肝細胞肝癌組織中CD90表達變化及意義

代尚，寧淑芳，黃俊淇，駱成飄，謝雨萱，韋常宏，利基林，張力圖

(廣西醫科大學附屬腫瘤醫院，南寧530021)

肝細胞肝癌組織中CD90表達變化及意義

代尚，寧淑芳，黃俊淇，駱成飄，謝雨萱，韋常宏，利基林，張力圖

(廣西醫科大學附屬腫瘤醫院，南寧530021)

目的 觀察肝細胞肝癌(HCC)組織中腫瘤干細胞標記物CD90的表達變化，并探討其臨床意義。方法 采用免疫組化法檢測60例HCC組織(HCC組)、60例癌旁組織(癌旁組)及60例正常肝臟組織(對照組)中的CD90，分析其表達與HCC臨床病理參數的關系。結果 CD90陽性表達率HCC組為76.7%(46/60)、癌旁組為48.3%(29/60)、對照組為0，3組組間兩兩比較，P均<0.01。CD90表達與HCC患者的性別、民族、有無門靜脈瘤栓、包膜是否完整、TMN分期、病理分級有關(P均≤0.05)，與HCC患者的年齡、腫瘤大小、甲胎蛋白高低、乙肝病毒是否陽性無關(P均>0.05)。結論 CD90在HCC組織及癌旁組織中高表達，HCC組織中表達更高；癌組織中CD90表達有助于HCC患者預后的判斷，可為患者進行個體化診斷治療提供參考。

肝腫瘤；肝細胞肝癌；干細胞標記物；CD90；預后

原發性肝癌病死率位居癌癥中的第3位[1]，其中肝細胞肝癌(HCC)占原發性肝癌的85%～95%[2～3]。研究發現，HCC中40%由始祖細胞及干細胞分化而來，并且在HCC進展中起到關鍵作用[3,4]。在眾多干細胞標記物中，CD90是HCC非常重要的抗原標記物。CD90是一種錨定于糖基磷脂酰肌醇的糖蛋白，其可在T細胞、胸腺細胞、神經細胞、內皮細胞以及成纖維細胞等多種細胞中表達[5,6]。CD90分子作為一個重要的調節器，在細胞內以及細胞間的交互、凋亡、黏附以及轉移等方面起到相當大的作用[7]。2014年6～10月，我們觀察了HCC組織中CD90的表達變化，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床治療 收集2012年1月～2013年1月廣西腫瘤醫院肝膽外科病區住院并行肝癌切除術的HCC患者60例，男51例，女9例；年齡28～78歲，平均51.8歲；均為首診肝癌患者，術前未行任何相關治療；術中收集患者HCC(HCC組)及癌旁組織(癌旁組)各60份。同時取60例肝外傷患者的正常肝臟組織作為對照組。

1.2 方法

1.2.1 CD90檢測方法 將各組織石蠟標本切片，恒溫烘箱烤片；依次脫蠟，梯度乙醇脫水，高壓抗原修復；滴加3%過氧化氫，滴加一抗 4 ℃過夜；滴加二抗，DAB顯色；上鏡觀察到染色滿意為止，自來水沖洗終止染色。蘇木素染色3 min，自來水沖洗；1%鹽酸乙醇適度分化，溫水返藍；晾干組織切片，封片。CD90陽性細胞為細胞質呈黃色或者深黃色。每張切片400倍下隨機選擇5個視野，每個視野選擇100個細胞激，計算陽性細胞百分率。根據參考文獻來對實驗結果進行判斷[8]，根據每張切片的著色輕重程度分為沒有著色、輕度著色、中度著色以及重度著色，分別計為0、1、2、3分；根據著色的范圍大小來分為無著色、著色面積≤33%、著色面積33%～66%以及著色面積>67%，分別計為0、1、2、3分。兩者得分相加≥3分判定CD90陽性表達。

1.2.2 統計學方法 采用SPSS16.0統計軟件。計數資料以率表示，比較用χ2檢驗。P≤0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 各組織中CD90陽性表達率比較 CD90陽性表達率HCC組為76.7%(46/60)、癌旁組為48.3%(29/60)、對照組為0，3組組間兩兩比較，P均<0.01。

