參麥寧心合劑對充血性心力衰竭大鼠TNF-α、IL-6的影響?

李為黨，謝秋利，李慧娜，李慶海△

(1.河南中醫學院，鄭州 450008;2.河南中醫學院第三附屬醫院，鄭州 450008)

參麥寧心合劑對充血性心力衰竭大鼠TNF-α、IL-6的影響?

李為黨1，謝秋利2，李慧娜2，李慶海2△

(1.河南中醫學院，鄭州 450008;2.河南中醫學院第三附屬醫院，鄭州 450008)

目的:觀察參麥寧心合劑對充血性心力衰竭大鼠TNF-α、IL-6的影響。方法:取健康Wistar大鼠60只，隨機選出8只作為正常對照組，52只大鼠采用結扎左冠狀動脈前降支復制充血性心力衰竭大鼠動物模型，4周后做心臟彩色多普勒超聲評價，EF≤50%為合格。按EF≤50%入選標準分為3組，即西藥治療組(培哚普利0.1 mg/kg·d;美托洛爾0.5 mg/kg·d)、中藥治療組(參麥寧心合劑3 mg/kg·d)、模型對照組(生理鹽水1 ml/kg·d)給予灌胃2周。于最后1次灌胃后處死動物取血，測定大鼠血清中TNF-a、IL-6的水平。結果:與正常對照組比較，模型對照組大鼠血清TNF-α、IL-6水平顯著增高，LVEF、SV均顯著降低。中藥治療組和西藥對照組血清TNF-α、IL-6水平均較模型對照組顯著降低，LVEF、SV明顯提高。結論:參麥寧心合劑可明顯提高充血性心力衰竭大鼠的左室射血分數和每搏輸出量，可明顯降低充血性心力衰竭大鼠血清TNF-a、IL-6水平。

參麥寧心合劑;充血性心力衰竭;腫瘤壞死因子-α;白介素-6

充血性心力衰竭系指在有適量靜脈血回流的情況下，由于心臟收縮和(或)舒張功能障礙，心排血量不足以維持組織代謝需要的一種病理狀態。李慶海教授結合幾十年臨床實踐采用自擬方參麥寧心合劑治療心力衰竭取得良好的效果。本實驗通過研究參麥寧心合劑對心衰大鼠TNF-α、IL-6的影響，進一步闡述其作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

10～12周齡SPF級健康雄性Wistar大白鼠60只，體質量180～200 g，由山東魯抗醫藥集團提供(生產許可證號scxk魯20080002)。動物飼料及墊料由鄭州大學動物中心生產，河南省中醫院中心實驗室統一消毒后提供。

1.2 實驗藥品

參麥寧心合劑由安陽市中醫院提供(250 ml/瓶，批號z05050137);培哚普利片(規格4 mg，批號H20534053)天津;酒石酸美托洛爾，規格25 mg(批號H20065355)，石家莊以嶺藥業公司生產;青霉素(80萬單位，批號H13020657)，華北制藥有限公司生產;水合氯醛(批號20100614)，鄭州派尼有限公司生產;利多卡因(5 ml∶0.1 g，H31021072);呋塞米注射液(規格2 ml∶20 mg，H12020527)，湖北天藥藥業股份有限公司。

1.3 實驗試劑

試劑盒由鄭州金城檢驗中心提供。

1.4 實驗儀器

小型動物呼吸機(型號DW3000-B);低溫高速離心機(SIGMA3-18K GERMANY SIGMA);高壓蒸汽滅菌鍋TMQ-CV，山東新華;心臟彩超機:ACUSON Cypress，美國 Florida;B超耦合劑:YY0299，天津;精密天平:FAII04，上海精科;微波爐:G80w23ysl-V9.格蘭仕;手術針、線、剪刀、鑷子、止血鉗均由河南省中醫院中心實驗室統一提供。

2 實驗方法

2.1 實驗動物飼養

大鼠常規、分籠飼養，籠中墊約2～3 cm的玉米芯墊料，每籠4只。飲用水取自小動物消毒機，采用光照12 h、黑夜12 h、溫度24±2℃、濕度40% ～60%。采用IVO通風設備，每2 d更換1次墊料，水與飼料由大鼠隨意攝取，保持實驗室環境清潔、安靜，避免噪聲及其他干擾。

2.2 模型復制方法

方法［1］，手術當天稱重后，利用3.5%水合氯醛按大鼠體質量0.8 ml/100 g腹腔注射進行麻醉。待大鼠麻醉平穩后置于手術臺，然后將心前區手術部位的體毛剪干凈。隨后用14 g的穿刺針套管作為氣管導管插入氣管，將氣管導管和呼吸機相連，調整呼吸機工作狀態，在無菌操作下，于胸骨左側第3、4肋間橫向切開皮膚長約1.5 cm的切口，鈍性分離軟組織并暴露心臟后，將呼吸機放置工作狀態，潮氣量為14 ml/kg，呼吸頻率為60～65次/ min開始機械通氣。待機械通氣順暢后用碘伏消毒皮膚，在左側第4肋間剪開皮膚，逐層分離肌肉，利用開胸器分開肋間隙，打開胸腔，暴露心臟。用酒精棉簽擋住肺葉，并用鑷子撕開心包膜，清楚暴露左冠狀動脈，心電示波器Ⅰ導聯出現ST段抬高，術后給予大鼠青霉素40 μ/只，同時給予呋塞米、利多卡因各1ml，腹腔注射。維持1周每天1次，以抗感染。術后4周作心臟無創性心功能檢測(EF≤50%)，入選30只。

