乳腺癌中醫辨證分型與BCRP表達的相關性分析

劉起勝 徐筱紅 劉懷 彭微 曾治中

·論著·

乳腺癌中醫辨證分型與BCRP表達的相關性分析

劉起勝 徐筱紅 劉懷 彭微 曾治中

目的 探討乳腺癌患者的中醫辨證分型與乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)表達的相關性。方法 對80例乳腺癌患者進行術前中醫辨證分型, 其中血瘀證23例、肝郁證30例、脾虛證17例、腎陰虛證10例, 對術后標本進行BCRP檢測, 并進行分析。結果 乳腺癌患者術前辨證為血瘀證者BCRP表達的陽性率高于其他證型, 差異有統計學意義(P＜0.05)。結論 乳腺癌術前中醫辨證與腫瘤BCRP表達有相關性, 血瘀證者BCRP表達的陽性率最高, 預后差。

乳腺癌；中醫；乳腺癌耐藥蛋白

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤, 且其發病率呈逐年上升趨勢, 現在乳腺癌發病率已躍居我國女性癌癥發病首位［1］。嚴重危害女性的健康。而中醫的辨證論治在其綜合治療中起著重要作用。BCRP是與腫瘤多藥耐藥有關的新的藥物排除泵, 本研究通過研究乳腺癌術前中醫辨證與BCRP的關系,指導乳腺癌的臨床治療。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集篩選湖南省直中醫醫院收治的原發性乳腺癌患者80例為本課題研究對象, 均為女性, 年齡21～85歲, 平均年齡(47.35±10.79)歲。詳細采集患者一般情況及癥狀、體征等信息。

1.2 診斷標準 臨床表現：乳腺腫塊、乳頭溢液、皮膚改變“橘皮樣外觀”、乳頭乳暈異常、腋窩淋巴結腫大、乳腺觸診有腫塊、X線檢查可見放射狀毛刺的腫塊陰影、B超檢查見癌腫特性、細胞涂片檢查可見癌細胞、穿刺或活組織病理檢查發現癌細胞。

1.3 納入標準 病理診斷為原發性乳腺癌患者；年齡在20～85之間的女性；以前未經化療、放療、中藥治療等乳腺癌相關治療；無智力及精神障礙。

1.4 排除標準 妊娠或哺乳期婦女；精神病患者；合并其他惡性腫瘤者(非乳腺癌轉移)。

1.5 方法

1.5.1 中醫辨證 中醫辨證主要根據《中藥新藥臨床研究指導原則》的診斷標準, 通過《信息采集表》收集80例乳腺癌患者臨床信息, 綜合乳腺癌患者術前的臨床表現, 對其進行中醫辨證分型。見表1。

表1 乳腺癌患者辨證分型情況

1.5.2 免疫組織化學方法 取80例乳腺癌患者術后標本,把標本進行石蠟包埋, 制成有硬度的組織塊, 組織塊用切片機3 μm厚連續切片, 免疫組化采用SP三步法：①脫蠟, 將切片放二甲苯中浸泡, 二甲苯Ⅰ浸泡10 min、二甲苯Ⅱ浸泡10 min。②梯度酒精脫水。③滅活內源性過氧化物酶：3% H2O2孵育10 min, PBS沖洗3次×3 min。④抗原修復：將0.01 M枸櫞酸鈉緩沖溶液注入塑料盒內, 放入玻片, 壓力鍋中加熱, 冷卻至室溫后PBS沖洗3次×3 min。⑤DAB顯色,蘇木素復染。水洗, 返藍并封固。已知的陽性片作陽性對照,顯微鏡下觀察。

1.6 結果判定標準 顯微鏡下觀察, 由病理醫師判讀BCRP蛋白的表達結果, 染色信號呈細顆粒狀, 棕黃色, 定位于細胞膜或細胞質中, 每例切片至少觀察10個高倍視野, 取平均值定為陽性率, 以腫瘤細胞陽性率＞25%為陽性。對實驗過程全程監控, 避免不必要的誤差出現。

1.7 統計學方法 采用SPSS16.0統計學軟件進行統計分析。計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

乳腺癌患者術前辨證為血瘀證者BCRP表達的陽性率高于其他證型, 差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 乳腺癌中醫辨證與BCRP的關系(n, %)

