雌激素受體、肺耐藥蛋白和胸苷酸合成酶在乳腺癌的表達及臨床意義

張曉麗 李春雷 肖國鋒 李 澤 趙雪聰 (河北北方學院生命科研究中心，河北 張家口 075000)

據資料統計，乳腺癌發病率占全身各種惡性腫瘤的7%～10%，40～60歲之間、絕經期前后的婦女發病率較高，僅約1% ～2%的乳腺患者是男性〔1〕。近來研究表明，乳腺癌與雌激素受體、肺耐藥蛋白、胸苷酸合成酶的表達有很大的關系〔2～5〕。雖然目前乳腺癌診斷研究進展有很大提高，但是對如何準確評估乳腺癌的預后及為臨床治療方案提供可靠的依據仍不夠理想。因此，本實驗通過檢測乳腺癌組織中雌激素受體(ER)、肺耐藥蛋白(LRP)、胸苷酸合成酶(TS)的表達水平，分析它們在乳腺癌組織中表達水平與乳腺癌患者年齡、發生部位、病理組織學類型、是否發生淋巴結轉移的相關性，探討聯合檢測ER、LRP和TS對乳腺癌診斷、治療和判斷預后的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集河北北方學院附屬醫院和張家口市第一醫院外科自2003～2010年乳腺癌手術切除腫瘤標本130例，全部為女性，術前未做放化療，病理診斷明確。患者平均年齡50.5(30～79)歲，中位年齡44歲。病理分型:非浸潤性癌28例，浸潤性小葉癌31例，浸潤性導管癌71例。其中有淋巴結轉移的72例，無淋巴結轉移的58例。

1.2 標本處理 取10 cm×10 cm×3 cm的新鮮標本固定于10%中性甲醛內(24 h)，常規石蠟包埋，切片厚度4μm。裱片后37℃保存，待染。

1.3 免疫組化染色 兔抗LRP、ER多克隆抗體和TS單克隆抗體，SP免疫組織化學試劑盒和DAB顯色試劑盒(均購自北京中杉金橋生物技術有限公司)。染色程序嚴格按照試劑盒要求進行，陽性對照用已知的ER、LRP、TS陽性切片，陰性對照用PBS代替Ⅰ抗。

1.4 結果判斷 陽性物質呈棕黃色。ER和LRP陽性部位主要集中在細胞核，TS陽性部位在近胞膜處。根據整視野中陽性細胞占全部細胞的比例，以10個高倍鏡視野中陽性細胞＞15%者為陽性病例，否則為陰性病例。

1.5 統計學處理 采用SPSS14.0軟件行χ2檢驗，相關性分析采用四格聯列表法。

2 結果

LRP和TS在乳腺腺瘤中的陽性表達低于乳腺癌(P＜0.05)，ER在乳腺腺瘤和乳腺癌中的表達無顯著性差異(P＞0.05)。在非浸潤性乳腺癌內LRP、TS陽性率高于浸潤性乳腺癌，但是只有TS有顯著性差異(P＜0.05)，而ER陽性率低于浸潤性乳腺癌(P＜0.05)。有淋巴結轉移的患者LRP和TS表達率高于無淋巴結轉移患者(P＜0.05)，而ER的表達率與淋巴結是否轉移無明顯相關性(P＞0.05)。這3種基因表達與乳腺癌患者年齡和位置無明顯相關性(P＞0.05)。LRP、ER和TS的表達與乳腺癌生物學特性的關系見表1。

表1 LRP、ER和TS的陽性表達與乳腺癌生物學特征的關系〔n(%)〕

3 討論

乳腺癌的發生是遺傳與環境等多因素參與的復雜過程，目前主要認為大多數腫瘤的發生可能涉及不同的基因突變或轉錄表達異常等，原癌基因激活、抑癌基因失活、細胞凋亡及細胞周期調節基因失調等多基因參與的分子事件，啟動并促發了乳腺癌的發生。

目前乳腺癌的治療以手術治療為主，內分泌治療作為輔助治療。雌激素受體(ER)是存在于正常乳腺上皮細胞胞核內的甾體激素受體，調節乳腺細胞的增殖和分化，其分子上有激素結合區及DNA結合區〔5〕。乳腺細胞癌變后仍能保持其激素依賴性生長，臨床上激素依賴性乳腺癌約占全部乳腺癌的50%～60%〔6〕。隨著腫瘤細胞分化變差，受體表達降低，腫瘤對激素的依賴性生長隨之降低，導致激素對腫瘤生長的調控作用也降低。研究表明ER率高患者，對各種治療有效尤其是對內分泌治療敏感性高，可使腫塊縮小，癌細胞凋亡〔7〕。本實驗顯示ER陽性表達的乳腺癌術后5年生存率明顯高于陰性者，且術后復發和遠處轉移較少。檢測ER表達程度對判斷預后，指導內分泌治療具有一定的指導意義。

