EB病毒LMP1基因XhoⅠ位點缺失與高發區鼻咽癌相關性的Meta分析

王宏，劉芡芡，李斐斐，楊垚，譚沁，王云

(1 青島大學醫學院微生物學教研室，山東 青島 266021； 2 濟南軍區青島第一療養院檢驗科；3 青島大學醫學院公共衛生系； 4 青島大學醫學院口腔學院)

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EB病毒LMP1基因XhoⅠ位點缺失與高發區鼻咽癌相關性的Meta分析

王宏1，2，劉芡芡1，李斐斐1，楊垚3，譚沁4，王云1

(1 青島大學醫學院微生物學教研室，山東 青島 266021； 2 濟南軍區青島第一療養院檢驗科；3 青島大學醫學院公共衛生系； 4 青島大學醫學院口腔學院)

目的 探討EB病毒(EBV)潛伏膜蛋白1(LMP1)基因XhoⅠ位點缺失突變與高發區鼻咽癌(NPC)發生的關系。方法 檢索PubMed、中國生物醫學文獻數據庫、萬方、維普、中國知網等數據庫，收集發表于1990年1月1日—2014年12月31日的與LMP1基因XhoⅠ位點缺失突變相關的文獻，根據納入與排除標準納入文獻并提取相關數據。采用Stata 12.0軟件進行Meta分析，以比值比(OR)和95%可信區間(95%CI)為效應值，采用隨機效應模型進行分析，并進行發表文獻偏倚評估。結果 納入文獻共8篇，病例349例，對照150例，入選文獻無發表偏倚，各研究之間無異質性，各項研究的合并OR值為26.82(95%CI=8.42～85.40)。結論 EBV LMP1基因XhoⅠ位點缺失突變與高發區NPC可能存在相關性。

鼻咽腫瘤；皰疹病毒4型,人；膜蛋白質類；突變；Meta分析

EB病毒(EBV)與鼻咽癌(NPC)發生密切相關，由于EBV感染廣泛存在，而NPC發病存在明顯的地域性，在我國華南地區與東南亞地區高發，因此是否存在NPC相關的EBV變異毒株一直備受關注。EBV潛伏期基因表達產物在EBV致癌過程中可能發揮重要作用，其中潛伏膜蛋白1(LMP1)是公認的EBV轉化基因和致癌基因，可以轉化B細胞、成纖維細胞和上皮細胞，抑制人上皮細胞的分化和凋亡，促進腫瘤的轉移，而且在NPC和鼻腔NK/T細胞淋巴瘤等多種腫瘤組織中表達。LMP1可調節多種細胞通路，在NPC的發生發展中發揮著重要作用[1-2]。不同來源的EBV毒株LMP1基因存在多處序列差異，最初發現N端第一外顯子丟失XhoⅠ酶切位點導致的XhoⅠ缺失突變和C端第3外顯子30 bp缺失導致的del-LMP1變異[3-4]；后續有研究根據LMP1基因特征性的氨基酸改變，將LMP1分為7個亞型：B95-8、China 1、China 2、China 3、Med、NC和Alaskan[5]。目前關于XhoⅠ缺失突變和(或)del-LMP1變異與NPC特別是高發區NPC發生的關系已有多項研究，但是結果不完全一致。本研究應用Meta分析方法探討XhoⅠ缺失突變與高發區NPC發生的關系。

1 材料與方法

1.1 文獻檢索

檢索數據庫包括PubMed、維普中文科技期刊數據庫、萬方數據庫、中國生物醫學文獻數據庫(CBM)、中國知網全文數據庫(CNKI)，并輔以追溯法以及手工檢索等方法進行文獻檢索，使資料盡可能翔盡，語種為英文和中文。其中英文檢索詞為：nasopharyngeal carcinoma OR NPC、Epstein-Barr virus OR EBV、latent membrane protein l OR LMP1 OR XhoⅠ。中文檢索詞為：鼻咽癌、EB病毒、潛伏膜蛋白1。檢索范圍為1990年1月1日—2014年12月31日。

1.2 文獻納入及排除標準

1.2.1 納入標準 ①研究以NPC病人為病例組，病人均來源于NPC高發區，標本為腫瘤組織、咽漱液或外周血；對照人群來源于同一地區，包括健康人群、慢性炎癥和傳染性單核細胞增多癥病人，標本為組織、咽漱液或外周血；②各文獻報告數據完整，有病例組和對照組的觀察人數及各組XhoⅠ缺失及非缺失頻數，可以計算比值比(OR)與95%可信區間(95%CI)；③同一研究機構和同一作者的重復研究文獻，選擇病例數大或最近發表的1篇。

