芡實(shí)多糖的提取、抗氧化活性及對(duì)質(zhì)粒DNA氧化損傷防護(hù)作用的研究

張 溢,孫培冬,陳桂冰,曹光群

(江南大學(xué) 食品膠體與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 化學(xué)與材料工程學(xué)院,江蘇無(wú)錫 214122)

芡實(shí)多糖的提取、抗氧化活性及對(duì)質(zhì)粒DNA氧化損傷防護(hù)作用的研究

張 溢,孫培冬*,陳桂冰,曹光群

(江南大學(xué) 食品膠體與生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 化學(xué)與材料工程學(xué)院,江蘇無(wú)錫 214122)

采用纖維素酶超聲輔助法提取芡實(shí)多糖,由正交實(shí)驗(yàn)獲得芡實(shí)多糖的最佳提取條件,并探究其體外抗氧化活性及對(duì)H2O2光解反應(yīng)誘導(dǎo)質(zhì)粒pBR322 DNA損傷的保護(hù)作用。結(jié)果表明芡實(shí)多糖的最佳提取條件為:料液比1∶20(g/mL)、pH3、纖維素酶用量為原料質(zhì)量的2.0%、超聲時(shí)間5min、提取時(shí)間3h、提取溫度40℃,多糖得率為17.04%。芡實(shí)多糖清除DPPH·、羥基自由基的能力較好,IC50分別為1.78、6.96mg/mL,清除過(guò)氧化氫、超氧陰離子自由基的能力較弱,濃度為10mg/mL時(shí),清除率分別為48.00%、20.32%。芡實(shí)多糖對(duì)抑制DNA損傷具有顯著作用,在多糖水溶液質(zhì)量濃度為0.08mg/mL時(shí),具有最佳保護(hù)作用;在質(zhì)量濃度大于1.0mg/mL時(shí),對(duì)質(zhì)粒DNA沒有保護(hù)作用,甚至促進(jìn)了DNA的損傷。綜上所述,芡實(shí)多糖具有抗氧化及抑制DNA氧化損傷的能力。

芡實(shí),提取,抗氧化活性,DNA氧化損傷

芡實(shí)(Semeneuryales))又名雞頭米、雞頭苞、雞頭蓮等,是睡蓮科植物芡(EuryaleferoxSalisb)種子的成熟種仁[1],它性平、味甘澀,具有有益腎固精、補(bǔ)脾止瀉、祛濕止帶、抗衰老等功效,是一種食療養(yǎng)生的佳品。芡實(shí)含有豐富的碳水化合物,如:淀粉、多糖、粗纖維,一般含量達(dá)到70%～80%[2]。糖類不僅可以作為能源物質(zhì),其中的活性多糖更是在提高人體免疫力、抗腫瘤活性、防治動(dòng)脈硬化、抗病毒、抗氧化、抗輻射等方面起著重要作用。

正常情況下,人體內(nèi)的自由基總是處于不斷產(chǎn)生和消除的動(dòng)態(tài)平衡中,但由于空氣污染、紫外線照射、疾病等原因,會(huì)造成體內(nèi)自由基產(chǎn)生過(guò)多不能及時(shí)清除,進(jìn)而氧化體內(nèi)的大分子化合物,甚至損傷器官[3],如:自由基引起脂質(zhì)過(guò)氧化,可導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化;自由基引起的DNA損傷,易誘發(fā)癌癥;自由基破壞蛋白質(zhì),導(dǎo)致炎癥和衰老[4]。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),多種活性多糖具有清除自由基和抗氧化作用,如:王紅麗等[5]研究了枸杞多糖的抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用,陳克克等[6]指出了黨參多糖對(duì)質(zhì)粒DNA的氧化損傷保護(hù)作用。在已報(bào)道的文獻(xiàn)中,對(duì)芡實(shí)多糖的提取多采用傳統(tǒng)的熱水提取法或是超聲提取法,如劉玉鳳等[2]研究了芡實(shí)多糖的水提醇沉工藝,謝燕娟等[7]研究了超聲波法提取芡實(shí)多糖,提取率均不超過(guò)10%。此外,也有研究證明芡實(shí)多糖具有清除羥基自由基和超氧陰離子自由基的能力[8-9],但研究結(jié)果差異較大。本實(shí)驗(yàn)采用纖維素酶超聲輔助法從芡實(shí)中提取多糖并提純,然后測(cè)定其體外抗氧化活性及對(duì)質(zhì)粒DNA氧化損傷的防護(hù)作用。