2.2 CD90表達與HCC臨床病理參數的關系 見表1。

3 討論

干細胞是一類沒有特定功能的未成熟細胞，能夠分化成多種類型，并且能夠保持自我更新的能力。它們在胚胎形成時期最為活躍，也因此形成了不同的人體組織。成人干細胞存在于人體已經分化的組織中，現在我們已經可以辨別出起源于干細胞所有的細胞類型。成人干細胞絕大多數存在于骨髓中，但最新研究認為干細胞也可存在于實質器官的腫瘤組織中。很多年前，研究人員就已經提出了腫瘤干細胞存在的假設[9,10]。腫瘤干細胞可能起源于突變的正常干細胞，或者來源于分化出來的已獲得某些干細胞特性的腫瘤細胞。我們知道絕大多數HCC起源于慢性肝疾病或肝硬化，小細胞異常增生、增生結節的出現和早期HCC被認為是HCC的發病進程，然而HCC潛在的進展分化等分子機制仍不夠明確[11,12]。小細胞異常增生具有染色體的缺失與獲得現象，這種現象可存在于肝癌細胞或其臨近癌旁部位，但不存在于周圍正常的肝實質細胞中[13]。本研究結果顯示，CD90陽性表達率HCC組為76.7%、癌旁組為48.3%、對照組為0，3組組間兩兩比較具有統計學意義。在HCC早期除了外顯子基因的改變，端?？s短在細胞克隆擴增中也起到了相當重要的作用。盡管我們已經了解到正常的肝臟干細胞在肝臟形成和修復中起主要作用，但我們現在認為HCC的損傷來源于肝實質細胞和肝祖細胞的異常分化[14]。肝干/祖細胞具有多項潛在分化與自我修復的能力，人類肝臟的干細胞存在于新生兒和胎兒的肝臟導管區。不管是成人還是兒童，干細胞在肝臟中都能保持相對穩定的數量和比例[15]。CD90的陽性結果已經證實其在肝臟的干細胞中是有意義的，CD90陽性干細胞在癌變中起到了最基本的作用。在患者的病態肝臟中，CD90表達在肝臟干細胞、肝成纖維細胞、肌成纖維細胞和腫瘤基質(CAFs)以及一小部分腫瘤干細胞中。這些新出現的報道可以說明肝癌組織中是存在肝癌干細胞的，印證了正常肝祖細胞提高自我修復等級出現可作為肝癌發生前的重大事件。有報道證實，起源于肝祖細胞的肝癌與沒有任何干細胞標記物表達的HCC相比，更有侵襲性[16,17]。

值得注意的是，CD90的上調并不是HCC特有的，在其他肝腫瘤樣本中也有相似的表現，說明CD90可能參與了肝臟腫瘤的形成過程。相關文獻已經證實，CD90作為一個潛在的腫瘤干細胞標記物在人類肝癌癌前病變中起到了關鍵作用[16,18]。肝癌發生的過程是最具代表性的混合型損傷如小細胞異常增生，它提高了HCC進展的風險[19]。有這樣一種假設認為，肝硬化使HCC加重。未經歷過任何癌前病變直接發生的HCC也在考慮范圍內，只是這種現象極其罕見。另一方面，關于HCC的細胞起源，有文獻闡明低分化的HCC來自干細胞，高分化的HCC來自成熟的肝細胞[1,20]。將之前的研究歸納一下，我們完全得出這樣一個結論，那就是低分化的HCC要比高分化HCC更容易著色。本文研究對于病理分期與CD90表達相關性的結果同樣支持這一結論。

在對干細胞生物學和腫瘤干細胞的不斷研究中，逐步意識到癌癥可能是一種干細胞疾病。腫瘤干細胞的散播可能是腫瘤轉移和復發的根本原因。通過對相關患者臨床資料的分析，我們不難得出在臨床分期、包膜完整度以及門脈瘤栓是否存在這幾個方面與CD90陽性表達相關，可以間接推測HCC患者CD90陽性表達與不良預后的關系。這可以使我們對腫瘤干細胞在HCC進展和控制上面提供更為深刻的理解。本實驗開展于廣西壯族自治區，屬于少數民族區域。研究選取了壯族與漢族，結果發現漢族CD90陽性表達率顯著高于壯族，具有統計學意義；這在以往的文獻中鮮有報道，在某些程度上可以將此作為一個切入點進行深入探討。

綜上所述，CD90在HCC組織及癌旁組織中高表達，HCC組織中表達更高；癌組織中CD90表達有助于HCC患者預后的判斷，可為患者進行個體化診斷治提供參考。

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Expression and clinical significance of CD90in hepatocellular carcinoma

DAIShang,NINGShu-fang,HUANGJun-qi,LUOCheng-piao,XIEYu-xuan,WEIChang-hong,LIJi-lin,ZHANGLi-tu

(TheAffiliatedTumorHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China)

Objective To explore the expression and clinical significance of CD90in hepatocellular carcinoma. Methods The expression of CD90in cancer tissues, para-carcinoma tissues and normal liver tissues were detected by immunohistochemical method, and to analyze the significance. Results The positive expression rate of CD90was 76.7% (46/60) in HCC group, 48.3%(29/60)in paraneoplastic group, 0 in normal group; there were significant differences among three groups (allP<0.01). The expression of CD90in HCC tissues was correlated with gender, ethnicity, portal vein tumor thrombus, envelope integrity, clinical and pathological staging (allP<0.05); which was not associated with age, tumor size, AFP values and the expression of hepatitis B (allP<0.05). Conclusion The expression of CD90increased in cancer tissues and para-carcinoma tissues, especially in cancer tissues, which maight be closely related to a poor prognosis of patients with liver cancer.

liver tumor; hepatocellular carcinoma; stem cell markers; CD90; prognosis

廣西科學研究與技術開發計劃基金資助項目(桂科攻1355005-3-10)；廣西醫科大學青年科學基金資助項目(GXMUYSF201215)。

代尚(1987-)，男，碩士研究生，研究方向為腫瘤分子診斷。E-mail： meteorite1987@126.com

張力圖(1966-)，男，主任技師，研究方向為腫瘤分子診斷。E-mail： zhanglitu@gmail.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2015.08.007

R735.7

A

1002-266X(2015)08-0021-03

2014-12-06)