4種殺菌劑對葡萄炭疽病菌的毒力測定

楊敬輝　陳宏州　肖婷　吳祥　吉沐祥　莊義慶

摘要：為探明不同殺菌劑對葡萄炭疽病菌的室內(nèi)抑菌活性，采用菌絲生長速率法測定4種殺菌劑對葡萄炭疽病菌的室內(nèi)毒力。結(jié)果表明，氟硅唑、咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑、[2]氟環(huán)唑、丙環(huán)唑、戊唑醇、己唑醇、烯唑醇、吡唑醚菌酯、多菌靈、腈菌唑、啶酰菌胺、多抗霉素、嘧菌酯對葡萄炭疽病菌菌絲生長的EC50值分別為0258 6、0338 0、0376 4、057 6、0585 2、069 7、76 8、92 3、232 7、249 4、77 3、3065 7、70343 2、22459 7 μg/mL。葡萄炭疽病菌對不同殺菌劑的敏感性差異較大，其中供試葡萄炭疽病菌對氟硅唑最敏感。

關鍵詞：葡萄炭疽病菌；殺菌劑；菌絲生長速率法；EC50；抑菌活性；敏感性；毒力測定

中圖分類號： S436635文獻標志碼： A[HK]

文章編號：002-302（204）2-063-03[HS）][HT9SS]

[H4mm]

收稿日期：204-02-8

基金項目：江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金[編號：CX（3）3062]。

作者簡介：[3]楊敬輝（973—），男，云南麗江人，博士，副研究員，從事農(nóng)作物病害生物防治及對殺菌劑抗性研究。E-mail：yjhnn32@26com。

通信作者：莊義慶，博士，研究員，從事植物保護研究。E-mail：yqzhuang@sinacom。[H]

[ZK）]

葡萄炭疽病（Glomerella cingulata）別稱晚腐病，89年美國首次對該病進行了報道。在我國大多數(shù)葡萄栽培地區(qū)，由于葡萄連年種植而使病原菌菌源積累，從而造成葡萄炭疽病逐年加重，目前已成為葡萄生產(chǎn)上的主要病害。該病害主要危害果實，一般可造成產(chǎn)量損失0%～5%，如遇潮濕、多雨年份易造成大流行，病穗率達50%～70%[2]。該病害的防治以化學防治為主，由于防治方法單一、防治適期和方法不當及病原菌抗藥性等問題，防治效果較差[3]。200—202年，由于特殊高溫、高濕氣候條件，炭疽病原真菌對常用化學農(nóng)藥抗性增強，以及藥劑防治適期和方法不當?shù)仍颍Ｒ?guī)化學農(nóng)藥對炭疽病的防治失敗，造成江蘇省幾乎所有夏黑葡萄品種絕收，農(nóng)戶蒙受巨大的經(jīng)濟損失，大大打擊了農(nóng)戶的積極性，嚴重影響了現(xiàn)代高效農(nóng)業(yè)的提升進程；因此，急需篩選出防治葡萄炭疽病的新藥劑并推廣應用。本研究采用菌絲生長速率法測定4種殺菌劑對該病菌的室內(nèi)毒力，研究多種新型藥劑和常規(guī)藥劑對葡萄炭疽病菌的抑菌效果，以期為開發(fā)防治葡萄炭疽病的新藥劑和科學合理使用殺菌劑提供依據(jù)。

材料與方法

供試菌株

葡萄炭疽病菌由江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學研究所植保研究室分離，并保存于4 ℃冰箱中備用。

2供試培養(yǎng)基

馬鈴薯培養(yǎng)基（DA）[4]，用于葡萄炭疽病菌的分離、保存以及毒力測定。

3供試藥劑

9709%多菌靈，上海升聯(lián)化工有限公司；952%咪鮮胺，江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司；92%烯唑醇，江蘇鹽城利民農(nóng)化有限公司；978%腈菌唑，江蘇耘農(nóng)化工有限公司；963%苯醚甲環(huán)唑，江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司；959%己唑醇，江蘇耘農(nóng)化工有限公司；95%氟硅唑，陜西恒潤化學工業(yè)有限公司；97%氟環(huán)唑，北京綠色農(nóng)華植保科技有限公司；945%丙環(huán)唑，山東東泰農(nóng)化有限公司；95%戊唑醇，江蘇鹽城利民農(nóng)化有限公司；8439%啶酰菌胺，德國巴斯夫股份有限公司；95%吡唑醚菌酯，德國巴斯夫股份有限公司；966%嘧菌酯，江蘇耘農(nóng)化工有限公司；50%多抗霉素，武漢天惠生物工程有限公司。將9709%多菌靈和50%多抗霉素分別用適量 0 mol/L 鹽酸溶液和無菌水溶解，其他藥劑分別用適量丙酮溶解并加入0%吐溫-80，各藥劑均配制成0 mg/mL母液置于4 ℃冰箱中備用。

