CIK細胞對晚期腫瘤病人免疫狀態的影響

孫琳，高美華，張智昆

（1 青島大學醫學院免疫學教研室，山東 青島 266021； 2 煙臺山醫院檢驗科； 3 青島市婦女兒童醫院婦科）

細胞因子誘導的殺傷細胞（CIK細胞）是將人體外周血單個核細胞在體外經過多種細胞因子誘導培養一段時間后獲得的一群異質細胞［1］。該群細胞殺瘤活性強、殺瘤譜廣等，在臨床腫瘤治療中發揮著日漸重要的作用［2］。國際腫瘤生物治療協會的多名專家制定了免疫相關反應評價標準，即irRC［3］，該標準認為可以通過測定免疫反應指標來評價免疫治療的效果。本研究通過比較晚期腫瘤病人在行CIK細胞治療前后的外周血T細胞亞群、自然殺傷細胞（NK細胞）和調節T細胞（Treg細胞）百分率以及白細胞介素2（IL－2）、干擾素γ（IFN－γ）的變化，旨在評價CIK細胞治療前后病人免疫狀態的改變。

1 對象與方法

1.1 研究對象

取煙臺山醫院收治晚期腫瘤病人20例（腫瘤組），男12例，女8例；年齡43～67歲，平均56歲。病人TNM分期Ⅲ期及以上，肺癌8例，原發性肝癌5例，胃癌5例，食管癌1例，乳癌1例。以查體中心體檢正常的健康成年人20例作為對照（對照組），男12例，女8例；年齡45～65歲，平均53歲。

1.2 儀器與試劑

Epics XL流式細胞儀為美國貝克曼庫爾特公司產品，RT－6000全自動酶標分析儀為深圳雷杜公司產品，流式細胞儀試劑均購自美國貝克曼庫爾特公司，細胞因子試劑盒購自深圳晶美生物科技有限公司，CIK制品由本院生物細胞治療室規范制備。

1.3 治療方法及檢測指標

每例病人接受CIK細胞治療至少2個療程，每個療程間隔1個月。采用流式細胞儀檢測兩組T細胞亞群、Treg細胞及NK細胞百分率；采用酶聯免疫實驗測定兩組血清中細胞因子IL－2、IFN－γ的表達水平。

1.4 統計學處理

采用PPMS 1.5［4］軟件進行統計分析，計量資料數據以表示，組間比較采用t檢驗。

2 結 果

晚期腫瘤病人CIK治療前的CD3、CD4、CD8、CD4／CD8、Treg細胞、NK 細胞和IL－2、IFN－γ水平與對照組比較差異均有顯著意義（t＝2.12～3.98，P＜0.05）。CIK治療后10d，IL－2和IFN－γ水平升高，與治療前相比較差異均有顯著意義（t＝2.06～2.43，P＜0.05）；CIK治療后30d，腫瘤病人的CD4／CD8、NK細胞和IL－2和IFN－γ水平升高，Treg細胞下降，與治療前相比較，差異均有統計學意義（t＝2.11～10.37，P＜0.05）。見表1、2。

表1 兩組治療前后外周血T細胞亞群、NK、Treg水平比較（n＝20，χ／%，）

表1 兩組治療前后外周血T細胞亞群、NK、Treg水平比較（n＝20，χ／%，）

組別 時間 T細胞亞群CD3 CD4 CD8 CD4／CD8NK細胞 Treg細胞對 照 組 66.32± 9.75 35.42±7.05 25.28±5.75 1.46±0.39 14.37±4.37 9.56±3.62腫瘤組 治療前 59.50±10.56 29.89±6.95 29.30±4.16 1.08±0.32 10.02±4.70 13.56±5.72治 療 10d 59.69±10.89 30.32±7.38 28.82±6.33 1.12±0.37 11.30±5.05 13.32±5.21治 療 30d 61.47± 9.73 31.95±8.22 26.34±5.72 1.33±0.42 19.17±6.22 8.71±5.05

表2 兩組治療前后細胞因子含量比較（n＝20，ρ／ng·L－1，）

表2 兩組治療前后細胞因子含量比較（n＝20，ρ／ng·L－1，）

組別 時間 IL－2 IFN－γ對照組 72.35±12.52 14.11± 3.43腫瘤組 治療前 60.23±14.10 10.34± 2.48治療10d 70.18±16.44 13.02± 4.27治 療 30d 101.26±30.17 53.66±18.42

