氣相-內(nèi)標(biāo)法測(cè)定白蘭地中甲醇、乙酸乙酯、糠醛和高級(jí)醇

莫燕霞，殷居易，顧曉俊，陳梅珍，何衛(wèi)敏，吳維兒

（寧波出入境檢驗(yàn)檢疫局，浙江寧波315800）

白蘭地是以葡萄為原料，經(jīng)發(fā)酵、蒸餾、橡木桶陳釀、調(diào)配而成的蒸餾酒。除了水和乙醇外，還含有酸類、酯類、醛類、醇類等多種風(fēng)味化合物。白蘭地在其蒸酒過程中極易產(chǎn)生多余甲醇，甲醇是一種無色、有酒精氣味、易揮發(fā)的液體，超量對(duì)人體具有較強(qiáng)毒性作用，主要表現(xiàn)在損傷視力，嚴(yán)重者雙目失明，甚至致人死亡。我國對(duì)白蘭地中甲醇有著嚴(yán)格要求：GB2757-2012《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)蒸餾酒及其配制酒》[1]規(guī)定甲醇≤2.0 g/L，因此對(duì)白蘭地中甲醇的準(zhǔn)確測(cè)定和質(zhì)量控制顯得至關(guān)重要。酯類、醛類、糠醛和高級(jí)醇等在白蘭地理化檢測(cè)中是非常重要的指標(biāo)，與白蘭地品質(zhì)有著直接的聯(lián)系。白蘭地在貯存陳釀過程中萃取橡木桶中的香氣成分（酯類、醛類等），使得各種成分相互協(xié)調(diào)融合，形成白蘭地的特征香氣。

目前白蘭地（蒸餾酒）中甲醇的檢測(cè)方法主要采用GB/T 5009.48-2003《蒸餾酒和配制酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)分析方法》[2]規(guī)定的外標(biāo)法，分析結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度與進(jìn)樣量有密切關(guān)系，進(jìn)樣技術(shù)的好壞直接影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。GB/T 11856-2008《白蘭地》[3]規(guī)定白蘭地酯類（以乙酸乙酯計(jì)）用滴定法測(cè)定，操作復(fù)雜且滴定終點(diǎn)不易判斷；測(cè)定糠醛和高級(jí)醇時(shí)使用不同的內(nèi)標(biāo)物，需要單獨(dú)分析，費(fèi)時(shí)費(fèi)力；且采用單點(diǎn)測(cè)試，增加了試驗(yàn)誤差。本研究以甲基異丁基甲醇作為內(nèi)標(biāo)，采用內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法，毛細(xì)管柱-氫焰離子化檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定白蘭地中甲醇、乙酸乙酯、糠醛、高級(jí)醇（正丙醇+異戊醇+異丁醇+正丁醇+仲丁醇）含量，與外標(biāo)法和滴定法等方法比較，具有快速高效、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好、不受進(jìn)樣誤差影響等優(yōu)點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 儀器

7890氣相色譜儀配置氫焰離子化檢測(cè)器、色譜柱，Agilent CP-Wax 57（50 m ×250 μm，0.2 μm）：美國安捷倫；梅特勒-托利多XS204（分度值0.1 mg）電子天平：瑞士 Mettler。

1.2 試劑

甲醇、乙酸乙酯、糠醛、正丙醇、異戊醇、異丁醇、正丁醇、仲丁醇、甲基異丁基甲醇（內(nèi)標(biāo)）；無水乙醇：色譜純；水：超純水。

1.3 色譜條件

進(jìn)樣口溫度：220℃，檢測(cè)器（FID）溫度：300℃，氫氣流量：60 mL/min；空氣流量：400 mL/min；尾吹氮?dú)饬髁浚?5 mL/min；柱溫：起始溫度 40 ℃，保持 2 min，以6℃/min上升到180℃，保持2 min后運(yùn)行：200℃保持3 min。

1.4 方法

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

各組分標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：吸取甲醇、乙酸乙酯、糠醛、正丙醇、異戊醇、異丁醇、正丁醇、仲丁醇色譜純各200 μL，分別置于10 mL容量瓶中，用電子天平準(zhǔn)確稱量，用40%（體積分?jǐn)?shù)）乙醇溶液定容，計(jì)算質(zhì)量濃度，得到各個(gè)組分的單一標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，于冰箱保存。

內(nèi)標(biāo)溶液：吸取甲基異丁基甲醇內(nèi)標(biāo)液200 μL，置于10 mL容量瓶中，用電子天平準(zhǔn)確稱量，用40%（體積分?jǐn)?shù)）乙醇溶液定容，計(jì)算其質(zhì)量濃度，于冰箱保存。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

