丹紅注射液對(duì)腎性高血壓大鼠離體心臟心功能的影響

祁 濤 陳德森 鄒佩霞 姚 遠(yuǎn) 李 莉

(1河南省平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，平頂山，467099;2湖北醫(yī)藥學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)室，十堰，442000;3湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院兒科，十堰，442000)

腎性高血壓(Renal Hypertension，RH)是由于腎實(shí)質(zhì)性病變而導(dǎo)致的血壓升高，是繼發(fā)性高血壓的一種［1］。本病的發(fā)生主要是由于腎細(xì)小動(dòng)脈狹窄、間質(zhì)組織和結(jié)締組織增生、腎小管萎縮、腎臟血流灌注不足造成的腎臟既有實(shí)質(zhì)性損害最終導(dǎo)致高血壓的發(fā)生。而高血壓又會(huì)造成心臟的損害，主要導(dǎo)致左心室肥厚，二者相互促進(jìn)，會(huì)使疾病進(jìn)一步發(fā)展，因此，對(duì)于RH需積極治療。由于丹紅注射液對(duì)于RH心功能的影響及其機(jī)制鮮有報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠RH模型，通過(guò)Langendorff離體心臟灌流離體大鼠心臟［2］，測(cè)定丹紅注射液對(duì)離體RH大鼠心功能作用進(jìn)行了系統(tǒng)觀察，初步分析其對(duì)離體大鼠心功能的影響及其可能作用機(jī)制，為其用于RH的治療提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，以期增加其臨床適應(yīng)證，并為預(yù)防其在治療心血管及其他系統(tǒng)疾病中可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠50只，體重180～220 g，雌雄不拘，湖北醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證SCXK(鄂)2011-0008，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施使用許可證SYXK(鄂)2011-0031。

1.2 儀器及藥品 BL-420F生物功能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟電子有限公司);BP-6無(wú)創(chuàng)動(dòng)物血壓測(cè)試儀(成都泰盟電子有限公司);Langendorff-Perfused離體心臟模型監(jiān)測(cè)儀;丹紅注射液(北京第四制藥廠，批號(hào)961048);維拉帕米(江蘇方強(qiáng)制藥廠生產(chǎn)，批號(hào):20081008)。

1.3 RH模型大鼠制備方法 參照文獻(xiàn)［3］行雙腎雙狹方法制備RH模型大鼠。大鼠按戊巴比妥鈉(0.05 g/kg，ip)腹腔注射麻醉，俯臥位固定于手術(shù)臺(tái)，碘伏消毒備皮，于第3腰椎棘突處沿背部后正中線切開(kāi)皮膚，用玻璃分針鈍性分離皮下筋膜，打開(kāi)腹腔，找到腎臟及腎門。分別分離出左右兩側(cè)腎動(dòng)脈約0.5 cm，腎動(dòng)脈下穿入無(wú)菌手術(shù)線，用5號(hào)針頭與腎動(dòng)脈血管長(zhǎng)軸平行放置，扎緊腎動(dòng)脈和針頭，觀察腎臟顏色變深以確定狹閉程度后抽出針灸針;觀察30 min確認(rèn)雙腎無(wú)明顯的瘀血、壞死或蒼白后，縫合傷口并消毒處理。術(shù)后肌肉注射青霉素G 8萬(wàn)U，共5 d，1次/d。術(shù)后自由進(jìn)食飲水，1周后拆去皮膚縫線。術(shù)后第6周有35只大鼠存活，采用BP-6無(wú)創(chuàng)動(dòng)物血壓測(cè)試儀測(cè)定其尾動(dòng)脈血壓，以血壓上升大于30 mmHg為RH模型造模成功大鼠，經(jīng)測(cè)定有30只大鼠符合RH模型入選標(biāo)準(zhǔn)，本模型造模成功率達(dá)60%。將篩選出的30只RH造模成功大鼠，采用隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為模型組、維拉帕米組、丹紅組3組。

