胎膜早破產婦胎膜組織中TRAIL、MMP-2基因及蛋白表達變化

崔世紅，陳娟，孫俊燕，程國梅，杭中霞，李園園

（鄭州大學第三附屬醫院，鄭州 450052）

胎膜早破即臨產前胎膜發生破裂，是產科常見的合并癥，發病率呈逐年上升趨勢［1］。胎膜早破發病機制較復雜，目前認為主要與感染、凋亡有關。腫瘤壞死因子相關凋亡配體（TRAIL）能通過與其相應的受體結合啟動細胞內死亡受體通路，可特異性地在體內迅速誘導細胞凋亡。基質金屬蛋白酶（MMPs）可降解細胞外基質，導致胎膜組織結構溶解，對維持胎膜完整性起重要作用。本研究觀察了胎膜早破產婦胎膜組織中TRAIL、MMP-2 mRNA及蛋白的表達變化，探討TRAIL、MMP-2與胎膜早破發病的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2014年6～11月因胎膜早破行剖宮產術結束妊娠的產婦30例（胎膜早破組），年齡（27.6 ±2.9）歲，孕周（38.9 ±1.3）周。隨機選取同期剖宮產分娩的健康產婦30例（對照組），年齡（27.4 ±1.1）歲，孕周（39.0 ±1.3）周。均無其他母體疾病、產科并發癥，剖宮產指征為胎位異常、骨盆狹窄等。兩組產婦年齡、孕周等資料具有可比性。兩組胎盤娩出后取胎膜破口處至胎盤邊緣的胎膜組織，約1 cm×4 cm，冷生理鹽水沖洗表面血跡，使其呈卷狀，用大頭針固定，分為兩部分，一部分放入凍存管后迅速投入液氮，一部分甲醛固定。

1.2 TRAIL、MMP-2蛋白檢測 采用免疫組化SP法。TRAIL、MMP-2主要定位于絨毛膜滋養細胞、羊膜上皮細胞的胞質，呈黃棕色或棕褐色染色。根據染色程度及陽性細胞百分比綜合進行評分。染色強度評分:無色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分;無陽性細胞計0分，陽性細胞百分比≤10%計1分，陽性細胞百分比11% ～50%計2分，51% ～75%計3分，＞75%計4分;染色強度與陽性細胞百分比得分相乘，＞3為陽性［2］。

1.3 TRAIL、MMP-2 mRNA 檢測 采用 real-time PCR法。采用TRIzol法提取胎膜組織中總RNA，反轉錄為cDNA，進行實時定量PCR反應，將GAPDH作為內參基因，引物由上海生物工程有限公司合成。TRAIL上游引物序列為 5＇-AGAGGCACCACTAAAAGATCGC-3＇，下游引物序列為 5＇-GGTTTCACTATGTTGGTCACTATGG-3＇，擴增產物 133 bp;MMP-2上游引物序列為5＇-TGACGTGGACATCCGCAAAG-3＇，下 游 引 物 序 列 為 5＇-CTGGAAGGTGGACAGCGAGG-3＇，擴增產物280 bp;GAPDH上游引物序列為 5＇-TCGTGGAAGGACTCATGACC-3＇，下游引物序列為 5＇-AGGGATGATGTTCTGGAGAG-3＇，擴增產物226 bp。PCR反應條件:95℃ 10 min;95℃ 30 s，60 ℃ 1 h，35 個循環，重復 3 次，以 2-ΔΔCt法計算mRNA相對表達量。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計量資料用±s表示，兩組比較采用t檢驗;計數資料比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組胎膜組織中TRAIL、MMP-2蛋白表達比較 胎膜早破組胎膜組織中TRAIL表達陽性26例（87%）、MMP-2表達陽性23例（77%），對照組分別為17例（57%）、15例（50%）。兩組胎膜組織中TRAIL、MMP-2蛋白陽性表達率相比，P均＜0.05。

2.2 兩組胎膜組織中TRAIL、MMP-2 mRNA表達比較 胎膜早破組胎膜組織中TRAIL mRNA相對表達量為1.62 ±0.18、MMP-2 mRNA 相對表達量為1.78 ± 0.54，對照組分別為 0.99 ± 0.17、1.03 ±0.49。兩組胎膜組織中 TRAIL、MMP-2 mRNA相對表達量相比，P均 ＜0.05。

3 討論

細胞增殖/凋亡平衡是胎盤發揮作用的基礎。胎膜早破可能是多個基因調控、多種因素相互作用致胎膜細胞凋亡、降解的過程。有學者［3］發現足月妊娠產婦胎膜破裂后絨毛膜、羊膜破裂區附近有許多凋亡細胞，而在遠離破裂區僅有少量凋亡細胞，認為細胞凋亡與胎膜早破的發生有關［4］。

TRAIL/TRAIL受體系統參與整個妊娠期間胎盤、胎膜自我環境的穩定［5］。TRAIL是腫瘤壞死因子家族的超家族成員之一。TRAIL共有5種受體，其中 DcR1、DcR2、OPG 為誘騙受體，DR4、DR5 為死亡受體［6］。DR4、DR5與 TRAIL結合后能激活凋亡信號轉導途徑，通過線粒體途徑及死亡受體途徑進一步激活含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）級聯反應系統，最終引起細胞凋亡。Phillips等［3］發現胎盤、細胞滋養層細胞、巨噬細胞中均存在TRAIL及其受體的轉錄物。當機體受到內外環境的影響，特別發生感染時，細胞因子分泌增多，上調TRAIL及其受體表達，使TRAIL/TRAIL受體系統平衡被打破，母胎界面免疫平衡發生紊亂，細胞凋亡及MMPs分泌增多，從而導致胎膜早破的發生。MMP-2可在人妊娠期胎膜連續表達［7］，調節胎膜細胞外基質蛋白的分解代謝［8］。而MMP-2過高表達可加劇胎膜中的膠原降解，使胎膜脆性增加，胎膜強度及韌性降低，局部抗張能力下降，導致胎膜早破［9，10］。TNF-α 可增強胎膜組織中 MMPs基因的表達及活性，致使胎膜軟化和破裂［11］;炎癥因子分泌增多也可誘導或激活MMPs降解細胞外基質，破壞胎膜膠原［12，13］。Sandig 等［14］發現胎膜早破產婦羊膜絨毛膜、胎盤的MMP-2基因的表達和活性增加也進一步證明了這一觀點。

本研究結果顯示，胎膜早破產婦組胎膜組織中TRAIL、MMP-2蛋白陽性表達率升高，TRAIL、MMP-2 mRNA 表達上調，與相關研究［15，16］結果一致。我們推測，TRAIL、MMP-2表達升高促進滋養細胞過度凋亡和胎膜降解，這可能是胎膜早破發生的重要原因。

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