多指標評分法優選復方茵陳合劑中大黃提取工藝

劉建清，王慶芬，曹毅祥，張 榮

(中國人民解放軍第一七五醫院、廈門大學附屬東南醫院制劑科，福建漳州 363000)

復方茵陳合劑由茵陳、梔子、大黃三味藥組成，為我院非標準制劑，臨床上主要用于急性黃疸性肝炎的治療，在我院應用二十余年，其降低轉氨酶、消除黃疸的療效顯著［1－4]。過去尚未對該制劑，煎煮工藝進行考察優化，前期試驗發現茵陳、梔子成分穩定，受煎煮過程影響小，而大黃易受煎煮時間、浸泡時間等因素影響，因此有必要對大黃提取進行優化，建立穩定可靠的工藝。本實驗以水為溶劑，大黃中5個游離蒽醌化合物(包括蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚、大黃酚)的提取量為指標［5]，以高效液相色譜法對其含量進行測定，采用正交實驗設計優化大黃提取工藝。

1 儀器與試劑

1200型高效液相色譜儀(美國 Agilent);AUX220型電子分析天平(日本島津公司);蘆薈大黃素(110736－200716)、大黃酸(批號:0757－200206)、大黃素(批號:110756－200110)、大黃酚(批號:110796－200615)、大黃素甲醚(批號:0759－200311)(以上均購至中國藥品生物制品檢定所);乙腈為色譜純;水為純凈水;其他試劑為分析純;復方茵陳合劑(自制)。

2 方法與結果

2．1 正交實驗

2．1．1 復方茵陳合劑煎煮工藝 稱取茵陳187．5 g、梔子 93．8 g、大黃 62．5 g，其中茵陳、梔子合并加水煎煮2次，每次分別為 1．5 h、1 h，以四層脫脂效［6－8]，另煎。茵陳、梔子濃縮后與大黃煎煮液合并，加水至1 000 mL，流通蒸汽100℃滅菌30 min即得。

2．1．2 正交試驗設計 通過前期預實驗，擬以浸泡時間、煎煮時間、煎煮次數為考察因素，每個因素設立3個水平(見表1)，采用L9(34)正交設計表，試驗安排見表1。

表1 實驗因素與水平表

2．2 大黃蒽醌類化合物的含量測定

2．2．1 色譜條件 色譜柱:伊特利 Kromasile C18(4．6 mm ×250 mm，5 μm);流動相:乙腈(A)—0．1%磷酸溶液(B);洗脫梯度:0～15 min 10%A，15～20 min 25%A，20 ～30 min 40%A，30 ～40 min 60%A，40～60 min 80%A，60～70 min 80%→10%A［9];流速:1 mL·min－1;檢測波長:254 nm;柱溫:30℃。

2．2．2 對照品溶液的制備 精密稱取蘆薈大黃素9．9 mg、大黃酸 10．2 mg、大黃素 10．0 mg、大黃酚10．2 mg、大黃素甲醚 10．5 mg，分別溶于 50 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。

精密吸取上述貯備液中蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚各0．5 mL，大黃酸1 mL，大黃素甲醚0．2 mL 置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，混勻即得混合對照品溶液。

供試品溶液測定:取煎煮液35 mL，加乙醇使含醇量為 60%，4 000 r·min－1離心10 min，上清液移至200 mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，選用孔徑為0．45 μm的微孔濾膜濾過進樣分析。色譜圖見圖1。

2．2．3 線性關系考察 分別精密吸取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚各3、5、8、10、15、20μL進樣，測定其峰面積(Y)對進樣量(X)進行回歸處理，得出5種成分的回歸方程及線性范圍。見表2。

2．3 正交實驗結果及方差分析 正交試驗結果見表3(測得的量為35 mL煎煮液中各蒽醌類化合物含量)，方差分析見表4，5。

圖1 HPLC圖

表2 回歸方程與線性范圍

表3 蒽醌類化合物的正交表設計

表4 蒽醌類化合物方差分析表

表5 各指標優選出的大黃提取工藝

由表4與表5方差分析結果可得出:大黃煎煮過程中，有無浸泡對大黃各成分，尤其對蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的提取有顯著性的影響;對大黃素的提取有一定的影響;而煎煮時間及煎煮次數對大黃各蒽醌化合物提取影響較小。綜合各指標優選出的提取工藝，選擇提取條件為A2B2C3，即浸泡6 h，煎煮3次，每次煎煮時間15 min。

2．4 驗證實驗 分別稱取處方量藥材3份，按最佳工藝條件平行操作，提取，處理，進樣分析。計算出蘆薈大黃素平均含量為0．61 mg，RSD為3．4%;大黃酸平均含量為2．42 mg，RSD為4．1%;大黃素平均含量為0．95 mg，RSD 為3．3%;大黃酚平均含量為8．45 mg，RSD 為 4．6%;大黃素甲醚平均含量為0．48 mg，RSD為3．9%。實驗結果表明該提取工藝穩定可靠。

3 討論

大黃具有瀉下攻積、清熱瀉火等作用，主要含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等成分，故本文進行正交試驗時，以5個成分提取量為考察指標，優化工藝，提高制劑中有效成分含量。

大黃中5個游離蒽醌化合物極性小，目前文獻報道［10－12]大多采用甲醇、乙醇等有機溶劑進行提取，但大黃以水煎煮服用仍應用廣泛。因而本試驗探討優化大黃水提工藝，為大黃煎煮提供參考。

本試驗中浸泡時間對大黃蒽醌化合物的提取有較顯著的影響，考慮可能大黃酚等蒽醌化合物浸出緩慢，較長時間浸泡有助于藥物的滲透擴散［13－14]，同時也可以縮短煎煮時間，防止長時間煎煮對各蒽醌化合物的破壞。

與傳統工藝相比，優化后的工藝對大黃酸的提取基本無改變，甚至略有降低;但大黃酚、大黃素甲醚等提取量均有了較顯著的提高，即大黃總蒽醌化合物的提取量有了較大的提高。因此該工藝適合大黃的水提生產。

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