白銀市番茄黃化曲葉病毒的鑒定

李春雷， 文朝慧， 王溪橋， 尤 佳

（甘肅出入境檢驗檢疫局綜合技術中心，甘肅 蘭州 730010）

番茄（Solanum lycopersicum Mill.）屬茄科番茄屬，是世界上最重要的蔬菜作物之一［1］。番茄黃化曲葉病毒（TYLCV）是一種雙生病毒（geminiviruses）病害，以煙粉虱作為傳播媒介［2］。其大面積爆發對經濟發展造成了不同程度的破壞［3～6］。據不完全統計，目前我國番茄黃花曲葉病毒病年發生面積超過6.7萬hm2，年經濟損失至少20億元［7］。2011年，甘肅省武山縣首次發現TYLCV，2012年，相繼在武威市涼州區、民勤縣的日光溫室發現TYLCV，并于2013年在武威市設施番茄主產區開始流行蔓延，造成嚴重損失［8～10］。鑒于此，我們對發生于白銀市的疑似TYLCV樣品進行分子鑒定，并進行了序列同源性比對及系統發育關系的分析，現報道如下。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

在甘肅白銀市水川鎮張莊村選取上部葉片黃化、邊緣向上卷曲、植株生長變緩甚至停滯，矮化變小，具有典型黃化曲葉病毒病癥狀的番茄葉片。DNA提取試劑盒（PlantGenomic DNA Extraction Kit）購自天根生化科技有限公司；PCR反應體系試劑購自寶生物工程有限公司。引物的合成與片段測序由大連寶生物工程有限公司完成。

1.2 實驗方法

1.2.1 特異性引物的設計 根據李常保等的研究［11］，合成了上游引物TYLCV-F：5'-ACGCATGCCTC TAATCC AGTGTA- 3'和 TYLCV-R：5'-CCAATAAGGCGTAAGCGTGTA GAC-3'。所要擴增的目的條帶為543 bp。該引物是針對TYLCV的特異區段設計，只與TYLCV的特異區結合，因此，可以通過PCR技術來判斷白銀地區番茄植株是否感染TYLCV。

1.2.2 植物基因組DNA提取及PCR擴增 取具有番茄黃化曲葉病毒病癥狀的番茄葉片，按照植物基因組DNA提取試劑盒的說明提取番茄基因組DNA，利用引物TYLCV-F和TYLCV-R進行PCR擴增?！?br>