參龍散結丸（濃縮丸）的質量標準研究

賴杰仁 楊毅生

（1九江市中醫醫院，江西 九江 332000；2江西省食品藥品檢驗所，江西省藥品與醫療器械質量工程技術研究中心，南昌 330029）

參龍散結丸（濃縮丸）系九江市中醫醫院自主研發的國家中醫藥管理局重點專科腫瘤科的特色醫院制劑，處方源于《太平惠民和劑局方》之四君子湯，依臨床實踐精心加減而成。全方由太子參、白術、陳皮、天龍、菝葜、夏枯草、靈芝等10余味中藥組成，具有益氣健脾，軟堅散結，清熱解毒等功效，臨床應用于證屬脾虛濕困型消化系統腫瘤10余年，使用安全，療效顯著。本文采用薄層色譜法（TLC）鑒別方中白術、菝葜和夏枯草3味藥材組分，建立處方中陳皮藥材有效成分橙皮苷的含量測定方法，為參龍散結丸的質量控制提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

HS-2060A超聲清洗器（天津恒高技術發展公司），2F-Ⅰ型三用紫外分析儀（上海顧村電子儀器廠），SHIMADZULC-2010AHT高效液相色譜儀，紫外可變波長檢測器UV-2550，METTLER TOLEDO十萬分之一天平。

1.2 試藥

白術對照藥材、菝葜對照藥材、夏枯草對照藥材、橙皮苷對照品（含量測定用，批號：110721-200512，含量為95.3%），均購自中國食品藥品檢定研究院；參龍散結丸（批號：20121001，20121002，20121003，20121004，20121005，20121101，20121102，20121103，20121104，20121105，九江市中醫醫院），甲醇（流動相）為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 定性鑒別

2.1 白術的薄層色譜鑒別

取本品10 g，研細，乙醚30 mL，浸漬過夜，超聲處理30 min，濾過，濾渣備用，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取白術對照藥材1 g同法制成對照藥材溶液。按處方配比，取除白術外各藥材，按制法工藝制備缺白術陰性樣品，按上述供試品溶液同法制成缺白術陰性樣品溶液。照《中國藥典》2010年版一部（附錄ⅣB）“薄層色譜法”試驗，吸取上述供試品溶液、缺白術陰性樣品溶液和對照藥材溶液各5～10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯（7∶3）為展開劑，預飽和 15 min 后展開，取出，晾干，噴以5%對二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。色譜斑點分離清晰，層析效果好。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的斑點。陰性對照樣品對鑒別無干擾。

2.2 菝葜的薄層色譜鑒別

取白術鑒別備用濾渣，揮干乙醚，加乙醇50 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液蒸干，加2 mol/L鹽酸溶液 30 mL，加熱回流 1 h，迅速冷卻，用乙醚振搖提取 2次，每次 20 mL，合并乙醚液，用水20 mL洗滌，乙醚液用鋪有適量無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液揮干乙醚，殘渣加乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取菝葜對照藥材5 g，同法制成對照藥材溶液。按處方配比，取除菝葜外各藥材，按制法工藝制備缺菝葜陰性樣品，按上述供試品溶液同法制成缺菝葜陰性樣品溶液。照《中國藥典》2010年版一部（附錄ⅣB）“薄層色譜法”試驗，吸取上述供試品溶液、缺菝葜陰性樣品溶液和對照品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。色譜斑點分離清晰，層析效果好。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的斑點。陰性對照樣品對鑒別無干擾。

2.3 夏枯草的薄層色譜鑒別

取白術鑒別備用濾渣，揮干乙醚，加正丁醇40 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取夏枯草對照藥材，同法制成對照藥材溶液。按處方配比，取除夏枯草外各藥材，按制法工藝制備缺夏枯草陰性樣品，按上述供試品溶液同法制成缺夏枯草陰性樣品溶液。照《中國藥典》2010年版一部（附錄ⅣB）“薄層色譜法”試驗，吸取上述供試品溶液、陰性對照樣品溶液和對照藥材溶液10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-甲酸（4∶4∶0.4）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 2%三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的斑點。陰性對照樣品對鑒別無干擾。

3 橙皮苷的含量測定

3.1 色譜條件與系統適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙酸-水（35∶4∶61）為流動相；柱溫為 30 ℃，流速為1.0 mL/min，檢測波長為283 nm。理論板數按橙皮苷峰計算應不低于2 000。

3.2 溶液的制備

3.2.1 對照品溶液 精密稱取橙皮苷對照品11.63 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品母液。精密量取對照品母液5 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

3.2.2 供試品溶液 本品適量，研細，取約2 g，精密稱定，置索式提取器中，加石油醚（60～ 90℃）85 mL，加熱回流 2～ 3 h，棄去石油醚，藥渣揮干，加甲醇85 mL，再加熱回流至提取液無色，放冷，濾過，濾液置100 mL量瓶中，用少量甲醇分數次洗滌容器，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