表1 提取多糖的因素水平表Table 1 The factors level of polysaccharide extraction

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

芡實(shí) 產(chǎn)于江蘇蘇州,干燥,粉碎,過(guò)40目篩;DPPH Sigma Wolsen;七水合硫酸亞鐵 AR,宜興市展望化工試劑廠;纖維素酶、抗壞血酸、焦性沒食子酸、苯酚、無(wú)水乙醇、NaOH、H2O2(30%)、十二水合磷酸氫二鈉、二水合磷酸二氫鈉、1,10-菲啰啉、三氯乙酸(TCA)、三羥甲基氨基甲烷、鹽酸、硫酸 AR,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;瓊脂糖、質(zhì)粒pBR322 DNA、Goldview、DL5000 DNA Marker 寶生物工程有限公司。

KH-100B超聲波清洗器 昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司;RE-5203旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海申順生物科技有限公司;TU-1900雙光束紫外-可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;HH-S2數(shù)顯恒溫水浴鍋 金壇市醫(yī)療儀器廠;TG1650-WS離心機(jī) 上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司;LyoQuest-85型冷凍機(jī) 西班牙泰事達(dá)公司;DYY-8C型電泳儀 北京市六一器廠;凝膠成像分析系統(tǒng) 美國(guó)伯樂公司Bio Rad。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 芡實(shí)粗多糖的提取條件優(yōu)化 參照文獻(xiàn)[10-11],并結(jié)合芡實(shí)特性,選擇料液比(A)、pH(B)、酶用量(C)、超聲時(shí)間(D)、提取時(shí)間(E)、溫度(F)6個(gè)因素,每個(gè)因素選取3個(gè)水平設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn),因素水平表見表1。精確稱取2.00g芡實(shí)粉末,以水為提取溶劑,按表1的因素水平進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。將不同提取條件下所得的提取液,經(jīng)8000r/min離心15min,上清液定量轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,加水定容。

1.2.2 芡實(shí)多糖的定量測(cè)定

1.2.2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 參照文獻(xiàn)[12],以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品,采用苯酚-硫酸法繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=12.721X-0.1561(R2=0.9995)。

1.2.2.2 芡實(shí)多糖的定量測(cè)定 精密移取100mL容量瓶中提取液2mL,定量轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中、定容,采用苯酚-硫酸法進(jìn)行顯色,并測(cè)量其吸光度值,代入1.2.2.1中葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖的濃度,進(jìn)而得到多糖提取率。

1.2.3 TCA-正丁醇法脫蛋白 準(zhǔn)確稱取芡實(shí)粉末100g,在最佳提取條件下進(jìn)行提取,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮體積至100mL左右,加入4倍體積無(wú)水乙醇沉淀,靜置過(guò)夜,冷凍干燥得芡實(shí)粗多糖。芡實(shí)粗多糖以50mL蒸餾水溶解,加入50mL 5% TCA和50mL正丁醇,振蕩,靜置30min,棄上層正丁醇及中間蛋白層,反復(fù)多次,直至中間無(wú)蛋白層,用0.5mol/L NaOH溶液中和水層至中性,旋蒸除去正丁醇,并濃縮體積至100mL左右,加入4倍體積無(wú)水乙醇,靜置過(guò)夜,離心收集沉淀,冷凍干燥,得芡實(shí)多糖。

1.2.4 芡實(shí)多糖的體外抗氧化活性

1.2.4.1 羥基自由基清除活性的測(cè)定 參照文獻(xiàn)[13],在試管中分別加入1mL鄰二氮菲乙醇溶液(0.75mmol/L),2mL磷酸緩沖溶液(0.2mol/L,pH7.4),1mL多糖水溶液,1mL硫酸亞鐵溶液(0.75mmol/L),搖勻,最后加入1mL 0.01%過(guò)氧化氫,37℃水浴1h,在510nm處測(cè)定其吸光度值A(chǔ)。清除率計(jì)算公式如下:

式中:A1:1mL鄰二氮菲+2mLPBS+1mLFeSO4+1mL多糖水溶液+1mLH2O2;A2:1mL鄰二氮菲+2mLPBS+1mLFeSO4+1mLH2O+1mLH2O2;A3:1mL鄰二氮菲+2mLPBS+1mLFeSO4+2mLH2O。

