CCN1和Mel-18在結腸癌中的表達及其臨床病理意義

莊粵蕾

(湛江中心人民醫(yī)院病理科，廣東 湛江 524037)

CCN1和Mel-18在結腸癌中的表達及其臨床病理意義

莊粵蕾

(湛江中心人民醫(yī)院病理科，廣東 湛江 524037)

目的 探討CCN1和Mel-18在結腸癌中的表達及其臨床病理意義。方法采用免疫組化法觀察56例手術切除的結腸癌組織及相應的癌旁組織中CCN1和Mel-18的表達情況，分析兩種蛋白與結腸癌臨床病理特征的關系及預后意義。結果CCN1蛋白在結腸癌組織中的表達陽性率為76.79%，明顯高于相應癌旁組織的14.29%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且在不同臨床分期及有無淋巴結轉(zhuǎn)移結腸癌組織中表達的陽性率比較差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；Mel-18蛋白在結腸癌組織中的表達陽性率為39.29%，明顯低于相應癌旁組織的66.07%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且在不同臨床分期及有無淋巴結轉(zhuǎn)移結腸癌組織中表達的陽性率比較差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；相關性分析顯示，CCN1和Mel-18蛋白在結腸癌組織中的表達呈負相關(r=-0.472，P＜0.05)。結論CCN1在結腸癌中的表達上調(diào)和Mel-18在結腸癌中的表達下調(diào)可能與結腸癌的發(fā)生有關，有可能成為新的預測結腸癌惡性程度及是否發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的有效分子標志物。

結腸癌；CCN1；Mel-18；

CCN1是一種生長因子誘導產(chǎn)生的富含半胱氨酸的分泌性肝素連接蛋白，Mel-18屬于多梳基因家族的重要成員，已有多項研究發(fā)現(xiàn)CCN1和Mel-18蛋白在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，但兩種蛋白在不同腫瘤中的研究結果并不一致[1-2]。本研究分別檢測了CCN1和Mel-18蛋白在結腸癌組織及相應的癌旁正常組織中的表達情況，并分析兩種蛋白蛋白的表達與結腸癌的臨床病理特征的相關性，以初步探討CCN1和Mel-18蛋白與結腸癌發(fā)生和發(fā)展的關系，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院病理科2011年6月至2013年4月手術切除的結腸癌及相應癌旁結腸黏膜組織(距癌灶邊緣≥5 cm[3])標本各56例，均經(jīng)術后病理組織學確診。所有病例術前均未行放化療治療，臨床資料齊全，均簽署知情同意書。其中男性32例，女性24例；年齡38～79歲，平均(55.82±7.73)歲。

1.2 方法 采用免疫組化二步法檢測結腸癌及相應癌旁正常組織中CCN1、Mel-18的表達情況。鼠抗人多克隆抗體CCN1、兔抗人多克隆抗體Mel-18和免疫組織化學試劑盒均購自北京博奧森生物有限公司。使用時CCN1抗體按1:200稀釋，Mel-18抗體按1:100稀釋，DAB顯色，蘇木素輕度復染，鹽酸酒精固定，梯度酒精脫水，透明封片，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，光鏡下觀察并攝片。采用已知陽性標本切片作陽性對照，并采用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判定[4]所有標本切片均在雙盲條件下觀察，并根據(jù)陽性細胞計數(shù)及著色強弱判定表達結果。選取5個高倍鏡視野，根據(jù)陽性細胞率和著色強弱綜合判斷。陽性細胞率：0%為0分，1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～70%為3分，71%～100%為4分。著色強弱：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分。兩項得分相乘：0～4分為陰性(-)表達，≥5分為陽性(+)表達。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以均數(shù)±標準差(x-±s)表示，計量資料比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，結腸癌組織中CCN1、Mel-18蛋白表達間的相關性檢驗采用Spearman相關分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 結腸癌及相應癌旁組織中CCN1和Mel-18的表達 CCN1陽性染色呈棕黃色或棕褐色顆粒狀，定位于細胞漿，Mel-18陽性染色呈黃色顆粒狀，定位于細胞核，見圖1。CCN1蛋白在結腸癌組織中的陽性表達率明顯高于相應癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；Mel-18蛋白在結腸癌組織中的陽性表達率明顯低于相應癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

圖1 CCN1和Mel-18在結腸癌組織及相應癌旁組織中的表達

表1 CCN1和Mel-18蛋白在結腸癌及相應癌旁正常組織中陽性表達率的比較[例(%)]

2.2 CCN1和Mel-18蛋白與結腸癌臨床病理特征的關系 CCN1和Mel-18蛋白在結腸癌組織中的表達與患者的性別、年齡、腫瘤大小、分化程度無關(P＞0.05)。CCN1蛋白在不同臨床分期結腸癌組織中的陽性表達率比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，以Ⅲ、Ⅳ期最高，其次為Ⅱ期，最低為Ⅰ期；CCN1蛋白在有淋巴結轉(zhuǎn)移結腸癌組織中的陽性表達率明顯高于無淋巴結轉(zhuǎn)移結腸癌組織(P＜0.05)；Mel-18蛋白在不同臨床分期結腸癌組織中的陽性表達率比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，以I期最高，其次為Ⅱ期，最低為Ⅲ、IV期；CCN1蛋白在有淋巴結轉(zhuǎn)移結腸癌組織中的陽性表達率明顯低于無淋巴結轉(zhuǎn)移結腸癌組織(P＜0.05)，見表2。