1.2.2 排除標準 ①非論著類的文獻；②數據不完整、無法提取相關數據以及引用他人數據的文獻；③數據無法計算效應值OR與95%CI的文獻。

1.3 數據提取

由2名研究者采用統一的數據提取表，獨立提取數據；如意見不一致，通過討論或由第3名研究者協助解決，最后所有項目都達成一致。提取的數據包括第一作者、地區、發表時間及標本類型等。

1.4 統計學處理

采用Stata 12.0軟件進行數據分析。對納入的研究進行異質性檢驗，并采用隨機效應模型分析。對各研究的原始數據進行整理，計算各研究中分組數據及合并數據的OR值及其95%CI，繪制森林圖，進行Meta分析。以Egger’s法繪制漏斗圖，評估發表偏倚。

2 結 果

2.1 納入文獻的基本情況

在PubMed、維普中文科技期刊數據庫、萬方數據庫、CBM、CNKI分別檢索到文獻442、141、167、176、182篇，排除重復文獻432篇，經閱讀題目和文獻摘要排除僅提供LMP1功能或機制研究而未涉及LMP1基因多態性的文獻595篇，通過閱讀全文獲得涉及NPC與XhoⅠ位點缺失文獻24篇。24篇文獻中排除非病例對照研究10篇，NPC低發區文獻4篇，同一研究機構重復文獻1篇，獲得高發區NPC與XhoⅠ位點缺失的文獻共計9篇，在統計學計算時有1篇文獻病例組與對照組樣本均為XhoⅠ位點缺失型，無法計算效應值OR與95%CI，故排除[6]。最終納入分析的文獻共8篇[3,7-13]。入選文獻涵蓋了我國廣東、香港、臺灣等地區以及馬來西亞等NPC的高發區，累計樣本共499例，其中病例組349例，對照組150例，具體數據見表1。

2.2 發表偏倚分析

Egger’s檢驗，P=0.978，文獻在漏斗圖上的分布基本對稱，表明納入的文獻無發表偏倚(圖1)。

2.3 Meta分析

異質性分析顯示各研究之間無異質性(I2=22.8%)。隨機效應模型分析結果顯示，LMP1基因XhoⅠ缺失與高發區NPC發生相關(合并OR值為26.82，95%CI=8.42～85.40)。見圖2。

表1 納入文獻的基本資料(例)

3 討 論

自1992年CHEN等[3]首次發現臺灣NPC中LMP1基因XhoⅠ位點缺失的檢出率(100%，50/50)高于正常人群(30%，6/20)，陸續有研究對來自我國NPC高發區即廣東、香港和臺灣等地區的NPC和非NPC人群中XhoⅠ位點缺失突變進行了檢測，所用方法均為PCR結合酶切。在包含對照人群的研究中，有研究表明，NPC中XhoⅠ位點缺失突變的檢出率高于對照人群，從而認為XhoⅠ位點缺失突變與NPC的發生有關[3,7-10]；但同時有研究表明，NPC中XhoⅠ位點缺失突變的檢出率與同一地區健康人群和其他EBV相關腫瘤如淋巴瘤中的檢出率類似，認為XhoⅠ位點缺失突變與NPC發生無關[11-13]。本研究納入的8篇文獻中，5篇報告有關聯性，3篇報告無關聯性。對這8篇文獻研究的異質性評估顯示不存在異質性，可以采用固定效應模型進行計算，但為了使結果更具說服力，本研究采用隨機效應模型計算，Meta分析顯示LMP1基因XhoⅠ位點缺失突變與高發區NPC的發生相關，合并OR值為26.82(95%CI=8.42～85.40)。發表偏倚檢驗未見明顯不對稱漏斗圖，表明Meta分析結果可信度高。在NPC非高發區亦有研究對NPC及非NPC人群中XhoⅠ位點缺失突變進行了檢測，但檢測樣本數少，且病例對照研究較少，因此本Meta分析沒有納入NPC低發區的文獻。