1.2.4.2 過(guò)氧化氫清除活性的測(cè)定 參照文獻(xiàn)[14],取40mmol/L過(guò)氧化氫磷酸緩沖溶液(0.2mol/L,pH7.4)0.5mL,多糖水溶液0.5mL于試管中,用磷酸緩沖溶液(0.2mol/L,pH7.4)稀釋至8mL,搖勻,靜置反應(yīng)10min,在210nm處測(cè)其吸光度A。清除率計(jì)算公式如下:

式中:A1:0.5mL H2O2+0.5mL多糖水溶液+7mL磷酸緩沖溶液;A2:0.5mL多糖水溶液+7.5mL磷酸緩沖溶液;A0:0.5mL H2O2+7.5mL磷酸緩沖溶液。

1.2.4.3 超氧陰離子自由基清除活性的測(cè)定 參照文獻(xiàn)[15],在具塞試管中分別加入0.3mL多糖水溶液,5mL Tris-HCl緩沖溶液(0.05mol/L,pH8.2),混勻,37℃水浴20min。再加入7.5mmol/L的鄰苯三酚溶液0.3mL,迅速搖勻,在37℃條件下,320nm處80s內(nèi)每5s測(cè)量一次,繪制鄰苯三酚自氧化曲線,求出斜率F。清除率計(jì)算公式如下:

式中:F1:5mL Tris-HCl+0.3mL多糖水溶液+0.3mL鄰苯三酚;F0:5mL Tris-HCl+0.3mL H2O+0.3mL鄰苯三酚。

1.2.4.4 DPPH·清除活性的測(cè)定 參照文獻(xiàn)[16],取0.1mmol/L的DPPH·乙醇溶液4mL與不同濃度多糖水溶液1mL混勻,室溫下避光靜置50min,在516nm處測(cè)其吸光度值A(chǔ)。清除率計(jì)算公式如下:

式中:A1:4mL DPPH·+1mL多糖水溶液;A2:4mL 乙醇+1mL多糖水溶液;A0:4mL DPPH·+1mL H2O。

1.2.5 芡實(shí)多糖對(duì)質(zhì)粒DNA氧化損傷的防護(hù)作用 采用瓊脂糖凝膠電泳法研究芡實(shí)多糖對(duì)質(zhì)粒DNA氧化損傷的防護(hù)作用。精密量取1μL pBR322 DNA(100ng/μL),2μL多糖水溶液加入微量離心管中,混勻。再加入30%過(guò)氧化氫1μL,用蒸餾水補(bǔ)足反應(yīng)體積至5μL,37℃水浴25min后,紫外光照射15min。結(jié)束后,加入6×Loading buffer 2.5μL,混勻后點(diǎn)樣于1%瓊脂糖凝膠,80V電壓下電泳50min,使溴酚藍(lán)移動(dòng)到距膠板正極端約l cm處時(shí)停止電泳。以DL5000 DNA Marker作為定量分析標(biāo)準(zhǔn),在凝膠成像系統(tǒng)下觀察電泳結(jié)果,并定量分析超螺旋結(jié)構(gòu)剩余含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 芡實(shí)多糖提取條件優(yōu)化

由正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知:芡實(shí)多糖提取因素的顯著性為pH>提取溫度>料液比>酶用量>超聲時(shí)間>提取時(shí)間。由表2可得,最佳提取條件為:料液比為1∶20,pH3,纖維素酶用量為原料質(zhì)量的2.0%,超聲時(shí)間為5min,提取時(shí)間為3h,提取溫度為40℃,最佳得率為17.04%。純化后芡實(shí)多糖純度為84.32%,蛋白脫除率為67.45%。

2.2 芡實(shí)多糖的體外抗氧化活性

2.2.1 羥基自由基清除活性 羥基自由基(OH·)是一種重要的活性氧,在人體內(nèi)主要由代謝產(chǎn)生,由于具有極強(qiáng)的氧化能力,其在人體內(nèi)可能引起一系列病變。如圖1所示,當(dāng)多糖質(zhì)量濃度從1mg/mL增大至10mg/mL時(shí),OH·的清除率逐漸升高,其IC50值為6.96mg/mL。

圖1 芡實(shí)多糖的羥基自由基清除活性Fig.1 The hydroxyl radical scavenging activity of Semen Euryl polysaccharide

