苦味酸速率法肌酐測定的線性范圍及其臨床應用評價

葉章發 王龍 桂遠望

苦味酸速率法肌酐測定的線性范圍及其臨床應用評價

葉章發 王龍 桂遠望

目的 觀察分析苦味酸速率法肌酐測定的線性范圍。方法 使用低、高值定值血清, 配制不同肌酐濃度的標本, 進行測定。結果 肌酐濃度在66.0～512.0 μmol/L范圍內檢測, 線性方程：Y=0.8571X+22.953,相關系數r=0.9973。結論 苦味酸速率法肌酐測定線性范圍較小, 臨床應用需采取措施加以校正。

苦味酸速率法；肌酐測定；線性范圍

苦味酸速率法肌酐測定在臨床實驗室具有一定范圍的應用, 觀察分析其測定的線性范圍及相關問題, 以期與使用者共同探討。

1 資料與方法

1.1 實驗標本 英國產RANDOX(Human-Sera分析用人血清基質)定值凍干質量控制血清。

1.2 儀器 OLYMPUS(奧林帕斯)AU-2700全自動生化分析儀。

1.3 試劑 國內某品牌苦味酸速率法肌酐測定試劑盒, R1試劑：0.32 mol/L氫氧化鈉, R2試劑：53.0 mmol/L苦味酸,肌酐標準品濃度：132.6 μmol/L。

1.4 方法 取RANDOX(Human-Sera分析用人血清基質)定值凍干質量控制血清, 同一批號的低值血清(肌酐定值濃度：66.0 μmol/L)3瓶, 同一批號的高值血清(肌酐定值濃度：512.0 μmol/L)3瓶 ；嚴格依照產品說明書使用去離子純凈水5.00 ml, 溶解各瓶凍干血清；待其充分溶解后, 混勻, 備用。分別將備用的每瓶低、高值血清依照不同比例, 進行配制,形成6個系列18份實驗標本。按照由低值向高值的順序,上機進行肌酐實驗檢測, 具體見表1。其中, 肌酐理論(定)值在400.0 μmol/L以上的標本, 使用生理鹽水稀釋后, 再次上機進行測定。上機主要技術參數：標本30 μl, R1試劑150 μl R2試劑150 μl, 主波長520 nm, 次波長700 nm, 反應時間13～15。

1.5 統計要求 a值在(1±0.10)范圍內, 相關系數r≥0.975,截距b小于檢測上限濃度的5%。

2 結果

肌酐濃度理論值在66.0～512.0 μmol/L范圍內檢測, 其線性方程：Y=0.8571X+22.953,回歸系數a=0.8571,截距b=22.953,相關系數r=0.9973。

表1 苦味酸速率法肌酐測定結果

3 討論

肌酐測定方法有傳統的化學法和近年來發展起來的酶學檢測方法。化學法是利用肌酐與苦味酸在堿性條件下發生反應, 生成橘紅色化合物, 進行肌酐濃度測定。其不足之處在于該反應并非僅對肌酐特異, 還有許多化合物如蛋白質、葡萄糖、抗壞血酸、丙酮、乙酰乙酸、丙酮酸, 胍和頭孢菌類抗生素等［1］, 均可與苦味酸反應生成色原, 干擾檢測結果。苦味酸速率法則是根據肌酐與非肌酐物質在堿性條件下, 與苦味酸試劑反應的動力學特性, 利用所謂“窗口期”期, 控制樣品在25～60 s之間與堿性苦味酸試劑發生反應, 以減少或避免快速反應假肌酐物質(在樣品與堿性苦味酸混合后迅速出現反應, 并在20 s內完成, 生成非肌酐有色化合物)、慢速反應假肌酐物質(樣品和堿性苦味酸混合后80～100 s才開始反應)的干擾, 這樣可以有效提高測定的特異性。有文獻報道由于方法學之間存在變異, 肌酐測定的結果并不完全一致, 苦味酸法測定結果與真值有偏差, 當肌酐＜100 μmol/ L, 結果假陽性偏高5%～10%；當肌酐＞200 μmol/L時, 偏低10%～15%［2］。這與作者使用英國產RANDOX(Human-Sera分析用人血清基質)定值凍干質量控制血清進行肌酐測定, 觀察分析其線性范圍時的測定數據基本吻合。而且, 隨著檢測標本肌酐濃度的不斷增高, 其測定數據比實際濃度值降低程度愈增大。從實驗數據分析, 肌酐理論值在66.0～512.0 μmol/L濃度區間進行檢測時, 其線性方程：Y=0.8571X+22.953,回歸系數a=0.8571,相關系數r=0.9973, 截距b=22.953；其中a＜0.90, 其統計分析數據不符合線性范圍的一般要求。如果降低檢測濃度,使其在肌酐理論值為66.0～423.0 μmol/L內檢測, 其線性方程：Y=0.9103X+13.120, a=0.9103, r=0.9998, b=13.120, 統計分析數據指標符合線性范圍的一般要求。因此可以得出, 該法檢測線性范圍相對較小, 為了滿足臨床一般要求、提高檢測數據的可靠性,建議肌酐測定時, 當其實際檢測值＞400.0 μmol/L時, 應使用生理鹽水將標本稀釋后再進行測定。一般將其稀釋后實際測定值為130.0 μmol/L左右, 再根據稀釋倍數換算出肌酐結果報告值。作者將肌酐理論值在400.0 μmol/L以上的實驗標本,使用生理鹽水稀釋后, 進行測定, 其換算報告值與理論值基本無異。

