胡楊和灰葉胡楊不同器官寄藏的可培養微生物種類研究

李 倩 谷思辰 王玉麗 李志軍 李健強*

(1中國農業大學植物病理學系/農業部植物病理學重點開放實驗室， 北京 100193)(2 種苗健康北京市工程研究中心/種子病害檢驗與防控北京市重點實驗室， 北京 100193)(3 塔里木大學植物科學學院/新疆生產建設兵團塔里木盆地生物資源保護利用重點實驗室，新疆 阿拉爾 843300)

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胡楊和灰葉胡楊不同器官寄藏的可培養微生物種類研究

李 倩1, 2谷思辰1, 2王玉麗3李志軍3李健強1, 2*

(1中國農業大學植物病理學系/農業部植物病理學重點開放實驗室， 北京 100193)(2 種苗健康北京市工程研究中心/種子病害檢驗與防控北京市重點實驗室， 北京 100193)(3 塔里木大學植物科學學院/新疆生產建設兵團塔里木盆地生物資源保護利用重點實驗室，新疆 阿拉爾 843300)

采用洗滌法和平皿檢測等方法，研究了胡楊和灰葉胡楊不同器官寄藏的可培養微生物種類。結果顯示，胡楊種子內部和外部帶菌量顯著高于灰葉胡楊；灰葉胡楊的芽、葉柄及枝條帶菌量均高于胡楊，其中葉柄、枝條上部和中部帶菌量顯著高于胡楊；胡楊和灰葉胡楊枝條帶菌率由低到高依次為：上部<中部<下部，且兩個物種枝條下部帶菌率均達100 %。從胡楊及灰葉胡楊種子、芽、葉柄及枝條各器官分離到可培養的真菌7株、細菌2株；經形態學及分子生物學方法鑒定，分別為Alternaripp.(鏈格孢屬，3種)、Aspergillusspp.(曲霉屬，2種)、Nigrosporasp.(黑孢霉屬)、Epicoccumsp.(附球菌屬)、Stenotrophomonasspp.(嗜麥芽窄食單胞菌屬，2種)，其中黑孢霉屬和附球菌屬真菌系胡楊和灰葉胡楊內生菌首次報道；鏈格孢屬、曲霉屬真菌及嗜麥芽窄食單胞菌屬細菌為胡楊和灰葉胡楊種子外部攜帶可培養微生物首次報道。

胡楊 灰葉胡楊；種子；器官；可培養微生物

胡楊(PopuluseuphraticaOliv.)和灰葉胡楊(P.pruinosaSchrenk.)是珍稀和瀕危的珍貴物種，屬楊柳科(Salicaceae)楊屬(Populus)胡楊亞屬落葉喬木[1-2]。近年來由于人為采伐、過度放牧、生存條件惡化等原因，胡楊和灰葉胡楊林大面積銳減[2]。胡楊和灰葉胡楊種子個體微小，種皮薄，種子活力極難保持[3]；且苗期易受粉被柵銹菌(MelampsorapruinosaeTranz.)侵染引起銹病[4-5]，上述兩方面已成為胡楊和灰葉胡楊人工育苗造林的瓶頸問題。胡楊和灰葉胡楊抗逆性強[6]，具有防風固沙、涵養水源、調節地方氣候等一系列重要的生態價值和功能[7]，其內生微生物種類及其在與胡楊和灰葉胡楊極端的荒漠沙漠環境共進化過程中形成特殊的生物學特征、潛在的風險、應用價值以及生物資源挖掘等，是值得高度關注和深入研究的問題。

