白豆蔻-白苣勝揮發油提取工藝及抗失眠藥效學研究

薩礎拉，呼日樂巴根，阿拉坦敖日格樂，董 玉

(內蒙古醫科大學，內蒙古 呼和浩特 010110)

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白豆蔻-白苣勝揮發油提取工藝及抗失眠藥效學研究

薩礎拉，呼日樂巴根，阿拉坦敖日格樂，董 玉

(內蒙古醫科大學，內蒙古 呼和浩特 010110)

目的：研究白豆蔻-白苣勝揮發油的提取工藝，觀察其對小鼠的鎮靜催眠作用。方法：采用L9(34)正交表設計實驗，優化提取條件，考察藥材粉碎粒度、提取時間、液料比對白豆蔻-白苣勝揮發油得率的影響。觀察揮發油對小鼠自主活動以及催眠劑量戊巴比妥鈉鎮靜催眠作用的影響。結果：根據極差分析可知，3種因素對白豆蔻-白苣勝揮發油提取率的影響大小為粉碎粒度>提取時間>液料比。揮發油最佳提取工藝為粉碎粒度20目，提取4h，液料比為12倍。白豆蔻-白苣勝揮發油可減少小鼠走動時間及小鼠前肢上抬次數，縮短戊巴比妥所致小鼠入睡的潛伏時間，延長睡眠持續時間。結論：采用水蒸氣提取法提取白豆蔻-白苣勝中的揮發油成分簡便可行，適合工業化生產，所提取的白豆蔻-白苣勝揮發油具有鎮靜催眠作用。

白豆蔻-白苣勝；揮發油；鎮靜；催眠；水蒸氣提取法

蘇格木勒-3湯是蒙醫臨床常用方劑，由白豆蔻 15g、白苣勝 10g、蓽茇 5g三味蒙藥組成，具有抑赫依的功效，臨床主治失眠[1]。白豆蔻為姜科植物白豆蔻AmomumkravanhPierreexGagnep和爪哇白豆蔻AmomumcompactumSoland.exMaton的果實，味辛、苦，性溫，可祛腎寒、鎮赫依、溫中消食，主治腎赫依病、失眠、消化不良等，收載于2010版《中華人民共和國藥典》[2]，其有效成分和質控指標性成分均為揮發油。白苣勝為菊科植物萵苣LactucasativaL.的種子，味微甘，性平，可清肺熱、消食開胃、抑赫依，主治肺熱咳嗽、失眠、消化不良等，有效成分為揮發油[3]。為研究蘇格木勒-3湯的藥效物質基礎，并為該方的深入開發利用提供科學依據，本研究對白豆蔻-白苣勝揮發油的提取工藝進行優化并觀察其對小鼠的鎮靜催眠作用，現報道如下。

1 材料與動物

1.1 試藥

白豆蔻與白苣勝均購自當地藥房，經內蒙古醫科大學蒙醫藥學院圖門巴雅爾教授鑒定為真品。白豆蔻為姜科植物白豆蔻AmomumkravanhPierreexGagnep和爪哇白豆蔻AmomumcompactumSoland.exMaton的果實，其揮發油含量符合《中華人民共和國藥典》2010年版的相關要求。將藥材粉碎，分別過20、40、60目篩，備用。白苣勝為菊科植物萵苣LactucasativaL.的種子。阿普唑侖片(北京市燕京制藥廠生產，批號：020901，實驗前采用蒸餾水配制成0.006mg/mL的混懸液)；生理鹽水；戊巴比妥(Sigma公司)。

1.2 儀器

揮發油測定器(符合2010年版中國藥典一部附錄XD揮發油測定器的相關標準)；98-1-B型電子調溫電熱套；T-200型電子天平；FW135型中草藥粉碎機；藥用篩。

1.3 動物

ICR種雄性小鼠，體重18～20g，由內蒙古大學實驗動物中心提供，合格證編號：SCXK(蒙)2002-0001。

2 方法與結果

2.1 白豆蔻-白苣勝揮發油提取工藝研究

2.1.1 白豆蔻-白苣勝揮發油提取方法 根據《中國藥典》2010版一部附錄XD，采用水蒸氣蒸餾法進行揮發油的提取。首先將白豆蔻、白苣勝藥材粉碎過篩，分別精密稱取白豆蔻、白苣勝藥材粉末30g、20g，置于同一圓底燒瓶中，加入相應倍數的水振搖混勻，浸泡，緩緩加熱至沸，并保持微沸至規定時間，后停止加熱，放置冷卻，接收揮發油，精密測定揮發油體積，計算揮發油得率。