2.3 分組及給藥方法

EF≤50%的大鼠入選后按隨機數字表法分為模型組、中藥治療組、西藥治療組3組，另設空白對照組8只。

2.4 給藥方法

中藥治療組給予參麥寧心合劑3.0 mg/kg·d，基礎西藥組給予培哚普利0.1 mg/kg·d、美托洛爾0.5 mg/kg·d。模型對照組給予生理鹽水1 ml/kg·d劑量灌胃，每天灌胃1次，持續灌胃14 d。各組大鼠在實驗期間均常規飼料、清潔水喂養。至灌胃結束，剩余大鼠總計38只。

2.5 3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉后，通過腹主動脈采血。室溫靜置2 h，用離心機以2000轉/分離心，30 min，取血清，-70℃冰箱保存，備用。

3 觀察指標及測定方法

3.1 一般基本觀察

觀察包括進食、水量、體質量、體溫、毛色、毛態、精神狀態、活動情況、尿量以及排便情況等。

3.2 心電圖變化

各組大鼠利用3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉后待大鼠麻醉后，置于檢查臺上，將探針分別插進大鼠左、右上肢和左下肢的皮下，用生物信號采集、處理系統描記大鼠心電圖并觀察心率。

3.3 心功能測定方法

3.5 %水合氯醛0.8 ml/100 g腹腔淺麻醉后行超聲心動圖測定，探頭頻率7.5～12.5 MHz，用二維超聲切面，選取標準左室乳頭肌短軸切面和左室長軸切面結合M型和多普勒超聲進行檢查，微機自動作出結果分析。

3.4 利用酶聯免疫吸附法測定大鼠血清腫瘤壞死因子(TNF-a)和白介素(IL-6)的水平。具體操作按說明書進行。

3.5 統計學方法

采用SPSS 19.0軟件進行統計分析，運用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

4 結果

本實驗動物60只，造模52只，造模過程中死亡4只，4周后復查心臟彩超，經檢測成功復制心衰模型30只，EF≤50%的隨機分為3組，每組10只。灌胃期間中藥治療組、西藥治療組及模型組各死亡2只共6只，至灌胃結束實際觀察到大鼠32只。

4.1 參麥寧心合劑對充血性心力衰竭大鼠LVEF、SV、HR的影響(見表1)

4.2 參麥寧心合劑對充血性心力衰竭大鼠血清TNF-α、IL-6的影響

5 討論

本實驗結果顯示，與空白組比較模型組大鼠血清TNF-α、IL-6水平顯著升高(P＜0.05)，差異有統計學意義;與模型組比較，西藥治療組以及中藥治療組大鼠血清 TNF-α、IL-6水平顯著降低(均 P＜0.05)，差異有統計學意義，說明參麥寧心合劑可有效降低心力衰竭大鼠血清TNF-α、IL-6濃度，增加心肌收縮力，抑制體內單核-巨噬細胞系統被激活以及炎性因子的釋放，抑制心室重塑，保護心肌細胞。

表1 參麥寧心干預后充血性心力衰竭大鼠LVEF、SV、HR的情況

充血性心力衰竭屬于中醫學“心悸”、“喘病”、“痰飲”等范疇，乃正氣不足、病久所致心失所養、氣陰兩虛、心脈瘀阻而發病，治宜益氣養陰、化痰祛瘀之法。參麥寧心合劑主要藥物由人參、麥冬、五味子、玉竹、茯苓、葶藶子、車前子、當歸、丹參、生龍牡、枳實、金銀花等組成，具有益氣養陰、活血利水之功效。方中人參、麥冬大補元氣、養陰生津，為君藥;五味子、玉竹、云苓益氣健脾、養陰清心安神，為臣藥;葶藶子、車前子、桑白皮宣肺平喘、利水消腫;當歸、丹參活血養血、化瘀行血;金銀花、黃連清解郁熱;生龍牡收斂固澀、鎮心安神;枳實破氣消積、調理氣機，共為佐使，共奏活血利水、益氣養陰、清郁除煩、邪去正安之效。諸藥合用養陰不助濕，利水不傷陰，補而不壅、苦而不燥。補氣養陰、活血利水則氣血充足、鼓動有力、瘀散水行、郁熱自消、心安神暢，諸證悉除。現代藥理研究表明，人參總皂甙可以抑制血栓素A2的生成，通過抗氧自由基和抗脂質過氧化作用而保護心肌細胞［2］。胡愛萍等［3］研究表明，丹參可明顯減少心肌細胞乳酸脫氫酶(LDH)的釋放，提示丹參可對抗缺氧對心肌細胞的損傷。葶藶子的水提取物具有顯著強心和增加冠脈流量的作用，且不增加心肌耗氧量。枳實的有效成分可以加強心肌收縮力，減慢心率，增加心輸出量、冠脈流量和腎血流量等，此外還有明顯的抗血栓、抗血小板聚集、降低紅細胞聚集的作用。

參考文獻:

［1］田穎，王江，李振魁，等.大鼠心肌梗死后心力衰竭模型的建立和評估［J］.心臟雜志，2006，18(4):404-405.

［2］李勤，等.參麥注射液的藥理作用及臨床應用［M］.醫學綜述，2005:1141-1142.

［3］胡愛萍，潘亞梁，葉治國.丹參對缺氧/復氧心肌的保護作用涉及百日咳毒素敏感的G蛋白［J］.中國現代應用藥學雜志，2004，21(5):358.

［4］王進.葶藶子的藥理研究及臨床新用［J］.中國中醫藥現代遠程教育，2008，6(1):39.

R285.5

:B

:1006-3250(2015)11-1396-02

2015-04-15

河南省科技廳基金項目(14207254)

△通訊作者:李慶海，Tel:13838396198，E-mail:lqh960918@ sina.com。