術(shù)前尿液BLCA－4及IL－8水平與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系及意義*

楊大富， 陸榮森， 廖 俊， 梁華良， 黃芳偉

(1.廣東省信宜市人民醫(yī)院泌尿外科， 廣東 信宜 525300 2.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院泌尿外科， 廣東 廣州 510080)

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤之一，在我國(guó)其發(fā)病率占泌尿系統(tǒng)瘤的首位［1］。根據(jù)2005年美國(guó)癌癥中心統(tǒng)計(jì)，膀胱癌位列男性常見癌癥第4位，女性常見癌癥第10位［2］。基于不同程度風(fēng)險(xiǎn)的膀胱癌患者經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后，一年內(nèi)仍有20% ～90%的高復(fù)發(fā)率［3］，因此對(duì)膀胱癌早期診斷和監(jiān)測(cè)是治療膀胱癌的核心。目前膀胱鏡檢查仍是膀胱癌確診的金標(biāo)準(zhǔn)，但其具有侵入創(chuàng)傷性、不能準(zhǔn)確確定腫瘤的分級(jí)和分期，不易早期發(fā)現(xiàn)病變等缺點(diǎn)。隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，越來(lái)越多的腫瘤標(biāo)記物應(yīng)用于診斷及監(jiān)測(cè)膀胱腫瘤，其中膀胱癌特異性核基質(zhì)蛋白－4(BLCA－4)和白細(xì)胞介素－8(IL－8)是其中的研究熱點(diǎn)。本研究基于酶聯(lián)免疫反應(yīng)原理分別檢測(cè)膀胱癌組患者、正常對(duì)照組和高危性膀胱癌人群中術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平，以探討分析術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選擇2011年5月至2013年5月我院收治的膀胱癌患者42例(膀胱癌組)，均經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)為移形細(xì)胞癌。其中男26例，女16例，年齡24～80歲，平均(45.6±14.1)歲。病程 9 ～50 個(gè)月，平均(25.3±7.6)月。大多數(shù)患者表現(xiàn)伴有無(wú)痛性，間歇性，全程肉眼血尿，尿頻、尿急、尿疼等膀胱刺激癥狀，部分出現(xiàn)尿潴留現(xiàn)象。根據(jù)UIC標(biāo)準(zhǔn)病理分期:淺表性膀胱癌(T0～T1)24例，浸潤(rùn)性膀胱癌(T2～T4)18例;按照按WHO的病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)［4］:G1期12例，G2期21例，G3期9例;初發(fā)性23例，復(fù)發(fā)性19例;單發(fā)性25例，多發(fā)性17例。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療或免疫治療，無(wú)肝炎、糖尿病及免疫系統(tǒng)等疾病。選擇同期在本院進(jìn)行體檢的健康者28例(正常對(duì)照組)，男15例，女13例，年齡22～78歲，平均(46.2±12.8)歲;同時(shí)選取脊髓損傷的膀胱癌高危患者32例(高危性膀胱癌組)，男19例，女13例，年齡21～79歲，平均(45.9±15.7)歲。

1.2 術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平的測(cè)定

1.2.1 BLCA－4檢測(cè):取收集的正常對(duì)照組、高危性膀胱癌組和膀胱癌組患者術(shù)前24h的尿標(biāo)本各100mL，用乙醇以1∶3比例固定30min后，收集沉淀尿蛋白，加入PBS緩沖液，置－80℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩LCA－4檢測(cè)試劑盒購(gòu)于聯(lián)科生物技術(shù)有限公司。測(cè)定時(shí)，首先將含尿蛋白的標(biāo)本加到酶標(biāo)板中，置4℃凍箱包被過(guò)夜。次日，PBS(磷酸鹽緩沖液，PH=7.0)洗滌酶標(biāo)板后加入Anti BLCA－4抗體，室溫下孵育2h。再用含小牛血清的封閉液洗滌后加入酶標(biāo)二抗，室溫下孵育2h，PBS洗滌后加入底物顯色，于405nm波長(zhǎng)處讀取 A 值。Cut－off值為:14.0A/μg.protein。

1.2.2 IL－8 檢測(cè):采用人白細(xì)胞介素－8(IL－8)ELISA檢測(cè)試劑盒(上海百蕊生物科技有限公司)進(jìn)行檢測(cè)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，兩標(biāo)本均數(shù)的比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié) 果

表1 膀胱癌組與正常對(duì)照組、高危性膀胱癌組術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平的比較(±s)

表1 膀胱癌組與正常對(duì)照組、高危性膀胱癌組術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平的比較(±s)

與對(duì)照組相比，*P＜0.01;#P＜0.001

組別 BLCA－4(A/μg.protein)IL－8(ng/mL)正常對(duì)照組 2.7±5.8 12.3±7.9高危性膀胱癌組 9.1±18.7* 18.4±8.2*膀胱癌組 45.3±69.2# 36.6±11.5#

表2 術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系(±s)

表2 術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系(±s)

BLCA－4(A/μg.protein)IL－8(ng/mL)性別 男(n=26) 46.3±65.8 38.1±12.3 0.792 0.717腫瘤發(fā)生 單發(fā)(n=25) 40.3±56.8 32.8±10.6多發(fā)(n=17) 48.4±70.3 37.4±12.3 P 0.873 0.768年齡 ≤45(n=19) 45.1±70.2 34.7±11.3＞45(n=23) 47.4±68.3 37.5±12.6 P女(n=16) 44.7±67.2 35.9±13.4 P 0.101 0.132病理分期 T0 ～ T1(n=24) 46.2±57.3 37.7±13.3 0.073 0.085初發(fā)(n=23) 48.1±68.9 37.9±12.8復(fù)發(fā)(n=19) 42.7±61.3 32.4±11.7 P 0.325 0.271病理分級(jí) G1(n=12) 33.7±56.8 26.4±11.7 G2(n=21) 42.2±63.7 33.1±12.2 T2 ～ T4(n=18) 44.6±60.5 35.3±12.6 P