3 討 論

T淋巴細胞主要分為輔助性T細胞（CD4）和細胞毒性T細胞（CD8），兩者的動態平衡是維持機體正常免疫應答反應的保障［5］。本文研究結果顯示，腫瘤病人治療前CD4下降，CD8升高，CD4／CD8明顯下降，說明腫瘤病人機體的免疫功能低下，這與文獻報道的結果一致［6］。免疫功能持續低下使得腫瘤易于復發、轉移而難以治愈。NK細胞是一種殺傷腫瘤的效應細胞，是人體自然免疫系統的重要組成部分［7］。本實驗結果顯示，晚期腫瘤組治療前NK細胞明顯低于健康對照組，這可能由于腫瘤的浸潤使得NK細胞的數量反應性下降，機體對腫瘤的清除能力下降，從而導致了腫瘤的發生［8］。經過CIK治療后30d，病人NK細胞增殖迅速，機體的抗腫瘤能力增強。

Treg細胞具有免疫抑制和免疫無能兩大特征，在維持機體免疫內環境穩定、防止自身免疫性疾病的發生等方面都起到重要作用［9－10］。本文研究結果表明，晚期腫瘤病人治療前Treg細胞比例明顯高于對照組，說明病人處于免疫抑制狀態；CIK治療后30d，Treg細胞比例明顯降低，說明機體的免疫抑制狀態得到明顯改善。

本文研究結果顯示，治療后10d病人的IL－2、IFN－γ水平明顯增高，其增高早于其他免疫指標，可以推斷CIK細胞改善免疫功能是通過分泌大量的細胞因子來完成，IL－2、IFN－γ等不僅對腫瘤細胞有直接抑制作用，還可以促進T細胞及NK細胞活化增殖，T細胞和NK細胞活化后又會分泌大量細胞因子，上述兩者協同作用，進一步改善病人的免疫功能，提高抗腫瘤能力。

綜上所述，CIK細胞不僅能夠直接殺傷腫瘤細胞，還能通過分泌大量細胞因子，誘導機體T細胞和NK細胞增殖活化，使機體處于免疫活躍狀態，明顯改善晚期腫瘤病人的免疫功能，其改善作用在治療30d左右即可達到較高水平；同時可降低腫瘤病人外周血Treg細胞水平，改善機體免疫抑制狀態，這也是CIK細胞發揮治療作用的重要途徑。

［1］SCHMIDT－WOLF I G，NEGRIN R S，KIEM H P，et al.Use of a SCID mouse／human lymphoma model to evaluate cytokine－induced killer cells with potent antitumor cell activity［J］.J Exp Med，1991，174（1）：139－149.

［2］梁雪峰，丁震宇，解曉東.細胞因子誘導的殺傷細胞在腫瘤治療方面的最新進展［J］.國際腫瘤學雜志，2012，39（5）：344－347.

［3］WOLCHOK J D，HOOS A，O’DAY S，et al.Guidelines for the evaluation of immune therapy activity in solid tumors：immune－related response criteria［J］.Clin Cancer Res，2009，15（23）：7412－7420.

［4］周曉彬，紀新強，徐莉.PPMS 1.5統計軟件的功能及其應用［J］.青島大學醫學院學報，2009，45（1）：91－93.

［5］MEDINA－ECHEVERZ J，FIORAVANTI J，ZABALA M，et al.Successful colon cancer eradication after chemoimmunotherapy is associated with profound phenotypic change of intratumoral myeloid cells［J］.J Immunol，2011，186（2）：807－815.

［6］齊紅，石虹，劉玉俠，等.253例惡性腫瘤患者外周血T細胞亞群的檢測及其臨床意義分析［J］.中國實驗診斷學，2009，13（11）：1589－1590.

［7］王歡，林輝，藍嬌，等.原發性非小細胞肺癌患者手術前后外周血T細胞亞群和NK細胞檢測的臨床意義［J］.中國臨床新醫學，2010，3（4）：312－315.

［8］楊秀華，張羽，韓波，等.肝細胞癌患者外周血中調節性T細胞、NK細胞及NKT細胞的表達及意義［J］.哈爾濱醫科大學學報，2010，44（3）：227－229.

［9］LIU Z，KIM J H，FALO L D，et al.Tumor regulatory T cells potently abrogate antitumor immunity［J］.J Immunol，2009，182（10）：6160－6167.

［10］徐晟偉，沈若武，張蓓.COPD病人外周血CD4＋CD25＋調節性T細胞檢測及意義［J］.齊魯醫學雜志，2011，26（6）：489－490，493.