結核分枝桿菌H37Rv結合肽的篩選研究

孫克讓 李 健

(河北省玉田縣中醫醫院檢驗科，河北 玉田 064100)

在當今社會，結核病仍然是困擾人們的傳染病之一，給人類的身體健康帶來不利影響，病死率依舊很高［1］。中國死于結核病的人數位居世界前列，并且感染人數也較多，由于藥物使用不當，還出現了耐藥結核病，造成結核病難以治愈，給患者的身體帶來不可逆傷害，影響患者的健康。為了減少疾病的發生，如何檢測病原體就成為醫學專家研究的重點。本研究通過進行結核分枝桿菌H37Rv結合肽的篩選試驗，發現結核分枝桿菌與結合肽的親和力較強，可以有效檢測出結核分枝桿菌，為結核病體外檢測提供了方便快捷的方法，結果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010－10—2013－10于河北省玉田縣中醫醫院就診的肺結核患者，將從他們痰液中提取不同的結核分枝桿菌用于篩選試驗。同時選取非分枝桿菌進行篩選，與分枝桿菌進行對比。所選的分枝桿菌有結核分枝桿菌H37Rv、膿腫分枝桿菌、金色分枝桿菌等，非分枝桿菌選擇的是白色念珠菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌。對所有菌體進行篩選試驗，觀察其與結合肽的結合能力。

1.2 篩選方法 將所有菌體在液體培養基內進行培養，并進行滅活，再把菌體進行5 000×g離心10 min、0.9%氯化鈉注射液洗滌2次后進行篩選。從第2輪篩選開始將恥垢分枝桿菌加入H37Rv結合肽菌液，用非特異性洗脫緩沖液進行洗滌后得到特性結合的結核分枝桿菌噬菌體，之后開始脫氧核糖核酸(DNA)單鏈擴增，將最后提純的單鏈DNA進行酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測。比較不同菌種對與結合肽的親和力，試驗重復3次。

1.3 觀察指標 觀察記錄不同菌體結合肽的結合活性，并記錄ELISA檢測結果。

1.4 統計學方法 應用SPSS 15.0軟件進行統計學分析，計量資料以均數±標準差(±s)表示，組間比較采取t檢驗;計數資料率的比較采取χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

ELISA檢測結果見表1。

表1 不同桿菌ELISA檢測結果

由表1可見，結核分枝桿菌與H37Rv結合肽的結合能力最強，其余分枝桿菌(除結核分枝桿菌外的分枝桿菌)較弱，非分枝桿菌的親和力最弱，接近于無，差異均具有統計學意義(P＜0.05)。

3 討論

對于結核病的治療最主要還是在于早發現、早治療，為了解決這個問題，許多專家都致力于研究結核分枝桿菌的檢測［5］。為了能準確的發現病菌，本研究通過觀察結核分枝桿菌H37Rv結合肽的篩選，得到了有效的檢測方法，可以在體外準確檢測結核分枝桿菌的存在，為結核患者及早診斷提供了有效檢查手段，為治療提供了有力保障。結核分枝桿菌，H37Rv結合肽的篩選可以發現滅活結核分枝桿菌，H37Rv靶分子的親和力最強［6］，有利于檢測的進行。

通過肽庫進行篩選檢驗結核分枝桿菌H37Rv結合肽，能夠有效的對其親和力進行檢測，可以將噬菌體富集起來，明顯看出親和力的程度。在篩選時加入恥垢分枝桿菌進行特異性結合后［7］，可以使菌體的特異性提高，但不會影響最終結果。因為結核分枝桿菌的生長方式是慢性生長，而恥垢分枝桿菌的生長方式是快速生長的，可以區分開來。采用ELISA對結果進行檢驗，增加準確性［9］，并且簡單易行，是有效的輔助檢查手段。在熒光顯微鏡下可以發現，結核分枝桿菌H37Rv的熒光效果最強，其余分枝桿菌效果不明顯［8］，非分枝桿菌無熒光效應，可以明顯的區分桿菌的種類。通過本研究的結果可以發現，結合分枝桿菌H37Rv結合肽是一種良好的體外檢測結核桿菌方法。

綜上所述，結核分枝桿菌H37Rv結合肽的篩選有助于體外檢測結核桿菌，并且可以發現H37Rv結合肽與結核分枝桿菌的親和力最好，能準確檢測出結核桿菌，是有效的體外檢測方法，對于結核患者病菌及早發現提供了有效檢測方法，是值得臨床上進行使用的輔助檢查方法。

［1］ 楊華，張麗婷，李連青，等.結核分枝桿菌H37Rv結合肽的篩選研究［J］.中華結核和呼吸雜志，2011，34(3):192－196.

［2］ 張麗婷，胡忠義，李連青，等.結核分枝桿菌分泌蛋白64抗原模擬表位的篩選研究［J］.中華結核和呼吸雜志，2010，33(5):382－383.

［3］ 趙琳，尤輝，任郭俠，等.肺結核中醫證候規律的臨床研究［J］.陜西中醫，2011，32(2):173－174.

［4］ 弓顯鳳，張熙祎，張錦博，等.中醫辨證配合化療治療肺結核54例［J］.陜西中醫，2012，33(2):183－185.

［5］ 牛雪，吳叢梅，高冷，等.結核分枝桿菌H_(37)Rv異檸檬酸裂解酶基因的克隆表達及活性［J］.吉林大學學報:理學版，2011，49(4):777－781.

［6］ 何霞，譚守勇，羅春明，等.應用MPT64為靶標快速檢測結核分枝桿菌生長的研究［J］.廣東醫學，2010，31(2):222－224.

［7］ 陸學東，孫會平，張銀輝.免疫印跡技術在臨床結核病血清學診斷中的應用［J］.中華結核和呼吸雜志，1993，16(6):357－359.

［8］ 王盛蘭，陳玲，張建勇，等.結核分枝桿菌廣泛耐藥株與耐多藥株菌體蛋白質組學比較研究［J］.中國人獸共患病學報，2011，27(9):820－824.