圖1 發表偏倚檢測的Egger’s漏斗圖

圖2 EBV LMP1基因XhoⅠ位點缺失突變與高發區NPC關系Meta分析的森林圖

本研究Meta分析所涉及的人群均來源于亞洲NPC高發區，排除了人群的遺傳異質性和種族差異。由于LMP1、EBV核抗原等多種EBV編碼基因在不同地域或人種來源的EBV毒株呈現不同的變異類型，EBV變異與地域有關，查閱NPC非高發區XhoⅠ位點缺失突變的文獻可見，亞洲地區也以XhoⅠ位點缺失突變為主，而美洲、歐洲和非洲則以非缺失突變為主，因此在進行Meta分析時，排除地域或人種差異或依據地域分層分析是必要的。故基于高發區病例對照研究的Meta分析能對數據進行更客觀系統地評價和總結，提高統計檢驗的效能，有助于揭示EBV基因變異與EBV相關腫瘤的關系。但是，本研究能夠納入的文獻偏少，而且本研究對照組中，納入人群涉及健康人群、傳染性單核細胞增多癥和慢性炎癥病人，標本包括組織、咽漱液和血液，而病例組除個別咽漱液和血液標本以外，均為NPC組織標本。以往有研究表明，同一個體不同部位(如組織、血液)標本檢測到的EBV亞型相同[14-15]，或者不同[16-17]。因此，盡管Meta分析結果顯示LMP1基因XhoⅠ位點缺失突變可能與高發區NPC相關，但研究病例偏少和標本的不一致提示需客觀地評估結論的可靠性。

EBV是NPC發生的重要因素之一，造成NPC地域性分布的原因，除環境和遺傳因素外，是否存在高致癌性EBV變異毒株一直是研究的熱點問題之一。不同來源EBV存在多種變異，但對多數基因如LMP1、EBV核抗原和BZLF1基因的流行病學研究均未獲得一致的結論[18]。造成研究結果差異的原因包括病例數少、對照人群設置不統一及標本來源不一致等，因此，今后應進行大樣本、多地區的病例對照研究，而且應合理設置病例組和對照組，病例組和對照組盡量采用相同的標本(可以采用多部位取材來解決該問題)，以進一步提高研究的一致性和說服力。

[1] TSAO S W, TSANG C M, TO K F, et al. The role of Epstein-Barr virus in epithelial malignancies[J]. J Pathol, 2015,235(2):323-333.

[2] 張少燕,劉霞,王笑峰,等. TGF-β1參與調控LMP1介導信號轉導通路的研究[J]. 青島大學醫學院學報, 2013,49(5):386-389.

[3] CHEN M L, TSAI C N, LIANG C L, et al. Cloning and cha-racterization of the latent membrane protein (LMP) of a specific Epstein-Barr virus variant derived from the nasopharyngeal carcinoma in the Taiwanese population[J]. Oncogene, 1992,7(11):2131-2140.

[4] HU L F, ZABAROVSKY E R, CHEN F, et al. Isolation and sequencing of the Epstein-Barr virus BNLF-1 gene (LMP1) from a Chinese nasopharyngeal carcinoma[J]. J Gen Virol, 1991,72(Pt 10):2399-2409.

[5] EDWARDS R H, SEILLIER-MOISEIWITSCH F, RAAB-TRAUB N. Signature amino acid changes in latent membrane protein 1 distinguish Epstein-Barr virus strains[J]. Virology, 1999,261(1):79-95.

[6] CHEUNG S T, LO K W, LEUNG S F, et al. Prevalence of LMP1 deletion variant of Epstein-Barr virus in nasopharyngeal carcinoma and gastric tumors in Hong Kong[J]. Int J Cancer, 1996,66(5):711-712.

[7] 林素暇,宗永生,吳秋良,等. 鼻咽癌中EB病毒LMP1基因N端XhoⅠ酶切位點的丟失[J]. 癌癥, 2003,22(11):1147-1151.

[8] TAN E L, PEH S C, SAM C K. Analyses of Epstein-Barr virus latent membrane protein-1 in malaysian nasopharyngeal carcinoma: high prevalence of 30 bp deletion, Xho1 polymorphism and evidence of dual infections[J]. J Med Virol, 2003,69(2):251-257.

[9] LIN J C, CHERNG J M, LIN H J, et al. Amino acid changes in functional domains of latent membrane protein 1 of Epstein-Barr virus in nasopharyngeal carcinoma of southern China and Taiwan: prevalence of an HLA A2-restricted 'epitope-loss variant'[J]. J Gen Virol, 2004,85(Pt 7):2023-2034.