植物內生菌(endophyte)是指那些在其生活史的一定階段或全部階段生活于健康植物各種組織和器官內部，又不引起植物明顯病害的微生物[8]。植物體內普遍存在著內生菌[9]，通常情況下大多數為條件致病菌，長期寄生于植物體內，與寄主植物協同進化，已經成為一種新的微生物資源，得到了研究者的廣泛關注。研究表明，植物內生菌能夠產生抗生素和植物生長調節物質[9]，因此具有植物病蟲害生物防治、促進植物生長等功能，是寶貴的生防資源。研究植物微生態組成是保護植物健康和挖掘植物內生微生物資源的重要途徑。植物內生菌能夠產生抗生素類物質，發揮抗菌防病作用[10]。內生附球菌(Epicoccumnigrum)孢子懸浮液可以防治桃褐腐病[11]；來自于桂樹的內生真菌Muscodoralbus產生的揮發性氣體物質能夠抑制或殺死多種植物病原真菌[12]、細菌[12]、線蟲[13]及害蟲[14]，該菌已成功開發為生物熏蒸劑廣泛應用于糧食作物、蔬菜及水果上的土傳病害、種傳病害及采后病害防治。目前國內外僅見對分離自胡楊樹皮的內生菌鏈格孢屬(Alternaria)、曲霉屬(Aspergillus)真菌菌株生理特性[15]、胡楊樹干內存液內生細菌[16]和酵母菌[17]以及胡楊根際[18]和土壤微生物多樣性[19-20]的研究，國內外有關胡楊和灰葉胡楊主要繁殖材料種子及枝條等器官攜帶的可培養微生物種類及數量的研究鮮有報道。基于此，本文選擇采自新疆塔里木地區的胡楊和灰葉胡楊種子、芽、葉柄和枝條等為試驗材料，開展了不同器官寄藏的可培養微生物的分離培養、種類鑒定及數量比較研究，旨在探明胡楊及灰葉胡楊各器官攜帶微生物的種類，為后續開展寄藏微生物的致病致害性、微生物資源開發與利用以及胡楊和灰葉胡楊種子和苗木的藥劑消毒處理，指導人工育苗造林生產實踐提供理論依據。研究結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 植物材料

2010年8月于新疆阿拉爾地區(海拔904m，東經81° 10.303＇，北緯40° 33.434＇)采集胡楊(Populuseuphratica)、灰葉胡楊(P.pruinosa)的芽、葉柄、枝條和成熟的蒴果，將蒴果置于室內使其自然開裂，隨后將其置于紗網上輕輕揉搓，使冠毛和種子分離，收集去冠毛的種子樣品備用。

1.1.2 供試試劑

CTAB(北京奇華盛生物技術發展中心)，Tris飽和酚(北京鼎國生物技術發展中心)，氯仿(北京北化精細化學品有限責任公司)，次氯酸鈉、異戊醇、異丙醇、乙醇(北京化學試劑公司)，均為市售。

1.2 試驗方法

1.2.1 可培養微生物的分離和純化

1.2.1.1 胡楊和灰葉胡楊種子外部攜帶可培養微生物檢測：稱取胡楊種子0. 35g、灰葉胡楊種子0. 25g(胡楊種子千粒重0. 07g、灰葉胡楊種子千粒重0. 05g，估算得兩種待測種子數各5000粒)分別置于10mL滅菌水中，充分震蕩后單層紗布過濾，將濾液離心10min(5000r/min)，棄上清，分別加入滅菌水1. 5mL，充分懸浮后，將兩種菌懸液分別稀釋101、102、103倍，吸取各濃度菌懸液100μL涂布在PDA平板上，每個濃度3次重復，相同操作條件下設無菌水空白對照，將各處理置于25 ℃黑暗培養，3d后觀察各濃度條件下菌落形態特征，記錄菌落數量，計算孢子負荷量及各分離物的分離頻率。

孢子負荷量(個孢子/粒種子)=(孢子總數/被檢測的種子總數)

分離頻率(%)=(某一分離物出現次數/分離物出現總次數)×100 %

1.2.1.2 胡楊和灰葉胡楊種子內部攜帶可培養微生物檢測：稱取胡楊和灰葉胡楊種子各0. 5g，分別置于1 %NaClO溶液中表面消毒5min，無菌水沖洗3次后晾干，有序擺放在PDA平板上，每皿60粒，5次重復，置于25 ℃黑暗培養，3d后觀察種子內部攜帶可培養微生物菌落形態特征，記錄種子帶菌數量，計算種子帶菌率及各分離物的分離頻率。