G3(n=9) 48.1±66.3 38.8±11.3 P 0.023 0.037

2.1 膀胱癌組與正常對(duì)照組、高危性膀胱癌組術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平的比較:實(shí)驗(yàn)測(cè)得BLCA－4水平的 Cut－off值為 14.0A/μg.protein。其中膀胱癌組患者尿中BLCA－4含量顯著性高于正常對(duì)照組和高危性膀胱癌組(P＜0.001)，而且高危性膀胱癌組為45.3±69.2A/μg.protein;正常對(duì)照組尿中 BLCA－4 含量為 2.7±5.8A/μg.protein;顯著高于正常組(P＜0.01)。同時(shí)，與正常對(duì)照組相比，術(shù)前尿液中IL－8水平在高危性膀胱癌組和膀胱癌組均顯著性上升，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異分別為 P＜0.01，P＜0.001。見表1。

2.2 術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8水平與膀胱癌臨床病理特征的關(guān)系:將膀胱癌組患者按照性別、年齡、腫瘤發(fā)生情況、腫瘤病理分期和分級(jí)等病理特征進(jìn)行各自分組后統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，術(shù)前尿液中BLCA－4水平與年齡、性別、腫瘤單發(fā)還是多發(fā)，初發(fā)還是復(fù)發(fā)沒有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均＞0.05)，但與腫瘤的病理分期和分級(jí)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，同時(shí)IL－8水平的檢測(cè)與BLCA－4水平的表達(dá)基本一致。見表2。

3 討 論

BLCAs家族最早是在1996年由 Getzenberg等［5］利用雙向凝膠電泳法從膀胱癌患者和正常人的膀胱組織中提取出來(lái)的。其中BLCA1－6是6種特異性表達(dá)于膀胱腫瘤而非正常人膀胱組織中的膀胱癌特異性核基質(zhì)蛋白，除BLCA－5外，其余均表達(dá)于所有的膀胱癌細(xì)胞系中。BLCA－4具有組織特異性和疾病特異性，近年來(lái)隨著對(duì)核基質(zhì)蛋白的深入研究，BLCA－4成為具有潛在臨床應(yīng)用前景的膀胱腫瘤標(biāo)志物。

目前關(guān)于BLCA－4功能分析的研究相比其他膀胱特異性核基質(zhì)蛋白較多。其中Myers－Irvin等［6］通過(guò)將BLCA－4基因轉(zhuǎn)染至四種不同人膀胱癌細(xì)胞系中分析發(fā)現(xiàn):BLCA－4高表達(dá)的膀胱癌細(xì)胞中，白細(xì)胞介素－1α(IL－1α)、白細(xì)胞介素－8(IL－8)、血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)、血管內(nèi)皮樣因子(VEGF)及血清淀粉蛋白(SA)等許多細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)基因均上調(diào)，同時(shí)也伴有維生素D3相關(guān)基因下調(diào)。該研究說(shuō)明BLCA－4的高表達(dá)可以引起許多基因表達(dá)的改變，其相互作用可能與腫瘤的發(fā)生、復(fù)發(fā)及進(jìn)展有著密切聯(lián)系。其中，IL－8作為一個(gè)多種細(xì)胞來(lái)源的趨化性細(xì)胞因子，可參與炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答及創(chuàng)傷愈合等過(guò)程，并且在腫瘤微環(huán)境中發(fā)揮重要作用。Myers－Irvin等［6］的芯片研究顯示在BLCA－4轉(zhuǎn)染的膀胱癌細(xì)胞系中IL－8含量增加了12倍，而同時(shí)Feng等［7］的研究也提示BLCA－4的高表達(dá)與IL－8的增加是同時(shí)的，Escudero等［8］證明 BLCA－4調(diào)控IL－8基因的上調(diào)，在尿路上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵作用。以上結(jié)論均說(shuō)明了BLCA－4與IL－8在膀胱癌形成中的潛在一致性，提示作為腫瘤標(biāo)志物的可能。

對(duì)于BLCA－4或作為膀胱癌腫瘤標(biāo)記物的研究已有很多文獻(xiàn)報(bào)道，但結(jié)果略有差異。有報(bào)道采用用間接酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法證明尿液BLCA－4水平在膀胱癌患者中顯著高表達(dá)，且其表達(dá)水平與性別、年齡、疾病分期及分級(jí)無(wú)關(guān)。本研究對(duì)膀胱癌組患者、正常對(duì)照組和高危性膀胱癌人群中尿液中BLCA－4和IL－8分別進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)膀胱癌組患者術(shù)前尿液中BLCA－4和IL－8均顯著高于正常對(duì)照組和高危性膀胱癌組，這與前人研究結(jié)果是一致的，而且我們還發(fā)現(xiàn)高危性膀胱癌組患者的BLCA－4和IL－8也顯著高于正常對(duì)照組，不僅提示兩者變化的同步性還說(shuō)明兩者聯(lián)合應(yīng)用于膀胱癌早期診斷的可能性［9］。此外，通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)術(shù)前尿液中BLCA－4水平與年齡、性別、腫瘤單發(fā)還是多發(fā)，初發(fā)還是復(fù)發(fā)均無(wú)關(guān)，但與腫瘤的病理分期和分級(jí)有顯著相關(guān)性，這與Zhao等免疫組化的結(jié)果是一致的。

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