青春期卵巢腫瘤術(shù)中冰凍切片方法探討

度長海 曹書芬 張麗 國宏莉

青春期卵巢腫瘤術(shù)中冰凍切片方法探討

度長海 曹書芬 張麗 國宏莉

目的 探討快速、準(zhǔn)確地對術(shù)中卵巢腫瘤進行好的切片技巧。方法 采用冰凍切片對卵巢腫瘤進行快速制片。結(jié)果 冰凍切片質(zhì)量優(yōu)良、鏡下結(jié)構(gòu)、細(xì)胞形態(tài)清晰、細(xì)胞核、細(xì)胞漿染色更佳。結(jié)論 快速優(yōu)良冰凍切片對卵巢腫瘤術(shù)中病理診斷速度及準(zhǔn)確性具有重要作用。

冰凍切片術(shù)；制片方法；卵巢腫瘤

WHO定義青春期為10～19歲, 青春期卵巢腫瘤發(fā)病率相對成年人低, 但其惡性率較成人高, 其病理類型與成人相比具有其特殊性及復(fù)雜性。因為青春期少女很少定期體檢,早期缺乏特異性臨床表現(xiàn), 加之年齡的特殊性, 青春期卵巢腫瘤的診治常常被忽視, 誤診率高。青少年正處在第二性征發(fā)育的重要階段, 正確及時地對青春期卵巢腫瘤患者做出診斷和處理, 對于保留患者的卵巢功能、生育功能, 減少并發(fā)癥及改善生活質(zhì)量都尤為重要［1］。本文對本院收治的青春期卵巢腫瘤患者的快速冰凍切片操作技巧進行回顧性分析以期提高生育年齡段卵巢惡性腫瘤術(shù)中冰凍取材和診斷水平。現(xiàn)將具體方法報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2011～2013年間本院婦產(chǎn)科住院患者, 取材時多所見附件區(qū)見灰紅灰黃包塊10～14 cm大小, 切面呈囊實性, 囊內(nèi)含黏液、實性區(qū)多為黃色, 少數(shù)伴出血壞死, 部分患者上附輸卵管, 有囊泡, 內(nèi)含清亮液。

1.2 方法

1.2.1 準(zhǔn)備 在切片前, 提前將冷凍切片機(德國生產(chǎn)Leica-CM1950)的溫度降到所設(shè)定的溫度, 卵巢組織冷凍溫度以-24℃為宜, 調(diào)節(jié)好切片刀與組織的角度30～50°較適合。

1.2.2 取材 送檢組織間隔0.2～0.5 cm切開觀察。取材組織比常規(guī)稍大, 2 cm×2 cm×0.5 cm大小為宜。

1.2.3 速凍 將取好的組織迅速放在冷凍臺上, 等到膠水呈乳白色, 將凍錘壓在組織上約30 s。

1.2.4 制片 冷凍切片機刻度調(diào)到20 μm, 先粗切直到暴露組織最大面后, 再將刻度調(diào)到4.5 μm應(yīng)盡可能將的最大面裱貼在玻片上, 立即用AFF固定液固定。

1.2.5 染色、封片 將固定好的組織放入預(yù)先加熱過的蘇木精中染色1 min 左右, 依次0.5%鹽酸酒精分化、溫水返藍(lán)、染伊紅、梯度乙醇脫水、封固。

2 結(jié)果

光鏡下：制作出的卵巢包塊冷凍切片完整、無皺褶。見圖1。鏡下見實性結(jié)構(gòu)核大, 核仁突出胞核染色清晰, 扁平、立方細(xì)胞形成大小不等的囊, 其間隔以致密的梭形細(xì)胞間質(zhì)或疏松的黏液樣間質(zhì)。術(shù)中冰凍診斷：(卵巢包塊)惡性腫瘤,分類待常規(guī)病理。

圖1 冰凍切片胞核染色清晰, 胞質(zhì)鮮明圖

圖2 常規(guī)石蠟切片圖(與冰凍形成鮮明對比)

分析此類卵巢包塊冰凍及石蠟切片, 見圖2。作者發(fā)現(xiàn)冰凍切片在以上各結(jié)構(gòu)中均可見數(shù)量不等的嗜酸性玻璃樣點滴, 但并不是單獨一個卵巢生殖細(xì)胞腫瘤所特有的, 因為很多分化差的惡性腫瘤都能見到細(xì)胞的不典型性使得無法明確報告, 常規(guī)石蠟連續(xù)切片后出現(xiàn)腫瘤結(jié)構(gòu)清晰明確。

