辣椒及土壤中二氰蒽醌殘留量的高效液相色譜分析

摘要：為準(zhǔn)確分析辣椒及土壤中二氰蒽醌殘留量，建立了高效液相色譜（HPLC）分析方法。樣品用酸性乙腈提取，用弗羅里硅柱凈化，以乙腈-水為流動(dòng)相（7∶3，V/V），SB-C18為固定相，在254 nm下，以外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，該方法檢出限為9.5 μg/kg，平均回收率在75.3%～93.2%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.4%～5.0%，該方法快速、準(zhǔn)確度高，適用于辣椒及土壤中二氰蒽醌殘留量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜（HPLC）； 二氰蒽醌； 辣椒； 土壤； 殘留

中圖分類號(hào)：O657.7+2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2015）06-1469-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.06.048

Abstract： The method of detecting the residue of dithianon in pepper and soil with HPLC were established. Samples were extracted with acidified acetonitrile， then purified by the column of florisil. The external standard method of quantitative HPLC was performed on the column of SB-C18 with the mobile phase of acetonitrile-water （V/V=7/3） at 254 nm. The results showed that the detect limit was 9.5 μg/kg， with the recovery of 75.3%～93.2% and the RSD of 1.4%～5.0%. This method is fast and accurate for determining dithianon residue in pepper and soil.

Key words： HPLC； dithianon； pepper； soil； residue

二氰蒽醌（Dithianon）又名二噻農(nóng)，是一種保護(hù)性殺菌劑，通過(guò)干擾細(xì)胞呼吸鏈抑制真菌生長(zhǎng)和繁殖。可防治蘋果、梨黑星病，蘋果輪紋病，攫桃銹病、炭疽病，柑橘瘡痂病、銹病，草莓葉斑病等[1-3]。隨著二氰蒽醌的廣泛使用，其在農(nóng)作物和環(huán)境中殘留導(dǎo)致的健康風(fēng)險(xiǎn)也越來(lái)越引起關(guān)注。采用快速準(zhǔn)確的二氰蒽醌殘留分析方法是評(píng)價(jià)其健康風(fēng)險(xiǎn)的技術(shù)保障。目前，二氰蒽醌殘留的分析方法一般采用基于QuEchERS（Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe）前處理的高效液相色譜分析方法[4-7]。本研究在此基礎(chǔ)上建立了以酸性乙腈為提取劑，通過(guò)弗羅里硅柱凈化，采用HPLC-UV測(cè)定辣椒和土壤中二氰蒽醌殘留的分析方法，該方法操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，可為評(píng)價(jià)二氰蒽醌在蔬菜和土壤中的殘留水平提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

土壤樣品除去碎石、雜草，過(guò)篩。辣椒打成漿狀，備用。

乙腈、丙酮、正己烷、二氯甲烷（色譜純，美國(guó)Fisher公司），F(xiàn)lorisil固相柱（500 mg，美國(guó)Agilent公司），二氰蒽醌原藥（≥96%，江西禾益化工有限公司），硫酸（≥96%，氯化鈉等均為分析純，購(gòu)于國(guó)藥試劑公司）。

1.2 儀器設(shè)備

20A高效液相色譜儀，配備紫外檢測(cè)器（日本島津）；PL202-L型電子天平（瑞士梅特勒-托利多）；T18型勻漿機(jī)（德國(guó)IKA）；R-215型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（瑞士步琪）；TD-40L型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.3 方法

1.3.1 辣椒樣品分析 稱取辣椒樣品10.0 g于50 mL離心管中，加入1.0 mol/L硫酸2 mL，再加入20 mL乙腈，高速勻漿2 min，加入3.0 g氯化鈉，加蓋，振搖約1 min后，于4 000 r/min離心5 min，取上清液5 mL濃縮近干，加入2.0 mL二氯甲烷溶解殘?jiān)Ｒ来斡?.0 mL二氯甲烷、丙酮/正己烷（5∶95，V/V，下同）預(yù)淋洗Florisil小柱，待液面近干時(shí)，將溶液加入Florisil小柱，重復(fù)2次，并用20.0 mL上述丙酮/正己烷洗脫，洗脫液濃縮近干，2.5 mL乙腈定容，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，待測(cè)。

1.3.2 土壤樣品分析 稱取土壤樣品10.0 g于50 mL離心管中，加入0.5 mol/L硫酸5 mL，加入20 mL乙腈，振蕩30 min，加入3.0 g氯化鈉，加蓋，振搖1 min，于4 000 r/min離心5 min，取2 mL上清液，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，待測(cè)。

1.3.3 液相色譜條件 采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，流動(dòng)相為乙腈-水（7∶3，V/V），流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量5 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

取不同濃度的二氰蒽醌標(biāo)準(zhǔn)溶液在色譜條件下測(cè)定（圖1）。以二氰蒽醌標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與相對(duì)應(yīng)的峰面積作線性分析，得回歸曲線y=19 395x-323，相關(guān)系數(shù)（r）=0.999 9（n=7），表明在此范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2 回收率和精密度

分別在辣椒和土壤樣品中添加0.05、0.20、1.00 mg/kg二氰蒽醌標(biāo)準(zhǔn)溶液，設(shè)5個(gè)平行，同上法測(cè)定回收率（表1和圖2）。結(jié)果表明，辣椒中平均回收率為75.3%～83.0%，變異系數(shù)為1.4%～4.0%；土壤中平均回收率為91.8%-93.2%，變異系數(shù)為0.8%～5.0%，回收率、精密符合檢測(cè)要求。根據(jù)3倍噪音水平，確定檢出限為9.5 μg/kg。

3 結(jié)論

建立用酸性乙腈提取，弗羅里硅柱凈化的前處理方法和高效液相色譜-紫外檢測(cè)器測(cè)定辣椒和土壤中二氰蒽醌殘留量的檢測(cè)方法，并分析了方法回收率、精密度。該方法能有效去除色素干擾，具有較好的精密度和準(zhǔn)確度，符合農(nóng)藥殘留分析要求[8]。

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