帶菌率(%)=(帶菌種子數/檢測種子總數)×100 %

1.2.1.3 胡楊和灰葉胡楊枝條、芽和葉柄攜帶可培養微生物檢測：用消毒的剪刀將胡楊和灰葉胡楊的芽和葉柄輕輕剝下，并將枝條的上部、中部和下部分別剪切成長約1cm的組織塊，分別置于1 %NaClO溶液中表面消毒5min，無菌水沖洗3次后晾干，芽和葉柄有序擺放在PDA平板上(每皿8個)，枝條的上部、中部和下部組織塊分別平放(每皿8個)和直插(每皿12個)在PDA平板上，各處理3次重復，置于25 ℃黑暗培養，3d后觀察枝條上部、中部和下部、芽、葉柄攜帶可培養微生物菌落形態特征，記錄帶菌數量，計算帶菌率及各分離物的分離頻率。

帶菌率(%)=(帶菌植物組織數/檢測植物組織總數)×100 %

1.2.1.4 可培養微生物的純化：將上述(1)-(3)步驟中分離到的微生物進行編號，挑取菌落邊緣，將真菌和細菌分別接種于PDA(馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂粉16g，去離子水1000mL)和LB(胰蛋白胨10g，氯化鈉5g，酵母粉5g，瓊脂粉16g，去離子水1000mL)平板上，真菌置于25 ℃黑暗培養，細菌28 ℃黑暗培養，保存菌株備用。

1.2.2 可培養微生物的鑒定

形態鑒定方法：借助光學顯微鏡(LeicaDFC420CCD，控制軟件LeicaApplicationSuiteV3.8)，分別在培養皿水平和顯微結構水平觀察各微生物的菌落特征、菌絲及孢子形態結構，拍照記錄，并初步確定各菌株的分類地位。

分子鑒定方法：(1)DNA的提取。真菌采用CTAB法。細菌采用煮沸裂解法。(2)PCR擴增。采用真菌通用引物ITS1、ITS4，細菌通用引物27F、1492R進行PCR擴增(引物信息見表1)。其反應體系為(25μL)：10×PCRbuffer2. 5μL(含Mg2+)，10mmol/LdNTPs2μL，TaqDNApolymerase0. 3μL，10mmol/L引物對2μL，模板DNA1μL，無菌ddH2O17.2μL，總體系25μL。真菌擴增條件：94 ℃變性5min，94 ℃變性30s，54 ℃退火30s，72 ℃延伸1min，共設35個循環，最終72 ℃延伸10min。細菌擴增條件：94 ℃變性5min，94 ℃變性30s，54 ℃退火60s，72 ℃延伸90s，共設35個循環，最終72 ℃延伸7min。(3)測序與比對：將擴增的PCR產物進行測序(送北京博邁德科技發展有限公司完成)，將獲得的序列在NCBI核酸序列庫中已知真菌rDNAITS和細菌16SrDNA序列進行比對，結合形態學觀察結果，最終確定各菌株的分類地位。

1.2.3 數據分析

利用SPSS16.0數據分析軟件，對獲得的有關數據進行單因素方差分析，比較胡楊和灰葉胡楊各器官帶菌率的差異顯著性。

2 結果與分析

2.1 胡楊和灰葉胡楊各器官寄藏可培養微生物檢測

2.1.1 種子外部

如表2所示，胡楊和灰葉胡楊種子外部攜帶一定數量的真菌和細菌等可培養微生物，但種子帶菌率較低，胡楊種子孢子負荷量為0. 0264，顯著高于灰葉胡楊種子孢子負荷量(0. 0072)。胡楊和灰葉胡楊種子攜帶微生物的種類較為一致，均包括真菌Alternaria(鏈格孢屬，菌株HF1)和Aspergillus(曲霉屬，菌株HF4)以及細菌Stenotrophomonas(嗜麥芽窄食單胞菌，菌株HB2)；而嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonas)菌株HB1僅寄藏于胡楊種子外部。胡楊和灰葉胡楊種子外部攜帶可培養微生物分離頻率最高的是曲霉屬，隨后依次為鏈格孢屬及嗜麥芽窄食單胞菌屬。

