食品微生物檢驗實驗室比對結果分析報告

孫順愛

南寧鐵路局疾病預防控制中心，廣西南寧 530003

食源性致病菌廣泛存在于自然界，極易污染水源、食品等，對人類健康構成極大危害，諸如傷寒、急性腸胃炎、菌血癥和敗血癥等[1-2]。因此，食品微生物檢驗結果的準確性直接關系到一個單位的實驗室工作技術能力水平[3]，關系到食品衛生日常監督的權威性、科學性以及食源性疾病預防與控制的有效性[4]。為提高實驗室對食源性疾病標本的檢出能力，筆者結合親自參加2015年自治區疾病預防控制中心組織的微生物盲樣考核經歷，總結食源性致病菌的分離鑒定過程，為今后的食源性致病菌檢測工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 檢測樣品

該次盲樣考核樣品為2 mL凍存管半固體，塑料密封袋包裝。樣品編號：1號。

1.2 檢測依據

2015年國家食品污染和有害因素風險監測手冊；食品衛生微生物學檢驗GB4789。

1.3 培養基和生化試劑

培養基：該次比對所用的培養基由北京陸橋技術有限責任公司生產；微量生化鑒定管：由杭州濱和微生物試劑有限公司及北京陸橋技術有限責任公司生產；法國科瑪嘉顯色培養基：由上海欣中生物工程有限公司生產；所有培養基和生化試劑均在有效期內。

1.4 檢驗步驟

1.4.1 增菌培養 將1號樣品分別接種于下列增菌液中，置36℃培養18～24 h（3%NaCl堿性蛋白胨水6 h增菌1次），增菌結果見表1。

表1 1號樣品增菌結果

1.4 .2選擇性分離 根據增菌結果，分別轉種下列平板，置36℃培養18～24 h，見表2。

表2 1號樣品在不同培養基平板上的菌落形態

1.4.3 鏡檢結果為革蘭氏陰性略彎曲桿菌。

1.4.4 生化反應 ①初步生化反應：從分純的3%NaCl胰蛋白胨平板上挑取可疑菌落做初步生化試驗，見表3；②補充生化反應：見表4。

2 結果

2.1 增菌和選擇性分離結果

從表1可以看出，樣品在心腦浸液肉湯和3%NaCl堿性蛋白胨水中呈均勻混濁生長，說明樣品中含有能在該增菌液中生長的微生物。劃線于血平板、弧菌顯色平板、TCBS平板和麥康凱平板。在血平板上無溶血環產生；在TCBS平板上，菌落呈藍綠色；在麥康凱平板上無菌落生長；在弧菌顯色平板上，菌落呈淡紫色，與顯色培養基說明書副溶血性弧菌菌落特征一致。

表4 1號樣品補充生化試驗結果

表3 1號樣品初步生化試驗結果

2.2 生化鑒定結果

從表3和表4中可以看出，1號樣品氧化酶+，動力+；在無鹽胨水和10%NaCl中不生長，在3%NaCl、6%NaCl、8%NaCl胨水中生長良好；神奈川試驗+；分解葡萄糖產酸不產氣，不分解乳糖和蔗糖；靛基質+，V-P-，賴氨酸+，鳥氨酸+，精氨酸-，完全符合副溶血性弧菌特征。

2.3 結果報告

1 號樣品中檢出副溶血性弧菌。

3 討論

由于樣品為凍存管半固體保存，因此，收到樣品后應立即檢驗，若不能及時檢驗，應按作業指導書要求保存。檢驗過程中要避免樣品受到污染，要保護操作人員免受感染。

嚴格控制培養基和試劑的制作程序與質量，并按照相關標準和規范進行儲藏；避免使用過期培養基和試劑，對培養基和試劑的制作日期要做好詳細的記錄[5]。

目前，我國多數實驗室（尤其是基層實驗室）的設施還不夠完善，主要依靠常規方法分離鑒定。常規方法主要包括以下4個基本步驟：①前增菌和增菌；②分離純培養物；③屬和種的鑒定；④血清學分型[6]。繁瑣而復雜的檢驗步驟，要求檢驗人員除了具備豐富的檢測經驗和扎實的理論基礎外，還要有高度的責任心，在試驗過程中要密切觀察每個步驟中培養基和微量生化管的變化，為結果判斷提供準確可靠的依據。此外，能力驗證時可結合顯色培養基的使用，這樣可以大大提高能力驗證的效率和準確性[7]。

該次盲樣考核菌株為單一純菌株，然而在食品加工、銷售和食用過程中，往往會受到雜菌的污染，給目標菌的分離鑒定帶來一定的困難，干擾了目標菌的檢測，影響了目標菌的檢出率，建議使用顯色培養基，更方便有效地將目標菌和雜菌分開來[8]。同時也建議今后的盲樣考核，在考核菌中加入一些菌落形態或生化反應與目標菌相似的干擾菌，以增強檢驗人員對目標菌的認識，提高實驗室整體檢測水平。

4 結語

用常規檢驗方法檢測，分離鑒定過程繁瑣復雜，耗費時間長，且檢驗操作者的主觀判斷在很大程度上影響了整個檢驗過程，起著關鍵性的作用。實驗過程中，僅僅采用單一手段進行分離純化鑒定，容易造成漏檢，應該從多個角度去佐證實驗結果[9]。

食品衛生安全直接關系到人類的生命安全及健康，在食品微生物檢驗中，菌落總數、大腸菌群和致病菌是評價食品衛生質量的重要指標，也是把控食品安全的重要依據，對食品病原菌進行檢測和鑒定，能夠預防和控制食源性疾病的發生，從而保證人們的飲食安全[10]。

在突發性食源性疾病衛生事件中，對食源性致病菌檢測要求準確、快速、靈敏以及高特異，因此，有條件的實驗室除了采用常規檢測方法外，還可采用最新的檢測方法，如PCR法、免疫學法、生物發光法、生物傳感器技術、電阻抗法等方法進行檢測，以提高食源性致病菌檢出率，縮短檢測時間，使衛生監督機構和醫療機構能夠及時采取有效的預防和控制措施，及時治療食源性疾病患者，保證人類健康和生命安全。

[1]王學碩，崔生輝，邢書霞，等餐飲食品中沙門氏菌的危害分析、污染調查與防控[J].中國藥事，2013，27(9):974-979.

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[3]俞慕華，鞠長燕，陳輝，等.能力驗證試驗中沙門氏菌分離與鑒定[J].中國衛生工程學，2012，11（5）：424-426.

[4]劉曉敏.食品微生物檢驗的內容特點和檢驗質量控制措施[J].中國醫藥指南,2015,15(10):276-277.

[5]許陽.論食品微生物檢驗中培養基的質量控制[J].疾病監測與控制,2015,9(5):331-332.

[6]何曉青.沙門氏菌檢驗技術進展[J].中國公共衛生，2003，19（10）：1260-1262.

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[9]江志杰，王似錦，高春.食品中沙門氏菌檢出能力驗證結果分析[J].食品安全質量檢測學報，2015，6（5）：1929-1935.

[10]Khan M,Nazir J,Anjum AA,et al.Toxinotyping and antimicrobial susceptibility of enterotoxigenic Clostridium perfringens isolates from mutton,beef andchicken meat[J].J Food Sci Technol,2015,52(8):5323-5328.