表2 CCN1和Mel-18蛋白的表達與結腸癌臨床病理特征的關系

2.3 CCN1和Mel-18蛋白在結腸癌組織中表達的相關性 結腸癌組織中CCN1和Mel-18蛋白雙陽性表達率為17.86%(10/56)，雙陰性率為1.79%(1/56)，可見CCN1和Mel-18蛋白在結腸癌組織中的表達水平呈負相關(r=-0.472，P=0.008)，見表3。

表3 CCN1和Mel-18蛋白在結腸癌組織中表達的相關性(例)

3 討論

結腸癌是我國常見惡性腫瘤之一，近年來由于人們飲食習慣、生活方式發(fā)生變化，以及環(huán)境、基因突變等因素，結腸癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，且具有年輕化趨勢[5]。結腸癌的發(fā)生、發(fā)展是一個復雜的多階段過程，癌基因激活、抑癌基因失活及腫瘤血管生成是其發(fā)生、發(fā)展的基礎。

CCN1是結締組織生長因子(CCN)家族成員之一[6]，近年來多項研究發(fā)現(xiàn)CCN1在腫瘤微血管形成及腫瘤細胞增殖、粘附、擴散轉(zhuǎn)移、耐藥性產(chǎn)生等過程中起重要作用[7]。國內(nèi)外大量研究[8-10]顯示，CCN1的功能具有顯著的組織特異性，其在不同組織來源的腫瘤中的表達水平及功能差異較大。在乳腺癌、胃癌、食管癌、前列腺癌等腫瘤組織中CCN1表達水平明顯升高，在功能上可增強腫瘤細胞增殖、遷徙能力；而在非小細胞癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌等組織中CCN1表達水平明顯下降，在功能上起抑癌基因的作用，低表達可引發(fā)腫瘤形成和發(fā)展。本研究結果顯示，CCN1在結腸癌組織中的陽性表達率明顯高于相應的癌旁組織，且隨著結腸癌臨床分期進展和淋巴結轉(zhuǎn)移，CCN1陽性表達率明顯升高，提示CCN1參與了結腸癌的發(fā)生，且在結腸癌的發(fā)展中起促進腫瘤細胞增殖、遷徙作用。

Mel-18屬于多梳基因家族成員[11]，有研究報道[12]Mel-18在乳腺癌、胃癌、前列腺癌等腫瘤組織中表達強度降低，外源性Mel-18過表達可導致腫瘤細胞生長和增殖速度減慢，提示Mel-18在腫瘤進展過程中起抑制作用。Mel-18抑制腫瘤進展的機制可能是：抑制cyclin D2活性，導致其與CDK復合物結合受阻，阻滯腫瘤細胞由G1期轉(zhuǎn)化至S期；抑制c-myc/cdc25通路，進而抑制cyclin-CDK復合物的活性；通過與具有癌基因作用的Hox基因結合，從而抑制其活性[13-14]。本研究顯示Mel-18在結腸癌組織中的陽性表達率明顯低于相應的癌旁組織，且隨著結腸癌臨床分期進展和淋巴結轉(zhuǎn)移，Mel-18陽性表達率明顯降低，提示Mel-18的異常表達與結腸癌的發(fā)生發(fā)生有關，其在結腸癌中可能起抑癌基因的作用，在結腸癌的發(fā)生和發(fā)展過程中起抑制作用。

本研究發(fā)現(xiàn)CCN1和Mel-18在結腸癌組織中的表達呈顯著負相關，CCN1在結腸癌中的表達上調(diào)，而Mel-18表達下調(diào)，進一步提示CCN1在結腸癌發(fā)生發(fā)展過程中起癌基因的作用，促進結腸癌的發(fā)生發(fā)展，而Mel-18起抑癌基因的作用，抑制結腸癌的發(fā)生發(fā)展。本研究結果證實CCN1在結腸癌中的表達上調(diào)和Mel-18在結腸癌中的表達下調(diào)可能與結腸癌的發(fā)生有關，有可能成為新的預測結腸癌惡性程度及是否發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的有效分子標志物，其作用機制有待進一步深入研究。

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Expression and clinical significance of CCN1 and Mel-18 in colon cancer.

ZHUANG Yue-lei.Department of Pathology,Zhanjiang People's Central Hospital,Zhanjiang 524037,Guangdong,CHINA

Objective To discuss the expression and clinical significance of CCN1 and Mel-18 in colon cancer.MethodsFifty-six cases of colon cancer tissues and their matched pericarcinous tissues were respectively detected by immunohistochemical technique,to analyze the relationship of the expression of CCN1 and Mel-18 protein with the clinical pathological features.ResultsThe positive rate of CCN1 expression in colon cancer tissues (76.76%)was significantly higher than that of pericarcinous tissue(14.29%,P＜0.05),and there were no significant difference of CCN1 positive expression between different clinical stages and lymph node metastasis(P＜0.05).The positive rate of Mel-18 expression in colon cancer tissues(39.29%)was significantly lower than that of pericarcinous tissue(66.07%,P＜0.05),and there were no significant difference of Mel-18 positive expression between different clinical stages and lymph node metastasis(P＜0.05).There was a negative correlation between the expression of CCN1 and Mel-18 in colon cancer tissues(r=-0.472,P＜0.05).ConclusionThe up-regulated CCN1 expression and down-regulated Mel-18 expresson may be closely related with the occurrence of colon cancer,as a possible effective molecular markers to forecast the malignant degree and distant metastasis of colon cancer.

Colon cancer;CCN1;Mel-18

R735.3+5

A

1003—6350（2015）14—2153—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.14.0777

2014-12-08)

莊粵蕾。E-mail：785553163@qq.com