表1 引物及序列

表2 胡楊和灰葉胡楊種子外部攜帶可培養微生物情況

2.1.2 種子內部

結果表明(表3)，胡楊和灰葉胡楊種子內部帶菌率較低，胡楊種子帶菌率為7.33%，而灰葉胡楊種子為3.00%，二者差異顯著。經鑒定，胡楊和灰葉胡楊種子內部攜帶的可培養微生物主要為真菌，包括Aspergillus(曲霉屬，菌株HF5)、Nigrospora(黑孢霉屬，菌株HF10)、Epicoccum(附球菌屬，菌株HF11)和Alternaria(鏈格孢屬，菌株HF12、HF13)。其中鏈格孢屬分離頻率最高。

2.1.3 芽、葉柄、枝條

如表3所示，胡楊和灰葉胡楊的芽帶菌率較高，其中胡楊芽帶菌率為50. 00 %，灰葉胡楊芽帶菌率為75. 00 %，稍高于胡楊。二者攜帶的微生物類群為Nigrospora(黑孢霉屬，菌株HF10)、Alternaria(鏈格孢屬，菌株HF12、HF13)，未分離到可培養細菌。其中鏈格孢屬分離頻率最高。胡楊葉柄帶菌率為20. 83 %，灰葉胡楊芽帶菌率為75. 00 %，顯著高于胡楊。二者攜帶的微生物類群為Nigrospora(黑孢霉屬，菌株HF10)、Alternaria(鏈格孢屬，菌株HF12、HF13)，未分離到可培養細菌。其中鏈格孢屬分離頻率最高。平放和直插兩種檢測方法的試驗結果表明，胡楊和灰葉胡楊枝條上部、中部和下部帶菌量不一，二者枝條下部帶菌率最高，達100 %，中部次之，上部最低。而兩個物種枝條中部和上部的帶菌率有較為明顯的差異，灰葉胡楊顯著高于胡楊。二者共同攜帶的微生物類群為Nigrospora(黑孢霉屬，菌株HF10)、Alternaria(鏈格孢屬，菌株HF12、HF13)，此外，灰葉胡楊枝條下部還分離到Epicoccum(附球菌屬，菌株HF11)，未分離到可培養細菌。枝條上部附球菌屬分離頻率最高，而枝條中部和下部鏈格孢屬分離頻率最高。

洋山港四期碼頭位于小洋山島鏈最西端的大、小烏龜島與顆珠山島之間的填筑區，與洋山港二期工程相隔顆珠山汊道。洋山港四期工程設計水深為14.5 m，占用岸線2 800 m，碼頭走向106°～286°,設計年集裝箱吞吐量400萬TEU。擬建工作船碼頭和7個5萬～7萬噸級泊位、并考慮為遠期發展適當留有余地，將15萬噸級集裝箱船作為水工結構兼靠船型。[2]預計開港后掛靠洋山港區四期集裝箱泊位的遠洋集裝箱船型將以5萬噸級、7萬噸級和10萬噸級的船舶為主。洋山港水域平面布置見圖1。

表3 胡楊和灰葉胡楊不同器官攜帶可培養微生物情況

注：*為單因素方差分析(P<0.05)。

2.2 胡楊和灰葉胡楊不同器官寄藏的可培養微生物鑒定

2.2.1 形態學鑒定結果

將分離自胡楊及灰葉胡楊不同器官寄藏的可培養微生物純化后編號為：真菌菌株7株：HF1、HF4、HF5、HF10、HF11、HF12、HF13；細菌菌株2株：HB1、HB2。其形態結構特征分別描述如下(圖1)。

真菌菌株HF1：Alternaria，鏈格孢屬。分離自胡楊和灰葉胡楊種子外部。菌落正面灰白色，背面灰褐色，邊緣較為齊整，近圓形，菌絲生長茂密(見圖1-A1)。光學顯微鏡下可見，菌絲淡色或透明，細長、有分支、具隔膜，分生孢子深褐色，卵形或倒梨形，有隔膜(見圖1-A2)。