2.1.2 單因素試驗 以揮發油得率為考察指標，采用單因素法考察提取時間、液料比對揮發油提取率的影響。

(1)提取時間對揮發油得率的影響 按照“2.1.1”項下方法提取揮發油，固定液料比(10倍)、藥材粒度(40目)，考察不同提取時間(2、10、20、30min、1、2、4、6、8、10h)對揮發油得率的影響，每個實驗重復3次。結果見圖1。

由圖1可知，在2min至1h提取時間范圍內，揮發油得率隨著提取時間的增加而迅速提高，但在1h之后揮發油得率沒有任何變化。

(2)液料比對揮發油得率的影響 按照“2.1.1”項下方法提取揮發油，固定提取時間(1h)、藥材粒度(40目)，考察不同液料比(6、8、10、12倍)對揮發油得率的影響，每個實驗重復3次，得出液料比為12倍時，揮發油提取率最高，結果見圖2。

2.1.3 正交設計法優化白豆蔻-白苣勝揮發油提取工藝 以粉碎粒度(A)、提取時間(B)、液料比(C)為實驗因素，以揮發油得率為考察指標，進行L9(34)正交設計實驗，因素水平見表1。精密稱取白豆蔻、白苣勝藥材粉末15g、10g，按照“2.1.1”項下方法提取揮發油，并計算提取揮發油得率，結果見表1、表2。

圖1 不同提取時間對揮發油得率的影響

圖2 不同液料比對揮發油得率的影響

水平因素粉碎粒度(A)/目提取時間(B)/h液料比(C)/倍1200.58240210360412

表2 正交試驗結果

由表2極差分析可知，3種因素對白豆蔻-白苣勝揮發油提取率的影響大小為A>B>C，即粉碎粒度>提取時間>液料比；最佳揮發油提取工藝為A1B3C3，即粉碎粒度為20目，提取時間為4h，液料比為12倍。

2.1.4 單因素驗證試驗 為結合生產實際，驗證實驗結果，精密稱取白豆蔻、白苣勝藥材粉末30g、20g，采用正交試驗最佳工藝提取揮發油，計算揮發油得率，重復3次，平均得率為3.4%，RSD<3%。

2.2 白豆蔻-白苣勝揮發油治療失眠的藥效學研究[4]

2.2.1 白豆蔻-白苣勝揮發油對小鼠自主活動的影響 將60只小鼠隨機分為空白組、蘇格木勒-3組、陽性對照組、白豆蔻-白苣勝揮發油高劑量組、白豆蔻-白苣勝揮發油低劑量組5組，灌胃給藥，1次/日，連續給藥5天。給藥前將小鼠投入活動箱中適應5min，給藥后60min記錄2min內小鼠的走動時間和前肢向上抬舉次數，結果見表3。與空白組比較，各劑量白豆蔻-白苣勝揮發油組小鼠走動時間及前肢上抬次數均顯著降低，差異具有統計學意義(P<0.05)。

組別劑量走動時間(s)前肢向上抬(次)空白組-111.54±12.2940.50±8.21阿普唑侖組0.12mg/kg77.73±24.37**22.87±6.70**白豆蔻-白苣勝揮發油高劑量組0.5mL/kg84.44±20.86**18.56±6.67**白豆蔻-白苣勝揮發油低劑量組0.3mL/kg83.80±20.30**17.70±4.88**蘇格木勒-3湯組2g/kg69.00±28.04**24.64±7.71**

注：與空白組比較**P<0.01。

2.2.2 白豆蔻-白苣勝揮發油對催眠劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠時間的影響 動物分組及處理同上。末次給藥1h后，每只鼠腹腔注射戊巴比妥鈉50mg/kg，觀察記錄入睡潛伏期(翻正反射消失時間)和睡眠持續時間(翻正反射消失至恢復的時間)，結果見表4。與空白組比較，各劑量白豆蔻-白苣勝揮發油均可縮短小鼠入睡潛伏時間，延長小鼠睡眠持續時間。

組別劑量入睡潛伏時間(min)睡眠持續時間(min)空白組-5.38±0.5212.67±1.75阿普唑侖組0.12mg/kg4.53±1.30*20.27±6.24**白豆蔻-白苣勝揮發油高劑量組0.5mL/kg4.00±0.58*17.43±5.26*白豆蔻-白苣勝揮發油低劑量組0.3mL/kg3.50±1.76*15.67±2.94*蘇格木勒-3湯組2g/kg4.31±1.03*18.79±7.93*