2.2.2 過(guò)氧化氫清除活性 過(guò)氧化氫是一種很強(qiáng)的抗氧化劑,可致人體遺傳物質(zhì)DNA損傷及基因突變,加快衰老進(jìn)程,與老年帕金森氏病、腦中風(fēng)、動(dòng)脈硬化及糖尿病性腎病和糖尿病性神經(jīng)性病變的發(fā)展密切相關(guān)[17]。如圖2所示,在質(zhì)量濃度為1～7mg/mL范圍內(nèi),過(guò)氧化氫清除率隨著濃度的升高而增大,當(dāng)質(zhì)量濃度為7mg/mL時(shí),過(guò)氧化氫清除率為48.00%,但當(dāng)質(zhì)量濃度大于7mg/mL時(shí),其清除率趨于平緩。

表2 多糖提取的正交實(shí)驗(yàn)Table 2 Orthogonal experiment of polysaccharide extraction

圖2 芡實(shí)多糖的過(guò)氧化氫清除活性Fig.2 The hydrogen peroxide scavenging activity of Semen Euryl polysaccharide

2.2.3 超氧陰離子自由基清除活性 人體內(nèi)有一定數(shù)量的超氧陰離子自由基存在,不發(fā)生化學(xué)變化對(duì)人體無(wú)害,但與羥基結(jié)合后的產(chǎn)物會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞DNA損壞,破壞人類機(jī)體功能。圖3顯示出芡實(shí)多糖對(duì)超氧陰離子自由基的清除效果較弱,隨著多糖質(zhì)量濃度的升高,其清除率呈平緩上升趨勢(shì),當(dāng)多糖質(zhì)量濃度為10mg/mL時(shí),對(duì)超氧陰離子自由基的清除率僅為20.32%。

圖3 芡實(shí)多糖的超氧陰離子清除活性Fig.3 The superoxide radical scavenging activity of Semen Euryl polysaccharide

2.2.4 DPPH自由基清除活性 芡實(shí)多糖對(duì)DPPH·的清除效果如圖4所示,DPPH·的清除率與芡實(shí)多糖的質(zhì)量濃度呈正相關(guān),當(dāng)多糖質(zhì)量濃度為5mg/mL時(shí),DPPH·的清除率達(dá)到94.63%,其IC50值為1.78mg/mL,說(shuō)明芡實(shí)多糖對(duì)DPPH·有較好的清除效果。

圖4 芡實(shí)多糖的DPPH·自由基清除活性Fig.4 The DPPH· scavenging acticity of Semen Euryl polysaccharide

2.3 芡實(shí)多糖對(duì)質(zhì)粒DNA氧化損傷的防護(hù)作用

通常情況下,人體內(nèi)H2O2的活性并不足以直接損傷DNA,然而在紫外光(UV)的照射下,過(guò)氧化氫可被光解產(chǎn)生羥基自由基[18],羥基自由基被認(rèn)為是最活潑的活性氧,也是引起DNA氧化損傷的主要因素之一。圖5顯示了芡實(shí)多糖對(duì)H2O2在光解作用下誘導(dǎo)質(zhì)粒DNA損傷的保護(hù)作用。質(zhì)粒DNA在自然狀態(tài)下為超螺旋結(jié)構(gòu)(sc)(泳道1),在電泳狀態(tài)下條帶移動(dòng)較快,當(dāng)被損傷后,DNA可能變?yōu)殚_環(huán)(oc)或線性結(jié)構(gòu)(lin),條帶移動(dòng)較慢。泳道2顯示,在H2O2和UV的作用下,部分DNA由sc變?yōu)閛c,因此呈現(xiàn)出兩條譜帶,超螺旋結(jié)構(gòu)剩余含量為57.51%。泳道3到泳道11分別為不同濃度多糖水溶液對(duì)H2O2和UV共同作用下誘導(dǎo)質(zhì)粒DNA損傷的影響情況。

圖5 不同濃度多糖水溶液對(duì)H2O2光解反應(yīng) 誘導(dǎo)質(zhì)粒DNA損傷保護(hù)作用的電泳圖Fig.5 Electrophoretic pattern of pBR322 DNA after UV-photolysis and H2O2 treatment in the presence or absence of polysaccharides注:泳道1:DNA;泳道2～11:DNA+UV+H2O2+多糖溶液 (0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.5、1.0、1.5、2.0mg/mL)。

