PCR法在奶牛乳房炎病原菌鑒定中的應(yīng)用探析

金東春 鞠重基　黃京華 金雪梅

摘 要 乳房炎是乳房在化學(xué)、微生物或物理等的刺激之下所發(fā)生的一種疾病，是奶牛的一種常見(jiàn)疾病。基于此，立足于PCR法的發(fā)展現(xiàn)狀，就PCR發(fā)在奶牛乳房炎病原菌鑒定中的應(yīng)用進(jìn)行了系統(tǒng)闡述，強(qiáng)化對(duì)PCR的發(fā)展及應(yīng)用的認(rèn)識(shí)。

關(guān)鍵詞 PCR法；奶牛；乳房炎；病原菌；鑒定

中圖分類號(hào)：F323.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號(hào)：1673-890X（2015）03--02

乳房炎是奶牛最為常見(jiàn)的一種疾病，對(duì)奶牛產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有較大的影響。當(dāng)前，在對(duì)奶牛乳房炎病原菌的鑒定中，主要采取微生物培養(yǎng)法，這種傳統(tǒng)的鑒定方法具有耗時(shí)長(zhǎng)、費(fèi)用高等缺點(diǎn)，在奶牛產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化發(fā)展的進(jìn)程中，表現(xiàn)處于一定的滯后性。但隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，奶牛乳房炎病原菌的鑒定方法也得到了轉(zhuǎn)變，以PCR法鑒定病原菌表現(xiàn)出諸多的優(yōu)越性：檢測(cè)靈敏度高；檢測(cè)時(shí)間；檢測(cè)成本低；檢測(cè)范圍廣[1-2]。這些顯著的優(yōu)越性，決定了其在奶牛乳房炎病原菌鑒定中的應(yīng)用價(jià)值。當(dāng)前，PCR法主要有普通PCR診斷法、多重PCR診斷法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR診斷法。具體如圖1所示。本文立足于PCR法的技術(shù)特點(diǎn)，就其在奶牛乳房鑒定中的應(yīng)用作如下具體闡述。

圖1 PCR診斷法

1 普通PCR診斷法

現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，促使了PCR法在奶牛乳房炎病原菌的診斷中的應(yīng)用發(fā)展，并逐步建立起了相對(duì)成熟的PCR乳房炎分子診斷方法。從實(shí)際來(lái)看，國(guó)外很多國(guó)家在PCR法的應(yīng)用研究上已有諸多成效。表1是國(guó)外各國(guó)在奶牛乳房炎分子PCR法方面的研究成果[3]。從表1中可以看出，PCR診斷法在分子技術(shù)不斷發(fā)展的大背景之下，PCR法在乳房炎病原菌的鑒定中，起到越來(lái)越重要的應(yīng)用價(jià)值，并有廣泛的鑒定范圍，契合當(dāng)前的技術(shù)發(fā)展需求。

2 多重PCR診斷法

從實(shí)際來(lái)看，引發(fā)奶牛乳房炎的病原菌的種類日益多樣化，這就對(duì)普通PCR法有了新的要求，強(qiáng)調(diào)多重PCR診斷法在實(shí)際中的應(yīng)用。當(dāng)前，在多重PCR診斷研究中，經(jīng)歷了幾個(gè)時(shí)期[4]。2001年，多重PCR體系在Riffon下建立，實(shí)現(xiàn)對(duì)4種病原菌的同時(shí)鑒定，并且在實(shí)際的應(yīng)用中，具有快速、準(zhǔn)確的實(shí)際效果；，2002年，Ramesh建立雙重PCR體系，實(shí)現(xiàn)了對(duì)病原菌中的結(jié)腸炎桿菌和金黃色葡萄球菌的鑒定。而在我國(guó)，對(duì)于多重PCR診斷法的研究及應(yīng)用也在不斷深入，張善瑞建立了多重PCR體系，實(shí)現(xiàn)了對(duì)無(wú)乳鏈球菌、金黃色葡萄菌及大腸桿菌的鑒定，并取得了良好的應(yīng)用效果。

3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR診斷法

PCR法隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，迎來(lái)了飛躍式發(fā)展，而實(shí)時(shí)熒光定量PCR診斷法就是最顯著的體現(xiàn)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR診斷法實(shí)現(xiàn)了機(jī)遇熒光信號(hào)對(duì)整個(gè)PCR擴(kuò)增過(guò)程的檢測(cè)，并通過(guò)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，最終對(duì)未知模板進(jìn)行分析。當(dāng)前這一方法正處于研究發(fā)展階段，其中“Real-time PCR”技術(shù)最為顯著[5]。一方面，相比于傳統(tǒng)的PCR法，其檢測(cè)靈敏度更高，且能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)細(xì)菌數(shù)量的明確檢測(cè)；另一方面，Real-time PCR具有可定量且省時(shí)省力的特點(diǎn)，契合現(xiàn)實(shí)的需求。

總之，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，奶牛乳房炎病原菌鑒定技術(shù)也迎來(lái)了發(fā)展的新階段，PCR法的研究與發(fā)展，提高了奶牛乳房炎病原菌鑒定的準(zhǔn)確性，并省時(shí)省力，非常契合當(dāng)前的社會(huì)發(fā)展需求。但PCR法在應(yīng)用及發(fā)展中，也存在諸多問(wèn)題，如普通PCR法難以實(shí)現(xiàn)對(duì)不同細(xì)菌感染進(jìn)行檢測(cè)，且不做做出預(yù)先估計(jì)的乳房炎病例；而對(duì)于多重PCR法，其在檢測(cè)靈敏度上相對(duì)較低，不能準(zhǔn)確細(xì)菌數(shù)量。雖然Real-time PCR在前兩者的基礎(chǔ)上有了改善和發(fā)展，但高昂的設(shè)備儀器仍在現(xiàn)實(shí)中有一定的制約性。

參考文獻(xiàn)

[1]劉磊.石家莊地區(qū)奶牛乳房流行病學(xué)調(diào)查及相關(guān)研究[D].保定：河北師范大學(xué)，2009（4）.

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[3]王金濤，張孝軍.奶牛乳房炎診斷方法研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)，2014（9）.

[4]王鳳.奶牛乳房炎病原菌的分離鑒定、血清型及耐藥性研究[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013（6）.

[5]高健，劉修權(quán).奶牛乳房炎主要病原菌的快速檢測(cè)[C].中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2010年學(xué)會(huì)——第二屆中國(guó)獸醫(yī)臨床大會(huì)論文集[A].2010：18-121.

（責(zé)任編輯：劉昀）