、胎兒及病豬的糞便、污物、飼料等進行無害化處理，并加強消毒和定期監測[9]。

4.3 規模豬場應嚴格按照免疫程序做好豬細小病毒的免疫接種工作

選用通過國家GMP體系認證的廠家生產的安全、高效、優質的疫苗，根據豬場的具體情況做好免疫。推薦免疫程序為：新生仔豬PPV疫苗的免疫接種可以選擇在20周齡左右進行，后備種豬要在配種前20 d以前接種，經產母豬應在產后15 d進行，每年接種2次，連續3年即可；種公豬每年春秋兩季分別進行；對于曾發生過PPV病的豬，大多數豬感染后獲得免疫力，體內已產生持續時間長、滴度較高的抗體，可以獲得良好的保護，這些豬不需再接種[10]。

4.4 定期進行免疫抗體監測

頻率一般是每半年進行1次，按飼養數量15%隨機抽樣豬只，采血后進行抗體檢測，以達到掌握豬群免疫水平和免疫效果的目的，根據檢查結果，對抗體保護率不到70%的豬只及時接種，堅決淘汰免疫耐受豬；小型豬場和家庭豬場為確保豬只健康，也必須堅持抗體檢測，特別是在懷疑發病的時候。

實踐證明，豬細小病毒病發病過程中往往引起其他疾病的繼發感染，從而使疾病的診斷、治療變得非常復雜，這也是目前養豬生產中豬病難以診斷和防治的根本原因所在。在養豬生產過程中，應該認真貫徹落實預防保健綜合措施，從根本上減少畜禽疾病的發生，提高養殖生產的經濟效益。

參考文獻：

[1] 饒 霖，劉保群，諸慶衍，等. 豬細小病毒病的防治措施[J].中國畜牧獸醫文摘，2013，29（1）：178.

[2] 潘麗亞. 豬細小病毒病的防治[J].中國畜牧獸醫文摘，2013，29（2）：114

[3] 華玉殊，馮 艷. 豬細小病毒病的防治方法[J].中國畜禽種業，2012（12）：115.

[4] 郝鐵兵. 豬細小病毒病的流行、診斷與預防[J].養殖技術顧問，2012（12）：91.

[5] 楊 莉，劉立賓. 豬細小病毒病的流行及診治[J].養殖技術顧問，2012（10）：123.

[6] 呂惠序. 豬細小病毒病的危害及綜合防制[J].養豬，2013（3）：127-128.

[7] 劉 建，湯德元，羅險峰. 豬細小病毒病診斷技術研究進展[J].豬業科學，2012（7）：89-93.

[8] 仇 錚，任曉峰，崔尚金. 自動免疫力已經產生豬細小病毒的致病機制與防控策略[J].世界華人消化雜志，2013，21（1）：66-70.

[9] 楊作豐. 豬細小病毒研究現狀及綜合防控[J].現代畜牧獸醫，2013（3）：40-41

[10] 衛功樹. 淺談豬細小病毒與母豬繁殖失能[J].現代農業科技，2007（14）：176.