圖6 不同濃度多糖水溶液及VC對(duì)H2O2光解反應(yīng) 誘導(dǎo)質(zhì)粒DNA損傷保護(hù)作用超螺旋結(jié)構(gòu)含量的影響Fig.6 Remaining SC form of pBR322 DNA after UV-photolysis and H2O2 treatment in the presence or absence of polysaccharides and VC

圖6中對(duì)比了芡實(shí)多糖和VC對(duì)DNA氧化損傷的影響,結(jié)果表明,芡實(shí)多糖在質(zhì)量濃度為0.02～0.5mg/mL范圍內(nèi),對(duì)質(zhì)粒DNA的保護(hù)作用先增大后減小,在質(zhì)量濃度為0.08mg/mL時(shí),對(duì)質(zhì)粒DNA的保護(hù)作用最好,超螺旋結(jié)構(gòu)剩余含量為68.39%,質(zhì)量濃度大于1.0mg/mL時(shí),促進(jìn)了DNA的損傷;VC在質(zhì)量濃度為0.02mg/mL時(shí)保護(hù)作用最佳,超螺旋結(jié)構(gòu)剩余含量為85.66%,當(dāng)VC質(zhì)量濃度大于0.08mg/mL時(shí),對(duì)DNA存在一定的損傷作用,這與周殿風(fēng)等[19]測(cè)定VC對(duì)質(zhì)粒DNA氧化損傷的防護(hù)作用的結(jié)果相同。芡實(shí)多糖及VC在低濃度時(shí)均呈現(xiàn)出對(duì)DNA損傷的保護(hù)作用,而在高濃度時(shí)增大了損傷作用,其原因有待進(jìn)一步探究,但由此可以說(shuō)明,藥物濃度過(guò)高可能對(duì)機(jī)體有副作用。對(duì)比芡實(shí)多糖水溶液體外抗氧化性能及對(duì)DNA氧化損傷的保護(hù)作用可得,后者的作用濃度遠(yuǎn)小于前者,推測(cè)其原因是DNA本身對(duì)一定濃度H2O2的損傷具有抑制作用[20],多糖水溶液只需清除部分自由基即可達(dá)到保護(hù)效果,且多糖對(duì)DNA的保護(hù)作用不僅僅是簡(jiǎn)單清除自由基,更有可能通過(guò)與DNA的絡(luò)合、嵌入等方式形成加合物從而起到保護(hù)作用[21]。

3 結(jié)論

本文采用纖維素酶超聲輔助法提取芡實(shí)多糖,最佳提取條件為:料液比為1∶20(g/mL),pH3,纖維素酶用量為原料質(zhì)量的2.0%,超聲時(shí)間為5min,提取時(shí)間為3h,提取溫度40℃,最佳得率為17.04%。脫除蛋白后,多糖純度為84.32%。比較芡實(shí)多糖水溶液對(duì)不同自由基的清除效果可得,芡實(shí)多糖對(duì)DPPH·有較好的清除效果,在質(zhì)量濃度為5mg/mL時(shí),清除率為94.63%;對(duì)羥基自由基、過(guò)氧化氫的清除效果較為明顯,質(zhì)量濃度為10mg/mL時(shí),對(duì)羥基自由基清除率為60.67%,質(zhì)量濃度為7mg/mL時(shí),對(duì)過(guò)氧化氫清除率為48.00%;對(duì)超氧陰離子自由基的清除效果較弱,質(zhì)量濃度為10mg/mL,清除率僅為20.32%。

探討不同濃度芡實(shí)多糖水溶液對(duì)H2O2光解反應(yīng)誘導(dǎo)質(zhì)粒DNA氧化損傷的保護(hù)作用,發(fā)現(xiàn)在0.02～0.5mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi),芡實(shí)多糖水溶液對(duì)質(zhì)粒DNA有較好的保護(hù)作用,當(dāng)質(zhì)量濃度為0.08mg/mL時(shí)最佳,DNA超螺旋結(jié)構(gòu)剩余含量為68.39%,但當(dāng)質(zhì)量濃度大于0.08mg/mL時(shí),VC對(duì)DNA呈現(xiàn)損傷作用,而芡實(shí)多糖水溶液在1.0mg/mL以下對(duì)DNA均呈現(xiàn)出保護(hù)作用,其對(duì)DNA保護(hù)作用的濃度范圍比VC更寬。綜上所述,芡實(shí)多糖具有較好的抗氧化活性,對(duì)DNA氧化損傷具有較為顯著的保護(hù)作用,是一種天然有效的抗氧化劑,可以廣泛用于食品添加劑及保健食品中。

[1]沈蓓,吳啟南,陳蓉,等.芡實(shí)的現(xiàn)代進(jìn)展研究[J].西北藥學(xué)雜志,2012,27(2):185-187.