依次準(zhǔn)確吸取各組分標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0 mL于100 mL容量瓶中，用40%（體積分?jǐn)?shù)）乙醇溶液定容，計(jì)算各組分質(zhì)量濃度，得到6個(gè)不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。

準(zhǔn)確吸取上述混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液各10 mL于25 mL比色管中，依次加入0.1 mL甲基異丁基甲醇內(nèi)標(biāo)溶液，搖勻。取該系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)1.3項(xiàng)所述色譜條件，平行測(cè)定3次，每次進(jìn)樣1 μL，以各組分與內(nèi)標(biāo)濃度比為橫坐標(biāo)，各組分與內(nèi)標(biāo)峰面積比為縱坐標(biāo)繪制各組分標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立校正表，在氣相色譜化學(xué)工作站里自動(dòng)完成上述分析過程。

1.6 樣品的測(cè)定

準(zhǔn)確吸取樣品10 mL于25 mL比色管中，加入0.1 mL甲基異丁基甲醇內(nèi)標(biāo)溶液，搖勻。根據(jù)1.3項(xiàng)所述色譜條件，進(jìn)樣1 μL，測(cè)得樣品色譜圖，由氣相色譜化學(xué)工作站自動(dòng)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜分離情況

按1.3方法進(jìn)行試驗(yàn)，得到標(biāo)準(zhǔn)溶液和白蘭地樣品的色譜圖，如圖1所示。

圖1 各組分的色譜圖（a.標(biāo)樣；b.白蘭地）Fig.1 Chromatogram of components

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍

根據(jù)1.3操作條件，將標(biāo)準(zhǔn)系列溶液依次進(jìn)樣，分別得到8種組分的線性范圍、回歸方程及相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見表1。

2.3 方法重復(fù)性

準(zhǔn)確吸取1.4項(xiàng)下所配置的混合各組分標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液一定體積于100 mL容量瓶中，用40%（體積分?jǐn)?shù)）乙醇溶液定容，計(jì)算組分質(zhì)量濃度，得到單一濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，吸取上述溶液10 mL于25 mL比色管中，加入0.1 mL內(nèi)標(biāo)溶液，搖勻。同時(shí)準(zhǔn)確吸取樣品10 mL和適量標(biāo)準(zhǔn)溶液于25 mL比色管中，加入0.1 mL內(nèi)標(biāo)溶液，搖勻，配制成供試品溶液。取上述兩份溶液，在本試驗(yàn)所選用的色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣1 μL，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表2。標(biāo)準(zhǔn)品中各組分峰面積的RSD均小于3.0%，樣品中各組分峰面積的RSD均小于4.0%，說明方法的精密度良好，滿足測(cè)定要求。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限Table 1 Regression equation of standard curve，correlation coefficient and detection limit

表2 精密度試驗(yàn)（n=6）Table 2Precision experiment（n=6）

2.4 加標(biāo)回收率

配制低、中、高3個(gè)水平濃度的8種組分加標(biāo)樣品溶液，每個(gè)水平濃度進(jìn)行6次平行測(cè)定，考察方法的回收率和精密度，結(jié)果見表3。

表3 樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)（n=6）Table 3 Recovery experiment（n=6）

從表3結(jié)果中可以看出：各組分回收率在94.9%～117.7%之間，該方法的準(zhǔn)確度較高。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

試驗(yàn)中考察了白蘭地供試品溶液在8 h之內(nèi)的穩(wěn)定性，根據(jù)本試驗(yàn)中所選用的色譜條件，每隔1 h進(jìn)樣1 μL，測(cè)得7種組分峰面積的RSD均小于6.0%。

3 方法應(yīng)用

應(yīng)用本文建立的方法，共檢測(cè)白蘭地樣品6份，每份檢測(cè)4批。具體結(jié)果如表4所示。

表4 白蘭地中各組分含量Table 4 Contents of the compounds in brandy g/L

4 結(jié)論

本文建立的方法簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確，對(duì)白蘭地中甲醇、乙酸乙酯、糠醛、高級(jí)醇（正丙醇+異戊醇+異丁醇+正丁醇+仲丁醇）含量能有效地進(jìn)行同時(shí)測(cè)定，并且各組分的分離良好，回收率及重現(xiàn)性均符合測(cè)定要求，此方法對(duì)于白蘭地中甲醇、乙酸乙酯、糠醛、高級(jí)醇含量的檢測(cè)有很好的適用性。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB2757-2012食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)蒸餾酒及其配制酒[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2012

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部.GB/T 5009.48-2003蒸餾酒和配制酒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)分析方法[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2003

[3] 中華人民共和國衛(wèi)生部國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.GB/T 11856-2008白蘭地[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008