4含藥培養(yǎng)基的制備

分別將多菌靈等供試藥劑的母液依次稀釋至一定濃度，再將 mL藥液與9 mL DA培養(yǎng)基在培養(yǎng)皿內(nèi)混勻，制成含系列梯度濃度藥劑的DA培養(yǎng)基（表），以無菌水作空白對照（CK），各處理重復4次。

5毒力測定

采用菌絲生長速率法[5]測定毒力，將保留的葡萄炭疽病菌轉(zhuǎn)接到DA平皿中，25 ℃下活化96 h，然后在近菌落邊緣用打孔器制取直徑為5 mm的菌餅，并轉(zhuǎn)接到“4”節(jié)倍比稀釋配制的含藥和空白對照的DA平皿中，于 25 ℃下培養(yǎng) 96 h，[2]待對照中菌落長至約平皿直徑的4/5時，采用“十”字交叉法量取菌落直徑。計算菌落直徑平均值，并按照下列公式計算菌絲生長平均抑制率：菌絲生長平均抑制率=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-接種菌餅直徑）×00%。采用DS 30數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計算出各藥劑對葡萄炭疽病菌菌絲生長抑制的回歸方程、EC50及其95%置信限，并以最敏感藥劑的EC50值為對照求出相對毒力指數(shù)。

2結(jié)果與分析

24種殺菌劑對葡萄炭疽病菌菌絲生長的影響

[3]苯醚甲環(huán)唑在處理濃度為0039 062 5～5000 000 0 μg/mL時[CM（25]，對葡萄炭疽病菌菌絲生長的抑制率為273%～[CM）]

[FK（W5][HT6H][Z]表4種殺菌劑不同濃度對葡萄炭疽病菌菌絲生長的抑制效果9227%；氟環(huán)唑、己唑醇、氟硅唑、丙環(huán)唑、烯唑醇、戊唑醇在處理濃度為0078 25～0000 000 μg/mL時，對葡萄炭疽病菌菌絲生長的抑制率分別為093%～9727%、645%～8839%、3039%～0000%、243%～954%、56%～8673%、93%～0000%；多菌靈、咪鮮胺、吡唑醚菌酯在處理濃度為056 25～20000 00 μg/mL時，對葡萄炭疽病菌菌絲生長的抑制率分別為03%～0000%、2778%～0000%、52%～9463%；腈菌唑、啶酰菌胺在處理濃度為0625～80000 μg/mL時，對葡萄炭疽病菌菌絲生長的抑制率分別為859%～9448%、750%～7750%；多抗霉素、嘧菌酯在處理濃度分別為325～200000、625～40000 μg/mL 時，對葡萄炭疽病菌菌絲生長的抑制率分別為359%～7578%、869%～5593%（表）。這表明不同殺菌劑對葡萄炭疽病菌菌絲生長的抑制活性以及對葡萄炭疽病菌菌絲生長的最低抑制濃度（MIC值）有較大差異。

224種殺菌劑對葡萄炭疽病菌菌絲生長的毒力測定

室內(nèi)毒力測定結(jié)果（表2）表明，氟硅唑、咪酰胺、苯醚甲環(huán)唑、氟環(huán)唑、丙環(huán)唑、戊唑醇、己唑醇、烯唑醇、吡唑醚菌酯、多菌靈、腈菌唑、啶酰菌胺、多抗霉素和嘧菌酯對葡萄炭疽病菌菌絲生長的EC50值分別為0258 6、0338 0、0376 4、057 6、0585 2、069 7、76 8、92 3、232 7、249 4、77 3、3065 7、70343 2、22459 7 μg/mL。4種供試殺菌劑中，氟硅唑?qū)ζ咸烟烤也【z生長的抑制活性最強，而嘧菌酯的抑制活性最弱，后者的EC50值約為前者的868倍。以氟硅唑的EC50值為對照得出了不同殺菌劑的相對毒力指數(shù)，即咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑、氟環(huán)唑、丙環(huán)唑、戊唑醇、己唑醇、烯唑醇、吡唑醚菌酯、多菌靈的相對毒力指數(shù)在～5之間，腈菌唑、啶酰菌胺、多抗霉素、嘧菌酯的相對毒力指數(shù)分別為2773 2、50524 7、27205 5、86822 3。這表明三唑類殺菌劑——氟硅唑和苯醚甲環(huán)唑等藥劑和咪唑類殺菌劑——咪鮮胺對供試葡萄炭疽病菌具有較強的室內(nèi)抑菌活性，而常規(guī)藥劑多菌靈對供試葡萄炭疽病菌仍有較好的抑制活性，并且優(yōu)于常規(guī)藥劑——腈菌唑以及新型藥劑啶酰菌胺和嘧菌酯。[FL）]