注：與空白組比較*P<0.05，**P<0.01。

3 討論

本實驗采用水蒸氣蒸餾法對白豆蔻-白苣勝的揮發油成分進行了提取。水蒸氣蒸餾法是指將含有揮發性成分的藥材與水共蒸餾，使揮發性成分隨水蒸氣一并餾出，后經冷凝分離的浸提方法。該法適用于具有揮發性、能隨水蒸氣蒸餾而不被破壞、在水中穩定且難溶或不溶于水的藥材成分的浸提。該法穩定可靠、操作簡單，適合于工業化生產。在白豆蔻-白苣勝揮發油的提取過程中，白豆蔻揮發油的含量較高，而白苣勝揮發油的含量較低，且在混合提取中，白苣勝會降低白豆蔻揮發油的提取量。未來本課題組將采用GC-MS法研究其有效成分及含量相互配伍后的變化情況。

采用水蒸氣法提取白豆蔻-白苣勝揮發油時，提取量主要受藥材粉碎粒度及提取時間的影響。藥材粉碎粒度為20目時，白豆蔻-白苣勝的揮發油得率最高，且隨著提取時間的延長，白豆蔻-白苣勝揮發油得率不再增加，趨于穩態。

本研究結果表明，白豆蔻-白苣勝揮發油的最佳提取工藝為粉碎粒度20目，提取4h，液料比為12倍。藥效學實驗表明，白豆蔻-白苣勝揮發油可減少小鼠的走動時間及小鼠前肢上抬次數，縮短戊巴比妥所致小鼠入睡的潛伏時間，延長睡眠持續時間。采用水蒸氣提取法提取白豆蔻-白苣勝中的揮發油成分簡便可行，適合工業化生產，所提取的白豆蔻-白苣勝揮發油具有鎮靜催眠作用。

[1] 內蒙古自治區衛生廳.內蒙古蒙成藥標準[M].赤峰:內蒙古科學技術出版社,1984:56.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].一部.北京:化學工業出版社,2010:156.

[3] 蒙古學百科全書編輯委員會《醫學卷》編輯委員會.蒙古學百科全書醫學卷[M].呼和浩特:內蒙古人民出版社,2002:196.

[4] 曹欣冬,范吉平,朱陵群,等.神安湯治療失眠的藥效學研究[J].中藥藥理與臨床,2005,21(5):53.

(責任編輯：尹晨茹)

Extraction Process of the Essential Oil from Baidoukou-Baijusheng and Pharmacodynamics Research for the Treatment of Insomnia

Sa Chula,Hurilebagen,Alatengorgol,Dong Yu

(Inner Mongolia Medical University,Hohhot 010110,China)

Objective:To observe the pharmacodynamics for the treatment of insomnia Baidoukou-Baijusheng essential oil and To study the Extraction process of the essential oil from Baidoukou-Baijusheng.Methods:To observe the influence of autonomic activities and sleeping time of baidoukou-baijusheng essential oil at Hypnotic dose of sodium pentobarbital in mice. Using the L9(34) orthogonal experimental design，the extraction conditions were optimized. To investigate the influence of baidoukou-baijusheng essential oil receiving rate of the fineness of pulverization,extraction time and Liquid than.Results:The baidoukou-baijusheng essential oil were decreased the moving time and raise forelimbs,cut downed the latent time at Hypnotic dose of sodium pentobarbital in mice,extended the sleeping time.Based on the range analysis,The influence of three factor of the baidoukou-baijusheng essential oil receiving rate were the fineness of pulverization>extraction time>Liquid than.The Best Group of Extraction process of the baidoukou-baijusheng essential oil was 20 sieve mesh. The extraction time was 4 time. The Liquid than was 12 times. Conclusion:The baidoukou-baijusheng essential oil has a sedative and hypnotic effects. The extraction process of the essential oil from Baidoukou-Baijusheng was feasible and simple. Suitable for industrial production.

Baidoukou-Baijusheng;Essential Oil;Sedative;Hypnotic;Steam Extraction

2014-03-10

2013年內蒙古醫科大學青年創新基金項目(YKD2013QNCX016)；內蒙古醫科大學博士啟動基金項目(YKD2013QNCX016)；2014年內蒙古醫科大學“英才培育”項目

薩礎拉(1984-)，女，博士，內蒙古醫科大學講師，研究方向為蒙(中)藥復方有效物質基礎及新藥創制。E-mail:haisachula@126.com

R284.2;R285.5

A

1673-2197(2015)14-0008-03

10.11954/ytctyy.201514004