3.2.3 陰性樣品溶液 按處方配比，取除陳皮外各藥材，按制法工藝制備缺陳皮陰性樣品，同供試品溶液制備方法，制得缺陳皮陰性樣品溶液。

3.3 專屬性考察

分別精密吸取上述供試品溶液、對照品溶液和陰性樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按“3.1”項下色譜條件測定。結果顯示橙皮苷峰形良好，供試品溶液在與對照品溶液相應位置上色譜峰一致，且陰性樣品對測定無干擾，見圖1。

3.4 線性關系考察

分別精密吸取上述對照品溶液 2，5，10 μL，對照品母液 3，5 μL，注入液相色譜儀中，按“3.1”項下色譜條件測定對照品峰面積，以進樣量與峰面積進行回歸處理，回歸方程為：

r=0.999 9，橙皮苷對照品進樣量在0.044 34～1.108 5 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

3.5 精密度試驗

精密吸取對照品溶液 10 μL，按“3.1”項下色譜條件，重復進樣6次，測定橙皮苷峰面積，橙皮苷峰面積的RSD為0.48%。

3.6 重復性試驗

重量差異項下本品（批號：20121102）適量，研細，取約 2 g，共 6份，精密稱定，照“3.2.2”項下制備供試品溶液，按“3.1”項下色譜條件測定，橙皮苷的平均含量為1.320 8 mg/g，RSD為1.21%，方法重現性良好。

3.7 穩定性試驗

分別在 0，1，3，5，7，9，12，24 h，精密吸取照“3.2.2”項下制備的供試品（批號：20121102）溶液10 μL，按“3.1”項下色譜條件測定，橙皮苷峰面積值的RSD為0.61%，供試品溶液在24 h內穩定性良好。

3.8 加樣回收率試驗

重量差異項下本品（批號：20121102，橙皮苷含量為1.320 8 mg/g）適量，研細，取6份，每份約1 g，精密稱定，置于索式提取器中，分別精密加入含橙皮苷對照品的甲醇混合溶液（濃度：0.233 1 mg/mL）5 mL，照“3.2.2”項下制備供試品溶液，按“3.1”項下色譜條件測定，計算加樣回收率（表1）。樣品中橙皮苷平均回收率為96.88%，RSD值為1.49%。

3.9 耐用性試驗

圖1 HPLC圖

重量差異項下本品（批號：20121102，20121103），研細，取約 2 g，精密稱定，照“3.2.2”項下制備供試品溶液，分別用 A：YMC-Pack ODS-A C18（150 mm ×4.6 mm，5 μm）、B：Phenomenex C18（250 mm ×4.6 mm，5 μm）、C：Agilent C18（150 mm × 4.6 mm，5 μm）3 種品牌的色譜柱，按“3.1”項下色譜條件測定橙皮苷含量，RSD值低于1.0%（表2）。

表1 加樣回收率試驗

3.10 樣品測定

重量差異項下本品10批次，研細，各取約2 g，精密稱定，照“3.2.2”項下制備供試品溶液，按“3.1”項下色譜條件測定，計算橙皮苷含量（表3），橙皮苷含量在1.246 0～ 1.300 3 mg/g。根據表3結果，考慮藥材來源、配制操作等因素的差異影響，設以平均含量（1.266 2 mg/g）的 80%為參龍散結丸橙皮苷含量的指標。即規定：本品每1 g含陳皮以橙皮苷（C28H34O15）計，不得少于1.0 mg。

表2 不同色譜柱測定橙皮苷的含量

表3 參龍散結丸中橙皮苷含量

4 討論

4.1 薄層色譜定性鑒別實驗研究中，分別優化了供試品與對照品的點樣量，比較了不同廠家的預制薄層板與自制薄層板展開情況，考察了不同溫度、不同濕度條件下的展開情況，充分驗證了薄層色譜鑒別方法的耐用性。

4.2 橙皮苷含量測定方法學研究中，分別比較了以甲醇-乙酸-水（35∶4∶61）、甲醇-0.1%磷酸為流動相，對橙皮苷的分離情況及峰形影響，結果以甲醇-乙酸-水（35∶4∶61）為流動相的分離情況及峰形最佳，故采用其作為測定方法的流動相。

4.3 在含量測定供試品溶液的制備方法實驗中，分別考察了加熱回流、超聲提取和索氏回流提取等3種提取方式，結果顯示，樣品中橙皮苷以索氏提取最充分，故采用索氏提取；分別選用50%甲醇、95%乙醇、甲醇為提取溶劑，考察提取溶劑對測定結果的影響，結果表明，用甲醇作為提取溶劑最滿意，所以選擇甲醇為提取溶劑；分別選擇索氏回流提取2，3，5 h，考察提取時間對測定結果的影響，結果顯示，索氏提取回流3 h索氏管中提取液已近無色，故選定加熱回流至提取液無色。

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