流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)白血病微小殘留病變與療效判斷及預(yù)后關(guān)系*

陜西省人民醫(yī)院血液科(西安 710068)

王 暉 高秋英 張 雅 王 一 焦紅俠 周茂華△

·臨床研究·

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)白血病微小殘留病變與療效判斷及預(yù)后關(guān)系*

陜西省人民醫(yī)院血液科(西安 710068)

王 暉 高秋英 張 雅 王 一 焦紅俠 周茂華△

目的 ：研究流式細(xì)胞術(shù)方法在檢測(cè)白血病微小殘留病變(MRD)中的作用及地位，判斷其與療效及預(yù)后的關(guān)系。方法：選擇急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)初發(fā)患者56例， 將其按照成人ALL危險(xiǎn)分組分為低危組、中危組和高危組三組，在所有患者鞏固及維持治療階段，每3個(gè)月運(yùn)用FCM方法檢測(cè)白血病微小殘留病變，對(duì)其進(jìn)行為期一年的隨訪，記錄下復(fù)發(fā)率。結(jié)果：56例白血病患者在誘導(dǎo)化療后都獲得了完全緩解，鞏固及維持治療階段四次檢測(cè)的不同疾病危險(xiǎn)度的MRD陽性率差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，HR組的MRD陽性率要明顯高于LR和MR組；鞏固、維持治療階段四次檢測(cè)結(jié)果的MRD陽性組和陰性組的復(fù)發(fā)率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)方法檢測(cè)白血病微小殘留病變對(duì)評(píng)價(jià)療效、提早預(yù)防復(fù)發(fā)、重新確定疾病危險(xiǎn)度和調(diào)整治療策略方法有著重要意義。

白血病微小殘留病變(Minimal pesidual disease, MRD)是白血病病人在經(jīng)過了誘導(dǎo)化療、達(dá)到完全緩解后用傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)方法無法檢測(cè)出的體內(nèi)殘留少量白血病細(xì)胞的狀態(tài)[1]。白血病微小殘留病變是白血病復(fù)發(fā)的根源[2]，但由于MRD其在體內(nèi)的分布特點(diǎn)復(fù)雜，且增殖狀況會(huì)隨著機(jī)體的免疫情況變化，因此，尋找快速準(zhǔn)確的檢測(cè)白血病微小殘留病變的方法就成為研究人員關(guān)注的焦點(diǎn)。檢測(cè)MRD也對(duì)判斷患者療效及預(yù)后，指導(dǎo)個(gè)性化治療有著重要的意義。如今，多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)憑借著其快捷靈敏、特異定量的優(yōu)勢(shì)成為檢測(cè)白血病微小殘留病變的重要方法之一，也是療效判定和疾病預(yù)后的重要指標(biāo)。本研究運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)方法監(jiān)測(cè)56例白血病患者M(jìn)RD并探討其與臨床療效和預(yù)后的關(guān)系。

對(duì)象與方法

1 研究對(duì)象 選擇陜西省人民醫(yī)院2010年6月至2014年1月收治的FAB分型為急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)的初發(fā)患者56例，其中男性病例31例，女性病例25例，年齡在1～70歲之間，平均年齡為41±21.8歲。所有患者都經(jīng)過血液病相關(guān)檢查，診斷符合血液病診斷和療效標(biāo)準(zhǔn)[3]。

2 研究方法 將56例白血病患者按照成人ALL危險(xiǎn)分組[4]分為低危組(LR)、中危組(MR)和高危組(HR)3組，其中，LR組16例(28.57%)，MR組30例(53.57%)，HR組10例(17.86%)。