真菌菌株HF4：Aspergillus，曲霉屬。分離自胡楊和灰葉胡楊種子外部。菌落生長迅速，正面灰色，邊緣不整齊，背面灰白色，有明顯的花瓣形輪紋，卷毛狀菌絲生長茂密，易從培養基剝離(見圖1-B1)。其分生孢子梗無色、細長、直立、壁光滑，未見隔膜，頂端膨大形成頂囊，圓形，表面著生一層分生孢子(見圖1-B2)。分生孢子卵圓形或圓形，壁光滑，淡黃色。該菌菌絲發達，產孢量較小，分生孢子梗及頂囊遇水時會釋放出分生孢子。

真菌菌株HF5：Aspergillus，曲霉屬。分離自胡楊和灰葉胡楊種子內部。菌落生長迅速，正面黃綠色，背面淺黃綠色，邊緣較為整齊，圓形，可觀察到大量的粉狀分生孢子(見圖1-C1)。分生孢子梗無色、細長、直立或彎曲，壁粗糙、有褶皺，分生孢子頭輻射狀，近球形，頂端著生大量的串珠狀排列的分生孢子(見圖1-C2)。分生孢子卵圓形或圓形，無色透明，在PDA平板培養過程中易彈射，遇水時大量釋放。

真菌菌株HF10：Nigrospora，黑孢霉屬。分離自胡楊和灰葉胡楊種子內部、芽、葉柄、枝條。菌落生長快速，灰白色，邊緣放射狀，氣生菌絲發達，細長、無色透明(見圖1-D1)。分生孢子黑色、圓形、邊緣光滑(見圖1-D2)。

真菌菌株HF12：Alternaria，鏈格孢屬。分離自胡楊和灰葉胡楊種子內部、芽、葉柄、枝條。菌落正面灰白色，背面深褐色，邊緣較為齊整，近圓形，菌絲生長茂密，無輪紋(見圖1-F1)。菌絲淡色或透明，細長、有分支、具隔膜，分生孢子深褐色，長棒形，有隔膜(見圖1-F2)。

真菌菌株HF13：Alternaria，鏈格孢屬。分離自胡楊和灰葉胡楊種子內部、芽、葉柄、枝條。菌落正面灰綠色，背面綠褐色，邊緣齊整，近圓形，菌絲生長茂密，有輪紋(見圖1-G1)。光學顯微鏡下可見，菌絲單色或透明，細長、有分支、具隔膜，分生孢子深褐色，卵形或倒梨形，有隔膜(見圖1-G2)。

細菌菌株HB1：Stenotrophomonas，嗜麥芽窄食單胞菌。分離自胡楊和灰葉胡楊種子外部。菌落圓形，粉色或橙色，邊緣整齊，光滑(見圖1-H)。

細菌菌株HB2：Stenotrophomonas，嗜麥芽窄食單胞菌。分離自胡楊種子外部。菌落圓形，白色或乳白色，邊緣整齊，光滑(見圖1-I)。

2.2.2 分子鑒定結果

采用真菌通用引物ITS1、ITS4對待測真菌rDNAITS區域進行擴增，細菌通用引物27F、1492R對待測細菌16SrDNA進行擴增，分別得到了約550bp和1300bp的特異性條帶，測序后同NCBI核酸序列庫中已知序列進行比對，結果如表4所示。根據擴增條帶與已知序列的同源性，結合2.2.1形態學觀察結果，確定胡楊和灰葉胡楊各器官寄藏的7株可培養真菌分別為：HF1：Alternaria(鏈格孢屬)、HF4：Aspergillus(曲霉屬)、HF5：Aspergillus(曲霉屬)、HF10：Nigrospora(黑孢霉屬)、HF11：Epicoccum(附球菌屬)、HF12：Alternaria(鏈格孢屬)、HF13：Alternaria(鏈格孢屬)；2株可培養細菌為：HB1：Stenotrophomonas(嗜麥芽窄食單胞菌屬，菌落橙色)、HB2：Stenotrophomonas(嗜麥芽窄食單胞菌屬，菌落白色)。