苦味酸速率法測定在方法學上存在不足之處, 而且其測定試劑的酸堿性對儀器管道有腐蝕作用, 影響生化儀器的壽命, 易產生交叉污染［3］。但由于其試劑成本低廉、易于保存、檢測數據重復性好、高值樣本稀釋后檢測結果能夠滿足臨床需求、可以在半自動生化分析儀及全自動生化分析儀上使用等特點, 依然在臨床實驗室有一定范圍的使用。肌酐的酶法分析是解決肌酐測定中非特異性干擾的根本途徑, 臨床實驗室一般使用肌酐酶偶聯肌氨酸氧化酶法進行測定。此法干擾和影響較少, 速度快, 適用于自動分析, 近年已被普遍采用［4］。另外, 從方法學上講, 酶法測定的線性范圍遠遠大于化學法。而酶法試劑成本較高, 對其在臨床實驗室廣泛應用有一定影響。至于苦味酸與肌酐測定的相關性問題, 有文獻報道, 肌酐濃度處于一個較低或中等的水平下, 由于受到干擾物質的影響, 苦味酸法測定偏高, 在肌酐濃度較高時, 由于受到線性范圍的影響, 苦味酸法測定結果偏低, 精密度方面兩種方法學的測定情況都較好［5］。當血清肌酐水平越高或越低時, 兩法測定結果的差異越大［6］。這與作者在臨床實際工作中發現的情況基本吻合。作者將尿毒癥患者的血清標本,依照上述要求稀釋后, 使用苦味酸速率法進行測定, 經換算后的結果與酶法直接測定結果基本一致。患者血清標本稀釋后, 一方面相關干擾物濃度相對降低, 對實驗影響基本可以忽略, 另一方面, 樣本稀釋后, 肌酐濃度降低, 使其能夠與苦味酸試劑充分反應。

2010年7月, 衛生部(現衛計委)下發通知, 要求各省區市醫療機構之間, 要于2010年底實現醫學影像資料互認和常規臨床檢驗項目結果互認。在實際工作中, 同一檢驗項目的檢測結果, 可能因為使用檢測方法的不同, 檢測數據出現較大差異。雖然按照臨床實驗室管理辦法相關要求, 實驗室實行嚴格的質量管理, 而且每項檢測結果后面都注明參考值具體范圍。但不同方法檢測出來的不同數據很有可能影響臨床醫生對于檢驗結果的精準把握。檢驗項目方法學上的統一, 是值得探討的實際問題。作者建議, 二級以上醫院或者使用大型全自動生化分析儀的臨床實驗室, 應該使用肌酐酶法檢測試劑。基層醫院的臨床實驗室在使用苦味酸法進行肌酐檢測時, 應對其不足之處有充分了解, 必要時采取相應的措施加以校正, 以保障實驗檢測數據的可靠性。

［1］ 葉應嫵, 王毓三, 申子瑜．全國臨床檢驗操作規程．第3版．北京:人民衛生出版社, 2006:465-466．

［2］ 徐國賓, 李志艷.應重視實驗室檢查在慢性腎病早期診斷中的應用.中華檢驗醫學雜志, 2006, 11(29):961-965.

［3］ 周碧燕, 李友邕, 覃政等．血清肌酐常規測定方法和臨床應用的研究進展.化學試劑, 2011, 33(8):718-722．

［4］ 全國衛生專業技術資格考試委員會.臨床醫學檢驗與技術(中級).北京：人民衛生出版社, 2012:402-403．

［5］ 吳進軍.兩種肌酐測定方法性能的比較．醫藥前沿, 2014(17): 147-148．

［6］ 李麗紅, 張國軍.酶法與苦味酸法測定肌酐差異的Meta分析.中華臨床醫師雜志(電子版), 2013, 7(7):142-145．

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.09.213

2014-12-19］

464000 信陽職業技術學院附屬醫院