對(duì)患者隨訪一年，運(yùn)用雙參數(shù)圖的三色流式細(xì)胞術(shù)(FCM)在患者鞏固、維持治療階段每3個(gè)月檢測(cè)一次。

3 療效標(biāo)準(zhǔn) 采用4色標(biāo)記的5組抗體組合確定初治患者的白血病相關(guān)免疫表型(LAIP)，選取敏感的LAIP進(jìn)行追蹤MRD，檢測(cè)患者的骨髓標(biāo)本。以患者LAIP陽性細(xì)胞比例高于正常值+2倍標(biāo)準(zhǔn)差的定為MRD(+)，低于此值的為MRD(-)[5]。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)本研究中的計(jì)數(shù)資料運(yùn)用χ2檢驗(yàn)，且當(dāng)P<0.05時(shí)表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 治療結(jié)果 56例白血病患者在誘導(dǎo)緩解治療后都獲得了完全緩解(CR)，在1年隨訪過程中共2例病人失訪，1例中危組病人，1例高危組病人，失訪率為3.58%，其余54例白血病患者均經(jīng)過了一年的隨訪，并對(duì)其進(jìn)行了鞏固強(qiáng)化治療，累積復(fù)發(fā)8例，復(fù)發(fā)率14.81%。

2 MRD與疾病危險(xiǎn)度 56例患者誘導(dǎo)化療結(jié)束治療三個(gè)月后的MRD陽性率結(jié)果見表1，55例患者誘導(dǎo)化療結(jié)束6個(gè)月后的MRD陽性率結(jié)果見表2，54列患者誘導(dǎo)化療結(jié)束9個(gè)月和12個(gè)月后的MRD陽性率結(jié)果見表3和表4。由表可知，誘導(dǎo)化療結(jié)束治療后各階段不同疾病危險(xiǎn)度的MRD陽性率差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，HR組的MRD陽性率要明顯高于LR、MR組。

表1 56例患者誘導(dǎo)化療結(jié)束治療后3個(gè)月3組的MRD陽性率比較

注：與LR組、MR組比較*P<0.05

表2 55例患者誘導(dǎo)化療結(jié)束治療后6個(gè)月3組的MRD陽性率比較

注：與LR組、MR組比較*P<0.01

3 MRD與復(fù)發(fā) 37例在誘導(dǎo)化療結(jié)束治療后3個(gè)月檢測(cè)中MRD呈陰性的白血病患者中復(fù)發(fā)的有1例，復(fù)發(fā)率為2.70%，19例在誘導(dǎo)化療結(jié)束治療后3個(gè)月檢測(cè)中MRD呈陽性的白血病患者中復(fù)發(fā)的有2例，復(fù)發(fā)率為10.53%，兩組的復(fù)發(fā)率比較其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；35例在誘導(dǎo)化療結(jié)束治療后6個(gè)月檢測(cè)中MRD呈陰性的白血病患者中復(fù)發(fā)的有1例，復(fù)發(fā)率為2.86%，20例在誘導(dǎo)化療結(jié)束治療后6個(gè)月檢測(cè)中MRD呈陽性的白血病患者中復(fù)發(fā)的有5例，復(fù)發(fā)率為25%，兩組的復(fù)發(fā)率比較其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；34例在誘導(dǎo)化療結(jié)束治療后9個(gè)月檢測(cè)中MRD呈陰性的白血病患者中復(fù)發(fā)的有1例，復(fù)發(fā)率為2.94%，20例在誘導(dǎo)化療結(jié)束治療后9個(gè)月檢測(cè)中MRD呈陽性的白血病患者中復(fù)發(fā)的有7例，復(fù)發(fā)率為35%，兩組的復(fù)發(fā)率比較其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。誘導(dǎo)化療結(jié)束治療后9個(gè)月檢測(cè)MRD呈陽性的20例患者中，LR組復(fù)發(fā)1例(25%)，MR組復(fù)發(fā)3例(30%)，HR組復(fù)發(fā)3例(50%)，3組之間的復(fù)發(fā)率比較沒有顯著差異(P>0.05)。