3 結論與討論

3.1 結論

本文首次對胡楊和灰葉胡楊的種子、芽、葉柄和枝條中寄藏的可培養微生物進行了系統研究。胡楊及灰葉胡楊的種子外部、內部，芽、葉柄及枝條共分離純化到可培養的7株真菌和2株細菌，種子外部攜帶的真菌為Alternaria、Aspergillus，細菌為Stenotrophomonas；種子內部、芽、葉柄和枝條上寄藏真菌(內生真菌)為Alternaria、Aspergillus、Nigrospora、Epicoccum。胡楊和灰葉胡楊不同器官攜帶的可培養微生物量具有差異性，表現為：1)種子內部和外部帶菌表現為胡楊顯著高于灰葉胡楊；2)灰葉胡楊芽和葉柄攜帶的微生物量高于胡楊，葉柄帶菌量差異顯著；3)胡楊和灰葉胡楊枝條帶菌量均表現為：上部<中部<下部，兩個物種枝條下部帶菌率均達100 %；就兩個物種間帶菌量比較而言，灰葉胡楊枝條上部和中部帶菌量顯著高于胡楊。

國內外對胡楊和灰葉胡楊內生菌有記載報道[21-22]。本文研究結論與報道的楊樹上分離到Alternaria(鏈格孢屬)、Nigrospora(黑孢霉屬)和Epicoccum(附球菌屬)等6種植物內生真菌[23]相吻合，也包含了袁秀英等報2004年道了胡楊樹皮中內生真菌曲霉(Aspergillussp．)和鏈格孢(Alternariasp．)屬真菌。胡楊和灰葉胡楊同為楊屬植物，本研究證實胡楊和灰葉胡楊是內生真菌Nigrospora(黑孢霉屬)和Epicoccum(附球菌屬)和Stenotrophomonas內生細菌的新寄主。

由于99 %的微生物都是非可培養的[24]，因此本研究利用平皿培養法檢測胡楊和灰葉胡楊各器官攜帶的微生物具有一定局限性，深入的研究需要用基因組學或蛋白組學等方法進一步探明胡楊和灰葉胡楊不同器官寄藏的微生物種類，以全面科學解析這些微生物的風險性和開發利用的價值。

3.2 胡楊及灰葉胡楊不同器官攜帶的可培養微生物的安全性

圖1 胡楊和灰葉胡楊各器官攜帶可培養微生物形態特征

A1：真菌菌株HF1菌落特征；A2：真菌菌株HF1分生孢子形態特征(×20)；B1：真菌菌株HF4菌落特征；B2：真菌菌株HF4分生孢子梗頂囊及分生孢子形態特征(×20)；C1：真菌菌株HF5菌落特征；C2：真菌菌株HF5分生孢子梗頂囊及分生孢子形態特征(×10)；D1：真菌菌株HF10菌落特征；D2：真菌菌株HF10分生孢子形態特征(×20)；E1：真菌菌株HF11菌落特征；E2：真菌菌株HF11分生孢子形態特征(×100)；F1：真菌菌株HF12菌落特征；F2：真菌菌株HF12分生孢子形態特征(×20)；G1：真菌菌株HF13菌落特征；G2：真菌菌株HF13分生孢子形態特征(×20)；