1.4 離體大鼠心臟灌流方法及記錄指標(biāo) 3組RH模型大鼠分別經(jīng)尾靜脈注入肝素(0.3 mL/100 g)，10 min后斷頭處死，打開(kāi)胸腔，用鑷子提起心臟根部，用剪刀盡量靠近頭端(即遠(yuǎn)離心臟)剪斷血管，保留0.5 cm主動(dòng)脈。迅速取出尚在搏動(dòng)的心臟，置95%O2和5%CO2混合氣體飽和的KH營(yíng)養(yǎng)液(4℃)中，去除主動(dòng)脈血管周圍的結(jié)締組織，經(jīng)主動(dòng)脈把心臟固定在Langendorff灌流裝置上。打開(kāi)灌流液行逆向灌流，灌流壓力6.68 kPa［4］，使心臟恢復(fù)自主搏動(dòng)。此時(shí)關(guān)閉灌流液，剪去一部分左心耳，將球囊通過(guò)左心耳、房室瓣插到左心室內(nèi)。向球囊內(nèi)注入生理鹽水，并使左室的舒張末期壓調(diào)整在0～10 mmHg之間，再次打開(kāi)灌流液行逆向灌流，通過(guò)BL-420F生物實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄離體心臟±LV dp/dt max、LVEDD(%)、LVEDP(%)及 LVSP、LVEF 等指標(biāo)［5］。預(yù)灌流10 min后經(jīng)灌流液分別中給藥灌注離體大鼠心臟。維拉帕米組按5×10-6mol/L維拉帕米的濃度配制KH營(yíng)養(yǎng)液1 000 mL，丹紅注射液組按 (0.2 g/kg)丹紅注射液稀釋到1 000 mLKH營(yíng)養(yǎng)液中，模型組僅灌流KH營(yíng)養(yǎng)液，3組均連續(xù)記錄給藥前10 min及灌流后0.5 h，1 h，2 h上述指標(biāo)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理［6］，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以(ˉx±s)表示，指標(biāo)的比較采用單因素方差分析，組間差異則采用Dunnett檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 丹紅注射液對(duì)大鼠±LV dp/dt max的影響 在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，模型組用藥前10 min及灌流后0.5 h，1 h，2 h4 個(gè)時(shí)點(diǎn) ± LV dp/dt max較為穩(wěn)定。維拉帕米組在灌流后0.5 h，1 h，2 h 3個(gè)時(shí)點(diǎn)，±LV dp/dt max明顯降低，與模型組及藥前10 min比較，P＜0.05，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。丹紅組在灌流后2 h對(duì)±LV dp/dt max有一定降低作用，但沒(méi)有陽(yáng)性藥維拉帕米組降低幅度大，但與模型組比較，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明丹紅注射液有與維拉帕米相似的降低±LV dp/dt max作用，說(shuō)明其有一定的降低心臟作功效應(yīng)，見(jiàn)表1。

2.2 對(duì)大鼠LVEDD及LVESD的影響 模型組大鼠在用藥前10 min及灌流后0.5 h，1 h，2 h 4個(gè)時(shí)點(diǎn)LVEDD及LVESD無(wú)變化。維拉帕米組在灌流后0.5 h，1 h，2 h 3個(gè)時(shí)點(diǎn)LVEDD及LVESD都明顯降低。丹紅組在給藥后2 h內(nèi)也有一定的降低LVEDD及LVESD作用，但與模型組比較，P＞0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，如表2所示。

表1 丹紅注射液對(duì)大鼠離體心臟±LVdp/dt max的影響(mmHg/s)

表2 丹紅注射液對(duì)大鼠離體心臟LVEDD及LVESD的影響(%)

表3 丹紅注射液對(duì)大鼠離體心臟LVSP及LVEF的影響

2.3 丹紅注射液對(duì)大鼠LVSP及LVEF的影響 模型組大鼠用藥前10 min及灌流后0.5 h，1 h，2 h 4個(gè)時(shí)點(diǎn)LVSP及LVEF無(wú)變化。維拉帕米組在灌流后0.5 h，1 h，2 h 3個(gè)時(shí)點(diǎn)LVSP及LVEF均明顯降低。丹紅組在灌流后2 h也可降低LVSP及LVEF，與模型組比較，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，如表3所示。

3 討論

丹紅注射液是由丹參和紅花經(jīng)科學(xué)提取而成的復(fù)方制劑，其主要的藥理作用是對(duì)心血管系統(tǒng)。其主要有效成分包括丹參酮、丹參酚酸、紅花黃色素等［7-8］，其有效成分為脂溶性丹參酮及水溶性酚類物質(zhì)［9］，能擴(kuò)張血管，活血化瘀，增加心肌毛細(xì)血管密度［10］。可有效改善微循環(huán)、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈流量、清除氧自由基［11］及降低心肌耗氧量等作用［12］。本研究重點(diǎn)觀察了丹紅注射液對(duì)RH大鼠心功能影響，旨在探索丹紅注射液更多活性成分及新的適應(yīng)證，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