表3 54例患者誘導(dǎo)化療結(jié)束治療后9個(gè)月3組的MRD陽性率比較

注：與LR組、MR組比較*P<0.01

表4 54例患者誘導(dǎo)化療結(jié)束治療后12個(gè)月3組的MRD陽性率比較

注：與LR組、MR組比較*P<0.01

討 論

MRD的檢測(cè)有細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，集落培養(yǎng)，熒光原位雜交(FISH)、流式細(xì)胞術(shù)(FCM)、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)等幾種方法[6，7]。盡管流式細(xì)胞術(shù)方法檢測(cè)MRD已成為一種診治白血病的重要手段。但因?yàn)镸RD在人體中的分布、變化復(fù)雜且選用的方案和設(shè)備實(shí)際具有差異，目前并不能將MRD檢測(cè)作為判斷白血病患者療效和預(yù)后的唯一依據(jù)。在實(shí)際運(yùn)用中，我們既應(yīng)建立FCM檢測(cè)MRD的規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化流程，提高該技術(shù)在臨床中的應(yīng)用，又應(yīng)嚴(yán)控質(zhì)量體系，堅(jiān)持定期檢測(cè)，對(duì)每個(gè)患者進(jìn)行反復(fù)多次白血病微小殘留病變檢測(cè)，根據(jù)MRD值變化情況，結(jié)合其他臨床檢查指標(biāo)，達(dá)到評(píng)價(jià)療效、提早預(yù)防復(fù)發(fā)、重新確定疾病危險(xiǎn)度和調(diào)整治療策略的目標(biāo)。

[1] Faderl S, Kantarjian HM, Talpaz M. Clinical significance of minimal residual disease in leukemia[J].Int J Oncol,2000,17(6):1277-1287.

[2] 翟志敏, 吳競(jìng)生, 潘理明, 等. 多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)對(duì)外周血造血前體細(xì)胞及急性白血病微小殘留病變的研究[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2001,5(6):27.

[3] 楊天柵.急性白血病療效標(biāo)準(zhǔn).見:張之南, 沈 悌主編. 血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)[M].北京: 科學(xué)出版社,1998：215.

[4] 秘營(yíng)昌.中國(guó)成人急性淋巴細(xì)胞白血病診斷與治療專家共識(shí)—診斷和預(yù)后分組解讀[J]. 中華血液學(xué)雜志,2013,34(11):994-996.

[5] 張之南，沈 悌.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)(第三版)[M]. 北京：科學(xué)出版社，2007:131-133.

[6] 陳 萍.急性淋巴細(xì)胞白血病微小殘留病的檢測(cè)及其臨床意義[J].國(guó)外醫(yī)學(xué):輸血及血液學(xué)分冊(cè),2002,25(1):24.

[7] 張 麗,羅文達(dá),陳葆國(guó),等.急性淋巴細(xì)胞白血病免疫表型與微小殘留病檢測(cè)的意義[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2006,15(9):1147-1150.

(收稿：2015-06-20)

Research on the relationship of flow cytometry detection of minimal residual disease with curative effect evaluation and prognosis Department of Hematology,Shaanxi Provincial People Hospital

( Xi’an 710068 )

Wang Hui Gao Qiuying Zh Ya et al

Objective :To study the role of flow cytometry in the treatment of minimal residual disease of leukemia, judge its relationship with the curative effect and prognosis. Methods :Selected 56 leukemia patients from Shaanxi Provincial People Hospital, they were divided into the low risk group, medium risk group and high risk group on severity, using flow cytometry method to detect patients’ leukemia minimal residual disease after chemotherapy and after chemotherapy of six months. Carry out a one-year follow-up and record the recurrence rate. Results :56 cases had obtained complete remission after therapy, the difference of positive rates of MRD were statistically significant (P<0.05 orP<0.01) after chemotherapy and after chemotherapy of six months. the high group’s positive rate of MRD was higher than that in low risk group, medium risk group. the recurrence rate was different between MRD positive group and negative group. Conclusion :The use of flow cytometry detection method for evaluation of curative effect of leukemia minimal residual disease, early prevention of recurrence, redetermine the degree of disease risk and adjust the treatment strategy has important significance.

Leukapheresis Flow cytometry Prognosis

*廣東省衛(wèi)生廳資助項(xiàng)目(97051 )

白血病 流式細(xì)胞術(shù) 預(yù)后

R552

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.12.006

△ 廣東省人民醫(yī)院血液科