3 討論

乳腺癌, 古醫籍稱“乳巖”。因乳房腫塊堅硬如石, 潰爛后如巖石而得名, 中醫認為乳腺癌發病的病因有：情志因素：七情可致臟腑功能失調, 導致經絡痞澀, 聚結成核。飲食因素：肥甘厚味損傷脾胃, 運化失司, 以致痰凝、血瘀等瘀滯于乳絡而為病。體質因素：有些患者臟腑虛弱有易患乳腺癌的病理體質。外因也是一重要因素：“四時八風之客于經絡之中, 為瘤病也。臟腑虧虛、氣血不足為發病之本；在正氣虛衰的前提下, 同時邪氣盛實的基礎上, 導致氣滯、痰凝、血瘀、熱毒等蘊滯于乳絡而成乳巖。

BCRP是1998年分離出的一種新的ABC 轉運蛋白, 該蛋白含有633個氨基酸殘基, 其為半轉運蛋白。因該蛋白首先從乳腺細胞中被發現, 故又被稱為乳腺癌耐藥蛋白。BCRP廣泛存在于正常組織中, 其耐藥機制與P-糖蛋白(P-gp)相似, 通過將藥物轉運出胞外, 降低胞內藥物濃度導致細胞耐藥。有研究表明［2］, BCRP基因在乳腺癌組織中陽性表達率、表達水平均顯著高于癌旁組織, BCRP 基因表達水平與患者體內雌激素水平及雌激素受體α(ERα)及人表皮生長因子受體-2(Her-2) 強度呈正相關, 其過表達可能在乳腺癌的多藥耐藥中起較重要的作用。有淋巴結轉移者BCRP 基因表達水平顯著高于無淋巴結轉移者。石晶等［3］研究表明, BCRP表達陽性是接受以蒽環類化療藥為主的輔助化療的乳腺癌患者的預后不良指標, 與無病生存期有負相關趨勢。BCRP的表達可以指導乳腺癌的化療。有研究認為BCRP表達的腫瘤細胞對米托蒽醌、阿霉素、柔紅霉素等均產生交叉耐藥, 但是對長春堿、紫杉醇和順鉑敏感, 因此可以作為臨床用藥的依據。

化療是乳腺癌的重要治療方法之一, 然而癌細胞的多藥耐藥對腫瘤化療的療效造成了嚴重影響。目前, 中醫藥治療乳腺癌已取得良好療效, 也越來越受到重視, 本研究發現乳腺癌術前辨證與BCRP的表達相關。乳腺癌患者術前辨證為血瘀證出現BCRP陽性的幾率最高(86.96%)；從研究結果中可見乳腺癌中血瘀證型患者耐藥性強, 其化療效果較差, 預后較差。這些研究結果有利于指導臨床醫生對各證型預后的判斷, 可以為乳腺癌患者化療提供參考依據, 并針對性的進行中西醫結合治療。

［1］ 楊麗華.乳腺癌中醫證型和耐藥蛋白BCRP、MRP2、Sorcin等相關性研究.廈門大學, 2011.

［2］ 王麟, 魏明杰, 金峰, 等.乳腺癌耐藥相關蛋白在乳腺癌的表達及與臨床病理參數相關性.解剖科學進展, 2008, 14(2):133-136.

［3］ 石晶, 滕月娥, 張敬東, 等.乳腺癌組織中ABCG2 和HIF-1α的表達及臨床意義.中國醫科大學學報, 2008, 37(5):697-700.

Analysis of correlation between syndrome differentiation of traditional Chinese medicine and BCRP expression in breast cancer

LIU Qi-sheng, XU Xiao-hong, LIU Huai, et al.
Pathology group, Faculty of Basic Medicine of Hunan College of Traditional Chinese Medicine, Zhuzhou 412012, China

Objective To investigate correlation between syndrome differentiation of traditional Chinese medicine and breast cancer resistance protein (BCRP) expression.Methods There were 80 breast cancer patients received syndrome differentiation of traditional Chinese medicine before surgery, as blood stasis syndrome group with 23 cases, hepatic depression syndrome group with 30 cases, spleen deficiency syndrome group with 17 cases, and renal yin deficiency syndrome group with 10 cases.Detection of BCRP was made on postoperative samples for analysis.Results Patients with blood stasis syndrome by preoperative syndrome differentiation had higher positive rate of BCRP than other types.The difference had statistical significance (P＜0.05).Conclusion Syndrome differentiation of traditional Chinese medicine before breast cancer surgery is correlated with BCRP expression.Patients with blood stasis syndrome have the highest positive rate of BCRP and bad prognosis.

Breast cancer; Traditional Chinese medicine; Breast cancer resistance protein

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.26.001

2015-03-23］

湖南省中醫藥管理局項目(項目編號：2012108)

412012 湖南中醫藥高等專科學校基礎醫學部病理組