3 討論

好的冰凍切片術(shù)前準(zhǔn)備需充分、恰當(dāng)。如冷凍切片機長時間開機后機內(nèi)會形成冰霜, 積累過多可導(dǎo)致切片跳刀, 這時可用吹風(fēng)機快速將冰霜融化, 可自然干燥。因卵巢組織比較疏松, 囊區(qū)內(nèi)黏液等原因, 當(dāng)冷凍切片機溫度設(shè)置過高導(dǎo)致組織外硬內(nèi)軟, 切片時組織易粘在防卷板上, 易皺折, 切片不完整。切片刀與組織塊之間要調(diào)整到最適合的角度, 以30～50°適宜。準(zhǔn)備新的一次性切片刀, 可隨時更換使用。

總體來說卵巢冷凍切片制作并不難, 但病灶的規(guī)范化取材很關(guān)鍵［3］。進行冰凍取材的醫(yī)生必須由有一定診斷經(jīng)驗的醫(yī)師進行。在接到冰凍申請單后, 病理醫(yī)生應(yīng)該及時了解患者術(shù)前各項檢查, 尤其是影像學(xué)檢查結(jié)果, 以便在冰凍取材時做到有的放矢。對于臨時術(shù)中冰凍申請的患者, 也應(yīng)該及時與手術(shù)醫(yī)師或家屬聯(lián)系了解基本病情。標(biāo)本取材時, 首先要對大體標(biāo)本有一個整體認(rèn)識, 仔細(xì)觀察囊, 實區(qū)情況, 取材的常規(guī)組織切面厚度, 書頁狀剖開后仔細(xì)觀察切面情況,顏色、質(zhì)地, 并結(jié)合觸摸, 質(zhì)硬區(qū)域及囊區(qū)交界部分都應(yīng)該作為重點取材部位;尤其卵巢交界性腫瘤是一種低度潛在惡性的卵巢腫瘤, 占卵巢上皮性瘤的10%～15%。好發(fā)于育齡期婦女［2］。取材的同時還要注意保持取材器械的干燥, 注意不要讓送檢標(biāo)本上帶上過多水分, 以免帶水過多而使切片產(chǎn)生空洞、冰晶等現(xiàn)象, 導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)移位造成誤診。提高制片質(zhì)量良好的冰凍切片可以提高診斷的準(zhǔn)確率和診斷速度。速凍是冷凍切片好壞的關(guān)鍵, 這樣能減少組織內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,同時冰凍機箱溫度應(yīng)該恒定, 一般在-18℃左右為宜。冰凍切片要求切片要完整, 薄厚適當(dāng), 不要有褶皺、氣泡等現(xiàn)象,染片要清晰, 這樣才會減少診斷的風(fēng)險。在冰凍切片的診斷結(jié)果后進行術(shù)后石蠟切片診斷的必要性, 多進行對比, 以提高病理診斷水平。對術(shù)中冰凍病理診斷的確診率, 分析誤診的原因及減少誤診率, 術(shù)中冰凍切片病理診斷是術(shù)中確定病變性質(zhì)的有效方法, 對術(shù)中選擇適當(dāng)?shù)氖中g(shù)方案有重要的影響［4］。可見快速、準(zhǔn)確地對術(shù)中卵巢腫瘤進行好的切片, 掌握技巧的必要性。

［1］ 朱曉靜.青春期卵巢腫瘤臨床病理特點及診治分析.鄭州大學(xué), 2011.

［2］ 郄明蓉, 綦小蓉.卵巢交界性腫瘤的診治進展.中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志(電子版), 2012(4):418-421.

［3］ 文登虎, 楊月紅, 劉杰.甲狀腺微小癌術(shù)中冷凍切片的體會.臨床與實驗病理學(xué)雜志, 2013, 29(11):1263.

［4］ 李靜, 孫保存, 劉增輝, 等.2839例術(shù)中冰凍切片診斷與術(shù)后石蠟切片診斷的對比研究.天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2013(6): 471-473.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.01.172

2014-10-11］

442000 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院病理科(度長海曹書芬 張麗)；病理學(xué)教研室(國宏莉)