[2]劉玉鳳,王保國(guó),張曉娟,等.芡實(shí)多糖的水提醇沉工藝研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2012,30(5):1100-1102.

[3]李素云,王立芹,鄭稼琳,等.自由基與衰老的研究進(jìn)展[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2007,27(20):2046-2048.

[4]崔劍,李兆隴,洪嘯吟,等.自由基生物抗氧化與疾病[J].清華大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2000,40(6):9-11.

[5]王紅麗,楊孝來(lái),王彩琴,等.枸杞多糖的抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用研究[J].衛(wèi)生職業(yè)教育,2005,23(17):112-113.

[6]陳克克.黨參多糖含量和組成分析及其對(duì)質(zhì)粒DNA的保護(hù)作用研究[D].西安:陜西師范大學(xué),2007.

[7]謝燕娟,陳曉丹,王曉波,等.超聲波輔助提取芡實(shí)多糖條件優(yōu)化[J].食品研究與開發(fā),2010,31(8):15-18.

[8]劉玉風(fēng),王保國(guó),李會(huì)娟,等.芡實(shí)多糖的分離純化及抗氧化作用研究[J].濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,34(6):392-394.

[9]趙翾,李紅良,葉倩雯.芡實(shí)多糖的粗提取及其對(duì)羥自由基的清除效果[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2010,36(11):177-181.

[10]涂宗財(cái),張秋婷,王輝,等.酸角果肉多糖的提取工藝優(yōu)化研究[J].食品工業(yè)科技,2010,31(10):303-305.

[11]祝士惠.畫眉草中多糖成分提取及其應(yīng)用研究[D].無(wú)錫:江南大學(xué),2011.

[12]鄒林武,趙謀明,游麗.香菇多糖提取工藝的優(yōu)化及其抗氧化活性研究[J].食品工業(yè)科技,2013,19(34):178-179.

[13]金鳴,蔡亞欣,李金榮,等.鄰二氮菲-Fe2+氧化法檢測(cè)H2O2/Fe2+產(chǎn)生的羥自由基[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展,1996,23(6):553-555.

[15]Xie Z J,Huang J R,Xu X M,et al. Antioxidant activity of peptides isolated from alfalfa leaf protein hydrolysate[J]. Food Chemistry,2008,111:370-376.

[16]王和才,胡秋輝.DPPH法測(cè)定紫紅薯提取物清除自由基的能力[J].食品研究與開發(fā),2010,31(1):133-134.

[17]Wiseman H,Halliwell B. Damage to DNA by reactive oxygen and nitrogen species:role in infammatory disease and progression to cancer[J].Biochemical Journal,1996,313:17-29.

[18]Akhilesh K,Sharmila C. DNA damage protecting activity and antioxidant potential of pudina extract[J].Food Chemistry,2007,100:1377-1384.

[19]周殿風(fēng),柯惟中,陳年風(fēng),等.不同濃度維生素C對(duì)DNA紫外損傷的影響[J].光譜學(xué)與光譜分析,2005,25(12):2012-2015.

[20]張德莉,朱圣姬,羅光富,等.自由基與DNA氧化損傷的研究進(jìn)展[J].三峽大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2004,26(6):564-565.

[21]張海容.修飾多糖的抗氧自由基活性及其與DNA結(jié)合機(jī)理的熒光法研究[D].廣州:華南理工大學(xué),2003.

Antioxidant activity and protective effect on oxidative plasmid DNA damage of polysaccharides fromSemenEuryales

ZHANG Yi,SUN Pei-dong*,CHEN Gui-bing,CAO Guang-qun

(The Key Laboratory of Food Colloids and Biotechnology,Ministry of Education,School of Chemical and Material Engineering,Jiangnan University,Wuxi 214122,China)

SemenEuryales;extracts;antioxidant potential;oxidative DNA damage

2014-08-08

張溢(1988-),女,碩士研究生,研究方向:化學(xué)工程。

*通訊作者:孫培冬(1967-),女,碩士,副教授,研究方向:天然活性成分提取及有機(jī)合成。

TS201.1

A

1002-0306(2015)11-0122-05

10.13386/j.issn1002-0306.2015.11.016