草酸鈣腎結石患者腎臟組織中纖維黏連蛋白的表達及意義

木拉提·馬合木提, 袁留亞, 杜廣建, 張　濤,

艾克帕爾·阿布拉1, 艾尼瓦爾·牙生2

(1. 新疆醫科大學第二附屬醫院 泌尿外科, 新疆 烏魯木齊, 830028;

2. 新疆醫科大學第一附屬醫院 泌尿中心, 新疆 烏魯木齊, 830054)

草酸鈣腎結石患者腎臟組織中纖維黏連蛋白的表達及意義

木拉提·馬合木提1, 袁留亞1, 杜廣建1, 張濤1,

艾克帕爾·阿布拉1, 艾尼瓦爾·牙生2

(1. 新疆醫科大學第二附屬醫院 泌尿外科, 新疆 烏魯木齊, 830028;

2. 新疆醫科大學第一附屬醫院 泌尿中心, 新疆 烏魯木齊, 830054)

摘要:目的探討纖維連接蛋白(FN)在草酸鈣腎結石患者腎臟組織中的表達及意義。方法選取14例草酸鈣腎結石患者作為病例組，另選取同期因其他非腎結石原因接受腎臟切除的12例患者作為對照組。采用免疫組化染色法(S-P法)對2組患者進行FN抗體染色。結果病例組中8例為中到強陽性表達，而對照組中只有2例為中到強陽性表達。2組FN表達差異有統計學意義(P<0.05)。結論FN在草酸鈣腎結石患者腎臟組織中呈強陽性表達。

關鍵詞:纖維連接蛋白; 草酸鈣結石; 免疫組化

纖維連接蛋白(FN)是一種非膠原性的a2糖蛋白，目前研究[1]發現其作用有參與細胞與細胞、細胞與基質之間的黏連，維持細胞的正常形態、為細胞基質再生起支架作用、促進細胞遷移、對單核-巨噬細胞有趨化作用、參與止血與血液凝固、通過調理作用增強吞噬細胞的吞噬能力等作用。有研究發現隨著腎間質纖維化程度的加重，FN的表達隨之升高。本研究通過對草酸鈣腎結石腎臟組織FN 免疫組化染色，探討FN在草酸鈣腎結石腎臟組織中的表達及意義，現報告如下。

1資料與方法

1.1　一般資料

選取2013年4—9月在本院接受經皮腎鏡技術(PCNL)及開放手術治療的14例草酸鈣腎結石患者作為病例組。另選取同期因其他非腎結石原因(腎臟外傷性破裂、腎臟腫瘤、腎盂輸尿管交.界處狹窄至腎臟積水無功能)接受腎臟切除的12例患者作為對照組。所有入選者均知情同意，且本研究得到新疆醫科大學第二附屬醫院倫理委員會的批準。

1.2　方法

采用兔抗人FN多克隆抗體和SP試劑盒，購自北京中杉金橋生物技術有限公司。免疫組化染色采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶連接法(S-P法)，具體步驟參照北京中杉金橋生物技術有限公司提供的UltraSensitiveTMS-P免疫組化染色步驟說明進行。免疫組化染色過程中，每例均以PBS液代替一抗作為陰性對照，以正常腎皮質組織作為陽性對照。

免疫組化分析FN染色陽性結果判定請病理科專家判讀。FN主要定位于腎臟皮質組織的細胞外基質。光鏡下(400倍)隨機觀察3個高倍視野，根據著色強度的多少進行評分，未無未著色記為陰性(-)，弱陽性(淺棕色)記為(+)，中等陽性(棕色)性記為(2+)，強陽性(深棕色)性記為(3+)。

1.3　統計學方法

應用SPSS 17.0軟件進行統計分析，兩組間兩兩比較采用非參數Mann-Whitney U秩和檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

病例組中8例為中到強陽性表達，其中(-)2例，(+)4例，(2+)6例，(3+)2例，陽性細胞外基質表現為棕色或深棕色著色；對照組中只有2例為中到強陽性表達，其中(-)6例，(+)4例，(2+)1例，(3+)1例。病例組FN的陽性表達程度顯著高于對照組，差異有統計學意義(U=44,P=0.032)。

3討論

泌尿系結石是一種世界范圍內的常見病、多發病，其中草酸鈣及含草酸鈣的泌尿系結石約占85%。其病因仍未完全明確，目前發現與生活習慣、自然環境、遺傳等因素密切相關，發病有明顯的地區差異和種族差異[2-4]。研究[5]顯示草酸鈣結石可能是由于基因變異與其他因素綜合作用而形成的最常見的結石。

