消腫止痛膏對角叉菜膠誘導大鼠足腫脹模型IL－1β、TNF－α炎癥因子的影響＊

楊 進 胡彥偉 李彥民 陜西中醫藥大學附屬醫院骨科 （咸陽712000）

急性軟組織損傷作為臨床骨傷科常見疾病，如不及時治療，輕者則出現遷延日久的慢性持續性疼痛，影響患者的肢體活動及功能的恢復，甚者導致患者自理能力受阻［1］。消腫止痛膏是我院創傷骨科基于急性軟組織損傷“氣滯血瘀”的基本病機特點，臨床主要用于創傷引起的急性軟組織損傷的早期。角叉菜膠誘導大鼠足腫脹模型是如今醫學動物實驗中常用的經典急性炎癥模型，主要用于臨床篩選和評價藥物的抗炎作用和炎癥機制的實驗性研究［2］。本此研究主要通過建立角叉菜膠足腫脹模型評價消腫止痛膏的抗炎消腫作用，為消腫止痛膏廣泛推廣于臨床提供實驗基礎。現將研究結果匯報如下。

1 材 料 1.1實驗動物 成年的SD級大鼠84只，雌雄各半，體重200g±20g，由西安交通大學醫學部實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（陜）2012－005。

1.2 藥物和試劑 消腫止痛膏，由陜西中醫學院附屬醫院制劑室提供；雙氯芬酸鈉凝膠（扶他林乳膏），由陜西中醫學院附屬醫院提供（國藥準字 H10900074）；角叉菜膠Sigma公司，批號：122k14456；IL－1β、TNF－αELISA 試劑盒，購自伊萊瑞特生物科技有限公司。

1.3 實驗儀器 酶標儀，RT－6000，深圳雷杜生命科學股份有限公司；隔水式恒溫培養箱，DHG－9140A型，上海一恒科技有限公司；離心機，KDC－40，科大創新股份有限公司中佳分公司；臺式電子天平，FA1104，上海恒平科學儀器有限公司。

2 方 法 2.1 動物分組 實驗動物在室溫20～25℃，濕度40～70%的條件下，自由飲食常規適應性飼養1周。將64只大鼠稱重后按照體重大小編號后，完全隨機法將大鼠隨機分為空白組、模型組、消腫止痛膏組、扶他林乳膏組，每組16只。

2.2 造模及給藥 模型組大鼠給予凡士林賦形劑取適量外涂，1d1次；消腫止痛膏組給予消腫止痛膏外敷治療，將消腫止痛膏取適量均勻涂抹于大鼠右足處，并用膠布固定，1d1次，如有脫落及時更換。扶他林乳膏組給予扶他林乳膏治療，1d3次；空白組不做處理。各組用藥均以完全包裹腫脹區域為度，各組療程均為7d，7d后純凈水沖洗靜每只大鼠右后腿相應藥物，自然風干。

2.3 大鼠血清中IL－1β、TNF－α的測定 分別于致炎后3h、8h同時間內于消腫止痛膏組、扶他林乳膏組、模型組、空白組各隨機選取8只動物，在無菌條件下腔靜脈取血5mL，于抗凝管中，2500r／min轉速離心5min，取血清4℃保鮮冰箱保存備用；采用酶聯免疫吸附法（ELISA）對大鼠血清內IL－1β、TNF－α定量進行檢測，具體操作按試劑盒說明書進行，終止反應后于450nm處讀取吸光度值。

2.4 統計學方法 各組實驗結果運用統計軟件SPSS19.0統計分析，IL－1β及TNF－α含量數據均用均數加減標準差（±s）表示。對結果進行統計檢驗，若正態分布，方差齊，組間采用t檢驗；若方差不齊則采用單因素或非參數卡方檢驗，P＜0.05為有統計學意義。

3 結 果 3.1 各組大鼠3、8h血清內IL－1β、TNF－α含量檢測結果 各組血清內IL－1β、TNF－α含量在致炎后各時相均高于空白組（P＜0.05）。各時相點各組血清內IL－1β、TNF－α含量均低于模型組，組間差異有統計學意義（P＜0.05）。消腫止痛膏組與扶他林乳膏組相比，3h消腫止痛膏組血清內IL－1β、TNF－α含量較扶他林乳膏組略高，兩組間差異無明顯統計學意義（P＞0.05）。8h消腫止痛膏組血清內IL－1β、TNF－α與扶他林乳膏組相比組間差異無統計學意義（P＞0.05）。結果見表1、2。