化學治療是乳腺癌術后常用的治療手段，但是對化學治療耐藥是導致乳腺癌治療失敗的主要原因之一。腫瘤多藥耐藥是多基因多途徑共同參與的結果。肺耐藥相關蛋白是1993年Scheper等〔8〕在無P-糖蛋白表達的多種藥物耐藥的肺癌細胞株中最先發現的一種與MDR有關的蛋白。研究表明LRP可能參與了藥物的核漿轉運過程，阻止藥物作用與其在核上的靶點，從而引起細胞對藥物的耐受〔9〕。本研究結果提示LRP與乳腺癌的發生有關系，可作為化療和預后的參考指標。

TS是葉酸代謝過程中的關鍵酶，是合成胸苷酸所必需的酶，在DNA合成與修復、細胞增殖與分化中有十分重要的作用。抑制此酶將阻止 DNA合成，即抑制細胞分裂，使細胞死亡。TS是臨床廣泛使用化療藥物的5-FU的主要作用靶點，通過與抗腫瘤藥物結合，形成復合物而解毒，TS的過表達使得FdUMP不能完全抑制 TS的作用，腫瘤細胞對5-FU產生耐藥〔10，11〕。本研究結果提示TS參與了乳腺癌的發生過程，在臨床上進行檢測可以提示乳腺癌的預后及耐藥情況。

綜上所述，ER、LRP和 TS和乳腺癌的發生、發展和轉移有關，說明乳腺癌的形成過程是多基因相互作用和共同調節的結果，因此，在乳腺癌組織中進行多基因聯合檢測，對乳腺癌的進展和轉移以及化療藥物的選擇和預后判斷都有重要意義。

1 南潤玲，尚培中，王鐵山.乳腺癌易感基因BRCA1的研究進展〔J〕.實用醫學雜志，2011;27(12):2284-6.

2 桑 晶，韓玉貞，張志強，等.三陰性乳腺癌組織耐藥蛋白GST-π和LRP及TopoⅡ表達的研究〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2011;18(7):521-3.

3 鄧燕明，梁劍苗，馮衛能，等.非小細胞肺癌組織TS表達與培美曲塞治療療效相關性的研究〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2012;19(21):1637-9.

4 Zhang KG，Qin CY，Wang HQ，et al.The effect of TRAIL on the expression of multidrug resistant genes MDR1，LRPand GST-π in drug-resistant gastric cancer cell SGC7901/VCR〔J〕.Hepatogastroenterology，2012;59(120):2672-6.

5 劉衛梅，劉建民，封 琳，等.ER、PR及PS2基因在乳腺癌中的表達及其臨床意義〔J〕.中國實用醫藥，2008;3(35):19-20.

6 Choi JE，Hur W，Jung CK，et al.Silence of 14-3-33 overexpression in hepatocellular carcinomainhibits tumor growth and enhances chemosensitiviy to cisdiammined dichloridoplatium〔J〕.Cancer Lett，2011;303(2):99-107.

7 Tewes M，Aktas B，Welt A，et al.Molecular profiling and predictive value of circulating tumor cells in patients with metastatic breast cancer:an option for monitoring response to breast cancer related therapies〔J〕.Breast Cancer Res Treat，2009;115(3):581-90.

8 Scheper RJ，Broxterman HJ，Scheffer GL，et al.Overexpression of a M(r)110，000 Vesicular protein in non-P-glycoprotein-mediated multidrug resistance〔J〕.Cancer Res，1993;53(7):1475-9.

9 Yasunami T，Wang YH，Tsuji K，et al.Multidrug resistance protein expression of adult T-cell leukemia/lymphoma〔J〕.Leuk Res，2007;31(4):465-70.

10 Wang X，Wang Y，Wang Y，et al.Association of thymidylate synthase gene 3'-untranslated region polymorphism with sensitivity of non-small cell lung cancer to pemetrexed treatment:TS gene polymorphism and pemetrexed sensitivity in NSCLC〔J〕.J Biomed Sci，2013;20(1):5.

11 Ohrling K，Karlberg M，Edler D，et al.A combined analysis of mismatch repair status and thymidylate synthase expression in stageⅡandⅢcolon cancer〔J〕.Clin Colorectal Cancer，2012;12(2):128-35.