表4 胡楊和灰葉胡楊各器官攜帶可培養微生物的鑒定

本文分離得到的真菌Alternaria(鏈格孢屬)、Aspergillus(曲霉屬)、Nigrospora(黑孢霉屬)和細菌細菌Stenotrophomonas，在其它作物生產系統中具有致病致害性或者潛在危害性。Alternaria，鏈格孢屬，可以引起番茄、馬鈴薯早疫病，瓜類葉斑病，十字花科蔬菜黑斑病等病害[5]；Aspergillus，曲霉屬，大多數腐生于土壤及動植物殘體，少數引起洋蔥等鱗莖部位的腐爛病；Nigrospora，黑孢霉屬，引起水稻、玉米和高粱等的黑霉病[5]。Stenotrophomonas，嗜麥芽窄食單胞菌屬，廣泛存在于水，土壤，動物體內，為條件致病菌，能夠感染人類上呼吸道[5]。在一定的環境條件下，胡楊和灰葉胡楊種子表面和內部、不同器官均攜帶這些微生物可能會干擾種子正常的萌發生長，造成爛種、病苗、死苗或者生長中期的多種病害，胡楊和灰葉胡楊不同器官寄藏的可培養微生物對種子發芽和樹苗生長發育的影響以及潛在的致病性等，值得深入研究。因此需要篩選合適的藥劑對種子進行消毒處理，以提高其發芽率，為胡楊及灰葉胡楊育苗造林提供指導，相關工作正在進行中。

3.3 胡楊及灰葉胡楊各器官攜帶的可培養微生物的開發與利用

本研究中從胡楊和灰葉胡楊各器官分離到的內生真菌中有附球菌屬真菌(Epicoccum)，該菌多數無致病性[5，25]，已有用于植物病害生物防治的先例[11]。附球菌能夠在衰老的或剛死亡的植物組織表面迅速產生分生孢子，并能產生抗真菌的化合物，是一種防治農作物病害較為理想的生防菌[25]。因此，以來自胡楊和灰葉胡楊不同器官的附球菌屬植物內生真菌為材料，嘗試開展其對胡楊和灰葉胡楊種子萌發和苗期生長的影響，以及對胡楊銹病等病害的生物防治效果等相關研究具有積極的意義。

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Study on the Culturable Microbes from Different Organs ofPopuluseuphraticaandP.pruinosa

Li Qian1, 2Gu Sichen1,2Wang Yuli3Li Zhijun3Li Jianqiang1, 2*

(1 Department of Plant Pathology, China Agricultural University / Key Laboratory of Plant Pathology, Ministry of Agriculture P. R. China, Beijing 100193)

(2 Beijing Engineering Research Center of Seed and Plant Health (BERC-SPH) / Beijing Key Laboratory of Seed Disease Testing and Control (BKL-SDTC), Beijing 100193)

(3 College of Plant Science, Tarim University / Xinjiang Production &Construction Corps Key Laboratory of Protection and Utilization of Biological Resources in Tarim Basin, Alar, Xinjiang 843300)

The culturable microbes from different organs ofPopuluseuphraticaandP.pruinosawerestudiedbyusingwashingandplatingtests.TheresultsshowedthatthequantityofmicrobesassociatedwithseedsofP.euphraticawassignificantlyhigherthanthatofP.pruinosa.ComparedwithP.pruinosa,theratesoffungiassociatedwiththeorganismsofbuds,petioles,andbranchesofP.euphraticawerelower,andsignificanthigherinthatofpetioles,upperandcentralbranches.Forthebothkindsoftreespecies,theratesoffungiassociatedwithlowerbrancheswereupto100 %,followedbythatofcentralandupperbranches.Sevenfungalstrainsandtwobacterialstrainswereisolatedfromseeds,buds,petiolesandbranchesofbothP.euphraticaandP.pruinos.Basedonthemethodsofmorphologyandmolecularbiology,Alternariaspp. (3strains),Aspergillusspp. (2strains),Nigrosporasp.,Epicoccumsp.andStenotrophomonasspp. (2strains)weredetermined.ItwasfirstreportedthatNigrosporaandEpicoccumwereendophyticfungi,Alternaria,AspergillusandStenotrophomonaswereseedassociatedfungiandbacteriaofP.euphraticaandP.pruinosa.

Populuseuphratica,P.pruinosa,seed,organ,culturablemicrobes

2014-10-16

新疆生產建設兵團塔里木盆地生物資源保護利用重點實驗室開放基金重點項目(BRZD1001)

李倩(1984-)，女，博士研究生，主要研究方向為種子病理學。 E-mail：liq@cau.edu.cn

*為通訊作者 E-mail:lijq231@cau.edu.cn

1009-0568(2015)01-0009-09

S

ADOI：10.3969/j.issn.1009-0568.2015.01.002