[FK（W7][HT6H][Z]表24種殺菌劑對葡萄炭疽病菌的室內(nèi)毒力測定結(jié)果[HTSS][STBZ]

[H5][BG（！][BHDFG3，WK7，WK6，WK7。2，WK6，WK7W]殺菌劑毒力回歸方程rEC50（μg/mL）EC50的95%置信限（μg/mL）相對毒力指數(shù)

[BHDG2，WK7ZQ，WK6，WK7。2，WK6，WK7W]氟硅唑y=5569 40969 2x0998 50258 60242 8～0275 3

3結(jié)論與討論

葡萄栽培面積和產(chǎn)量在世界果樹生產(chǎn)中僅次于柑橘，在國際果樹生產(chǎn)中占有重要地位，但葡萄生長常遭受炭疽病等多種病害危害，因而倍受關注[6]。雖然各國學者對葡萄抗病性進行了大量的研究，但至今生產(chǎn)上仍以化學防治為主[7]。目前，常用的農(nóng)藥主要有代森錳鋅、福美雙、百菌清和多菌靈等，使用頻繁，防效較差[8]。據(jù)報道，葡萄炭疽病菌對多菌靈等常規(guī)藥劑已產(chǎn)生抗藥性[9]。葡萄炭疽病的防治及其病原菌的抗藥性等問題，都引起了各級植保部門的高度關注。

太一梅等報道，25%咪鮮胺乳油和0%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑是防治葡萄炭疽病的理想藥劑，具有防效好、持效期長、安全、低毒等特點[0]。陶曉敏等報道，25%丙環(huán)唑乳油對葡萄炭疽病具有較好的防治效果。本研究采用菌絲生長速率法測定葡萄炭疽病菌對苯并咪唑類殺菌劑（多菌靈）、咪唑類殺菌劑（咪鮮胺）、三唑類殺菌劑（氟硅唑、苯醚甲環(huán)唑、氟環(huán)唑、丙環(huán)唑、戊唑醇、己唑醇、烯唑醇和腈菌唑）、甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑（嘧菌酯和吡唑醚菌酯）、吡啶類殺菌劑（啶酰菌胺）和農(nóng)用抗生素類殺菌劑（多抗霉素）等6類4種殺菌劑的室內(nèi)毒力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這4種殺菌劑的毒力從大到小依次為氟硅唑>咪鮮胺>苯醚甲環(huán)唑>氟環(huán)唑>丙環(huán)唑>戊唑醇>己唑醇>烯唑醇>吡唑醚菌酯>多菌靈>腈菌唑>啶酰菌胺>多抗霉素>嘧菌酯。氟硅唑?qū)ζ咸烟烤也【z生長的抑制活性最強，而嘧菌酯的抑制活性最弱。嘧菌酯是一種呼吸抑制劑，抑制炭疽病菌等多種病原菌孢子萌發(fā)的活性高于抑制菌絲生長[2]，同時室內(nèi)藥劑篩選的結(jié)果雖可看出藥劑對菌絲具有抑制作用，但由于受很多因素的影響，室內(nèi)的抑菌活性和在田間使用上的效果不一定完全一致，因此本研究的結(jié)果還有待于在田間進一步開展藥劑防治試驗。

本研究結(jié)果表明，氟硅唑和苯醚甲環(huán)唑等新一代高效、安全、性價比高的藥劑在葡萄炭疽病防治中具有較好的推廣潛力，但在沒有明確葡萄炭疽病菌對新殺菌劑抗性風險情況下，在應用中應該遵循殺菌劑使用準則，與其他不同作用機制的殺[CM（25]菌劑輪換或交替使用，以延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生。咪鮮胺[等常規(guī)藥劑對葡萄炭疽病菌仍具有較強的抑制活性，因而必須科學合理使用藥劑，延緩常規(guī)藥劑的使用壽命，造福于民。

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