表1 致炎后3h各組大鼠IL－1β、TNF－α含量比較（±s，n＝8）

表1 致炎后3h各組大鼠IL－1β、TNF－α含量比較（±s，n＝8）

注：與空白組相比，△P＜0.05，與模型組相比，▲P＜0.05；與扶他林乳膏組相比，◆P＞0.05

組 別 IL－1β（ng／L） TNF－α（ng／L）空白組 82.17±3.13 96.80±6.31▲模型組 211.06±10.53 218.57±7.57△消腫止痛膏組 195.52±8.60 207.15±9.37△▲◆扶他林乳膏組 195.50±9.50 205.52±8.69△▲

表2 致炎后8h各組大鼠IL－1β、TNF－α含量比較（±s，n＝8）

表2 致炎后8h各組大鼠IL－1β、TNF－α含量比較（±s，n＝8）

注：與空白組相比，△P＜0.05；與模型組相比，▲P＜0.05；與扶他林乳膏組相比，◆P＞0.05

組 別 IL－1β（ng／L） TNF－α（ng／L）空白組 84.78±4.30 89.07±6.36◆▲◆模型組 120.69±11.68 133.19±14.34△消腫止痛膏組 84.74±4.30 94.37±5.91▲◆△扶他林乳膏組 83.64±7.62 93.64±5.83▲△

4 討 論 消腫止痛膏是陜中附院創傷骨科依據中醫藥的基礎理論及軟組織損傷機理，總結臨床及前輩經驗，以活血化瘀為治療準則，經過臨床反復驗證，不斷加減運用配制出的臨床經驗方。消腫止痛膏主要以熟地、當歸、川芎、赤芍、酒大黃、川烏、草烏、乳香、沒藥、三七、黃柏、蒼術、香附、連翹、藏紅花、冰片、蟄蟲、骨碎補、自然銅為佐使藥19味中藥共同組成，急性軟組織損傷其臨床表現以紅、腫、熱、痛為主，其病因主要是外傷損傷血絡，血溢脈外，形成瘀血阻滯，故本方以四物湯的熟地、當歸、川芎、赤芍為君藥主活血化瘀；以酒大黃、川烏、草烏、乳香、沒藥、蒼術、香附、藏紅花三七等溫經通脈，活血行氣藥幫助君藥行氣、活血化瘀；瘀血阻脈，阻礙氣機，氣郁化熱，所以臨床損傷部位常見發熱，紅腫，故在治療中配以黃柏、連翹清熱兼以涼血止血，主要合用共為臣藥；外傷出血，血溢脈外，故以寒涼之冰片涼血止血，其性辛香，又能活血，使血止而無留瘀之弊，蟄蟲、骨碎補、自然銅為臨床活血療傷之常用藥，可活血療傷，生新接骨，共為佐使藥；諸藥合用具有活血止血，理氣化瘀、止痛之功，臨床療效顯著。中藥外用是通過透皮吸收作用于創傷局部，從而維持局部相對穩定的血藥濃度，起到、散瘀、消腫和止痛的功效［3］。急性軟組織損傷的早期，現代研究表明其特點是微循環破壞出血以及急性炎癥反應［4］，因此抑制微循環破壞導致的出血，促進微循環的恢復以及抑制炎癥反應成為治療的關鍵［5－6］。本實驗表明消腫止痛膏可能是以減少或降低血清內IL－1β、TNF－α含量，減少炎癥介質的釋放，消除或改善損傷組織充血水腫，抑制炎癥反應的發生發展，且具有與扶他林乳林膏相當的抗炎消腫效果。

［1］ 趙藝平，牛淑亮，竇群立.消腫噴劑促進急性軟組織損傷修復66例［J］.陜西中醫，2012，33（9）：1174－1175.

［2］ 朱 蕾，李 娟，武丹威，等.羥胺三唑對角叉菜誘導急性炎癥的抗炎作用［J］.中國臨床藥理與治療學雜志，2013，6（4）：601－605.

［3］ 章建華，丁偉國.三黃軟膏外敷治療大鼠急性軟組織損傷的實驗研究［J］.中醫正骨，2012，22（3）：6－9.

［4］ 章建華，丁偉國.消腫定痛散濕敷治療急性軟組織損傷147例［J］.光明中醫，2012，27（10）：2007－2008.

［5］ 肖百全，朱少璇，楊 威，等.芍藥甘草湯對角叉菜誘導的炎癥相關指標時序性變化的研究 ［J］.中國實驗與方劑學雜志，2013，6（4）：601－605.