FN是一種單基因編碼組成的多功能糖蛋白，分子量230 KD，其基因定位于人類染色體2q34～36, Patel證明約有50個外顯子。除少數例外，基因上的外顯子與蛋白肽鏈中的重復序列相對應。既往研究[4]中，尿中檸檬酸鹽和鎂這兩種離子抑制劑和大分子化合物TH蛋白、酸性黏多糖、腎鈣素、骨橋蛋白和纖維連接蛋白等非離子大分子被認為可能是腎結石的保護因素。FN主要由成纖維細胞、血管內皮細胞、巨噬細胞合成和分泌，也可由血漿FN轉化而來。FN是網狀內皮系統的調理素，具有止血、抗血栓、促進細菌黏附、調節細胞分裂和增殖、增進細胞連接、促進組織修復等功能，其最重要和最根本的功能特性是參與細胞與細胞、細胞與基質之間的黏連[6]。纖維連接蛋白能夠結合纖維蛋白及纖維蛋白原，是其他膠原沉積于腎小管和間質的先決條件之一，可能是作為這些細胞外基質成分之間的中心環節而起作用，同時纖維連接蛋白也是一種重要的調理介質，其通過與整合素的結合在介導細胞增殖與器官硬化過程中起著重要作用[7]。FN還對成纖維細胞具有化學趨動作用和細胞運動的基質作用[8]，能吸引成纖維細胞向創傷區定向遷移，促進肉芽組織向創傷區生長，以增生修復損傷的組織結構。當腎小管上皮受損時晶體易在其表面成核和生長，可能是草酸鈣結石最初成核部位[9-10]。體外研究[11-12]表明，FN可以結合到草酸鈣晶體表面，通過抑制草酸鈣晶體的內吞和草酸鈣晶體對腎小管上皮細胞的黏附作用，從而抑制草酸鈣結石的形成，因此被認為是尿液中草酸鈣結石的主要抑制因子之一。

本研究中，病例組腎組織中FN的表達明顯較對照組增高，說明草酸鈣結石可以刺激FN的過度分泌，從而抑制草酸鈣結石的進一步形成。國外學者[13-14]也曾發現在不活動的復發性結石患者中，草酸鈣結晶可以刺激腎小管過度分泌FN，且作用強度與FN的量有關。在草酸鈣晶體的刺激下腎小管上皮細胞的不同基因可能變異，這些基因的變異可能導致蛋白質的表達發生改變[15]。在本研究中發現，對照組中只有2例為中到強陽性表達，6例不表達FN，而在病例組腎臟組織細胞外基質中8例為中到強陽性表達。雖然FN具有抑制結石形成和生長的作用，但草酸鈣晶體形成過多時，FN可能失去了抑制草酸鈣晶體的作用。這也反映了這一階段FN不斷增加、沉積，并發生細胞與細胞外基質之間的生物學效

應，使細胞和膠原、纖維蛋白等結合更加緊密，加重了腎臟實質的纖維化。這可能是草酸鈣晶體刺激引起FN表達過高，從而引起腎纖維化[16]。

參考文獻

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Expression and significance of fibronectin in kidney tissue of patients with calcium oxalate nephrolith

MULATI Mehmut1, YUAN Liuya1, DU Guangjian1, ZHANG Tao1,

AIKEPAER Abula1, AINIWAER Yasheng2

(1.DepartmentofUrinarySurgery,TheSecondAffiliatedHospitalofXinjiangMedical

University,Urumqi,Xinjiang, 830028; 2.UrinaryCenter,TheFirstAffiliated

HospitalofXinjiangMedicalUniversity,Urumqi,Xinjiang, 830054)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the expression and significance of fibronectin (FN) in kidney tissue of patients with calcium oxalate nephrolith. MethodsA total of 14 patients with calcium oxalate nephrolith were enrolled into medical case group and another 12 patients in the same period underwent nephrectomy were selected as control group. FN antibody was stained in both groups by immunohistochemistry staining (S-P method). ResultsThere were 8 patients with median to strong positive expression in the medical case group and 2 patients in the control group. There was significant difference of FN expression between the two groups (P<0.05). ConclusionFN can express strongly and positively in patients with calcium oxalate nephrolith.

KEYWORDS:fibronectin; calcium oxalate nephrolith; immunohistochemistry

通信作者:艾尼瓦爾·牙生, E-mail: mekit@126.com

基金項目:新疆維吾爾自治區自然科學基金面上項目(201211A048)

收稿日期:2014-12-19

中圖分類號:R 692.4

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2015)05-146-02DOI: 10.7619/jcmp.201505054