[10]SEE H S, YAP Y Y, YIP W K, et al. Epstein-Barr virus latent membrane protein-1 (LMP-1) 30 bp deletion and XhoⅠ-loss is associated with type Ⅲ nasopharyngeal carcinoma in Malaysia[J]. World J Surg Oncol, 2008,6:18.

[11]KHANIM F, YAO Q Y, NIEDOBITEK G, et al. Analysis of Epstein-Barr virus gene polymorphisms in normal donors and in virus-associated tumors from different geographic locations[J]. Blood, 1996,88(9):3491-3501.

[12]CHANG Y S, SU I J, CHUNG P J, et al. Detection of an Epstein-Barr-virus variant in t-cell-lymphoma tissues identical to the distinct strain observed in nasopharyngeal carcinoma in the taiwanese population[J]. Int J Cancer, 1995,62(6):673-677.

[13]WU S J, LAY J D, CHEN C L, et al. Genomic analysis of Epstein-Barr virus in nasal and peripheral T-cell lymphoma: a comparison with nasopharyngeal carcinoma in an endemic area[J]. J Med Virol, 1996,50(4):314-321.

[14]NIE Y, SUN Y, WANG Y, et al. Epstein-Barr virus gene po-lymorphism in different parts of the same nasopharyngeal carcinoma patient[J]. Arch Virol, 2013,158(5):1031-1037.

[15]KLEMENC P, MARIN J, SOBA E, et al. Distribution of Epstein-Barr virus genotypes in throat washings, sera, peripheral blood lymphocytes and in EBV positive tumor biopsies from slovenian patients with nasopharyngeal carcinoma[J]. J Med Virol, 2006,78(8):1083-1090.

[16]HENRY S, SACAZE C, BERRAJAH L, et al. In nasopharyngeal carcinoma-bearing patients, tumors and lymphocytes are infected by different Epstein-Barr virus strains[J]. Int J Cancer, 2001,91(5):698-704.

[17]EDWARDS R H, SITKI-GREEN D, MOORE D T, et al. Potential selection of LMP1 variants in nasopharyngeal carcinoma[J]. J Virol, 2004,78(2):868-881.

[18]CHANG C M, YU K J, MBULAITEYE S M, et al. The extent of genetic diversity of Epstein-Barr virus and its geogra-phic and disease patterns: a need for reappraisal[J]. Virus Res, 2009,143(2):209-221.

(本文編輯 馬偉平)

CORRELATION BETWEEN XHOⅠ LOSS IN LATENT MEMBRANE 1 GENE OF EPSTEIN-BARR VIRUS AND ENDEMIC NASOPHARYNGEAL CARCINOMA: A META ANALYSIS

WANGHong,LIUQianqian,LIFeifei,YANGYao,TANQin,WANGYun

(Department of Microbiology, Qingdao University Medical College, Qingdao 266021, China)

ObjectiveTo investigate the relationship between XhoⅠ loss in latent membrane 1 (LMP1) gene of Epstein-Barr virus and endemic nasopharyngeal carcinoma (NPC).MethodsThe databases of PubMed, CBM, Wanfang, Weipu and CNKI were searched for the literature regarding XhoⅠ loss in LMP1 gene published from January l, 1990 to December 31, 2014, and the related data were collected according to inclusion-and-exclusion criteria. Odds radio (OR) and 95% confidence interval (95%CI) were used to analyze the correlation between XhoⅠ loss and NPC in random effect pooled measure. Egger’s test was used to assess the publication bias.ResultsEight studies including 349 NPC cases and 150 control cases were pooled in this Meta-analysis and no publication bias was found. The pooledORvalue (95%CI) was 26.82 (8.42-85.40).ConclusionThe Meta-analysis suggests the XhoⅠ loss in LMP1 gene of EBV is probably associated with endemic nasopharyngeal carcinoma.

nasopharyngeal neoplasms; herpesvirus 4, human; membrane proteins; mutation; Meta-analysis

2015-03-16;

2015-06-10

國家自然科學基金資助項目(81171571)和青島市科技局資助項目(13-1-3-50-nsh)

王宏(1984-)，女，碩士研究生。

王云(1970-)，女，博士，教授，碩士生導師。

R739.6

A

1008-0341(2015)04-0398-04