在心功能指標(biāo)中，LVSP主要反映心臟前負(fù)荷及心肌收縮能力，LVSP的改變與心室容積、舒張功能和心室順應(yīng)性相關(guān)，而±LVdp/dt max反映心肌收縮增加及縮短速度，是心肌收縮力的重要評(píng)價(jià)指標(biāo)，與心肌收縮力呈正相關(guān)。LVEF則反應(yīng)心臟泵血功能，LVEF降低則說(shuō)明心臟作功及耗能降低。故±LVdp/dt max及LVSP的降低均說(shuō)明心肌收縮力減弱、心肌作功及耗氧降低。本研究發(fā)現(xiàn)丹紅注射液對(duì)RH大鼠離體心功能具有一定的影響，可降低RH大鼠離體心臟LVSP、LVEF及±LVdp/dt max作用，在一定程度上提高心肌組織耐缺氧能力并使心臟順應(yīng)性增加［14］，其實(shí)際意義是使心臟得到有效的休息及保護(hù)。這種使大鼠離體心臟正性變力及降低LVSP的作用與王炳章的相關(guān)研究一致［13］，亦有研究證實(shí)丹參丹參酮能夠減少心肌酶合成、抑制心肌損傷并有效降低心肌收縮力而起到保護(hù)心肌細(xì)胞膜的作用［15］。綜上所述，丹紅注射液對(duì)RH大鼠離體心臟具有降低心肌收縮力，減輕心臟負(fù)荷進(jìn)而改善心功能的作用，在臨床上治療RH應(yīng)有一定的治療意義。

［1］范東霞，臧萍，黃昌雪，等.提高高血壓患者服藥依從性干預(yù)措施的研究進(jìn)展［J］.護(hù)理研究，2006，15(5):187-189.

［2］陳東，劉丹，曾國(guó)華，等.HSIy70介導(dǎo)的川芎嗪預(yù)處理對(duì)大鼠離體心臟的延遲保護(hù)作用［J］.中藥藥理與臨床2007，23(5):231-233.

［3］陳德森，李莉，郭俐宏，等.腹主動(dòng)脈狹窄致左室肥厚動(dòng)物模型制備［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，35(6):627-628.

［4］Chen HP，He M，Huang QB，et al.Delayed protection of tetramethylpyrazine on neonatal rat c.ardiomyooytes subjected to anoxia—reoxygenation injury［J］.Basic Clin Pharmacol Toxic.2007，100(2):366-371.

［5］陳德森，郭俐宏，李莉，等.丹紅注射液對(duì)大鼠局灶性腦缺血再澆灌注損傷的影響［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，41(9):780-781.

［6］周倩，姚廣濤，金若敏，等.商陸皂苷甲致腎細(xì)胞毒性的研究［J］.世界中醫(yī)藥，2014，4(9):151-1152.

［7］陳浩，趙立軒，楚若鵬，等.丹紅注射液對(duì)急性心肌梗死患者介入術(shù)后再灌注損傷的作用［J］.河北醫(yī)藥，2010，32(9):1097-1098.

［8］付辛芳，劉曉紅.丹參的藥理作用與臨床應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥物與臨床，2006，15(1):76-77.

［9］薛雁鴻，杜學(xué)軍，趙紹梅，等.奧扎格雷鈉聯(lián)合丹紅注射液治療急性腦梗死臨床研究［J］.中國(guó)醫(yī)藥，2012，7(3):289.

［10］呂菊英.丹紅注射液聯(lián)合脈血康治療糖尿病性冠心病心絞痛的療效觀察［J］.江西醫(yī)藥，2011，26(3):239-240.

［11］徐如英，童樹(shù)洪.紅花的化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥業(yè)，2010，19(20):86-87.

［12］王強(qiáng)，鄧敏.腦心通聯(lián)合丹紅注射液治療穩(wěn)定型心絞痛75例［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，18(27):3335-3336.

［13］王炳章，楊鳴崗，龐雪，等.丹紅注射液對(duì)麻醉大鼠心血管作用的初步觀察［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1979，14(10):624-627.

［14］Zhao PX，Jiang S.Effect of danhong injection on ET-1，sP-sel，and hs-CRP in patients with acute coronary syndrome undergoing percutaneous coronary intervention［J］.Chinese Journal of Integrative Medicine，2011，31(1):11-14.

［15］Rhyu MR，Kim EY，Kim B.Nitric oxide-mediated vasorelaxation by Rhizoma Ligustici wallichii in isolated rat thoracic aorta［J］.Phytomedicine，2004，11(1):51-55.