肉仔雞大腸桿菌病病原的分離鑒定與藥敏試驗

肖玲

摘 要：本文對肉仔雞大腸桿菌病病原的分離鑒定與藥敏試驗進行了研究。通過對一例肉仔雞大腸桿菌病原菌進行分離培養、涂片鏡檢和細菌的生化反應試驗，并對分離菌進行了鑒定，確診肉仔雞大腸桿菌感染。對分離株大腸桿菌進行了藥敏試驗，結果表明：分離株對美克和康諾極度敏感，對優克特、大安和氟欣康藥物呈現中度敏感，對桿寧、安泰、奇諾和喘泰產生了耐藥性。

關鍵字：肉仔雞；大腸桿菌病；分離鑒定；藥敏試驗

中圖分類號：S858.31 文獻標識碼：B 文章編號：1673-1085（2015）08-0049-02

近年來隨著肉仔雞養殖業的不斷發展，大腸桿菌病在肉仔雞養殖場中不斷發生，給肉仔雞養殖業帶來巨大的經濟損失。通過對部分規模化養殖場和市場養殖戶所送檢的病料進行研究，得知該病的發病率逐漸上升，臨床抗生素的濫用導致的耐藥菌株的不斷產生，給預防和治療工作增加了難度，值得我們高度重視。

大腸桿菌病發病率如此高又難以防治是由其危害特點所決定的[1]：抗原構造復雜和血清型極多是其主要原因；傳染途徑多樣；發病季節不定性；耐藥現象普遍存在；病原混感性疾病不斷產生。

為了控制大腸桿菌病的流行，并防止耐藥菌株的產生，臨床用藥之前要先進行病原菌的分離鑒定和藥敏試驗，根據藥敏試驗的結果，篩選出對病原菌高度敏感的藥物應用于臨床，提高藥物的治療效果，控制大腸桿菌病的流行。

本文現對一例患有大腸桿菌病的肉仔雞進行了大腸桿菌的分離鑒定，并對其進行了藥敏試驗，現將結果報告如下：

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料與器材 病料：肉仔雞養殖場送檢的疑似患有大腸桿菌病的病雞。器材：普通濾紙，打孔器，帶棉塞的小瓶，高壓蒸汽滅菌鍋，干燥箱，潔凈箱，冰箱，天平，滅菌注射用水，顯微鏡，載玻片，酒精燈，吸水紙，平皿，接種環，注射器，離心管，鑷子，棉簽等。

1.1.2 培養基 普通瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、三糖鐵瓊脂斜面培養基、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、醋酸鉛瓊脂培養基、葡萄糖發酵管、乳糖發酵管、麥芽糖發酵管、甘露醇發酵管、蔗糖發酵管等。

1.1.3 染色液及試劑 革蘭氏染色液、甲基紅指示劑、V-P指示劑、吲哚試劑、香柏油、二甲苯。1.1.4 抗菌藥物 美克、優克特、桿寧、氟欣康、康諾、大安、安泰、奇諾、喘泰。

1.2 試驗方法

1.2.1 準備藥敏紙片，配制抗菌素藥液，制備藥敏紙片，分離培養病原菌。

1.2.2 革蘭氏染色鏡檢。用接種環取上述麥康凱培養基中的典型菌落與載玻片上壓印或涂抹成一薄層，自然干燥。染色鏡檢過程：結晶紫染色1～2min—水洗—碘液媒染1～2min—水洗—95%酒精脫色0.5～1min—水洗—石炭酸復紅染色2～3min—水洗—濾紙吸干—鏡檢[2]。

1.2.3 進行細菌生化試驗、糖發酵試驗、甲基紅試驗、吲哚試驗、V-P試驗、硫化氫試驗。

1.2.4 三糖鐵斜面接種試驗。用滅菌接種環從待檢菌純培養中挑取單個菌落，先涂布于培養基斜面，再穿刺底層，后放置37℃恒溫箱中培養24 h后，觀察斜面、底面的顏色變化、是否產氣以及硫化氫的產生情況。

1.2.5 藥敏試驗。用接種環取培養的菌落1～2個放入盛有lml滅菌生理鹽水的小離心管內。用滅菌注射器混均勻，以無菌棉簽蘸取菌液，在管壁上擠壓，除去多余液體后，均勻涂布于營養瓊脂平板表面，在室溫下干燥5min，待平板表面稍干即可放置藥敏紙片。用無菌鑷子取藥敏紙片平放于瓊脂平板表面，并輕壓使其緊貼上面，貼牢后不能再移動，并做好標記和記錄。紙片應貼得均勻，各紙片中心距離不小于2.5cm，紙片距平板內緣不少于15mm，一張位于中心。將粘貼好的平板于室溫下放l0min左右，再倒置于37℃培養箱中培養16～18h后，取出觀察結果。

2 結果與分析

2.1 病原菌分離結果 肉仔雞養殖場送檢的病料在麥康凱培養基上長出中等大小、邊緣整齊、稍隆起、表面光滑、濕潤、直徑1.5～2mm、粉紅色的圓形菌落。在營養瓊脂上形成圓形凸起、光滑、濕潤、半透明、近似灰白色的菌落，符合大腸桿菌的特征。

2.2 染色鏡檢結果 分離菌株經革蘭氏染色，鏡檢可見有粗短、兩端鈍圓的中等大小桿菌，多單個散在，個別成雙排列，無芽孢，為革蘭氏陰性，符合大腸桿菌的特征。

2.3 生化反應結果 結果見表1。

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2.4 藥敏試驗結果 結果見表2。

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3 結論

通過上述試驗得知，從該肉仔雞分離到的病原菌為大腸桿菌，分離菌株對美克和康諾表現極度敏感，對桿寧、安泰、奇諾和喘泰產生了耐藥性。

參考文獻：

[1] 褚玉璽，隋紹輝，王淑俄，等.雞大腸桿菌病的危害特點[J].四川畜牧獸醫，2001（28）：11.

[2] 姚火春，杜興念，方定一，等.獸醫微生物學實驗指導[M].北京：中國農業出版社，2006（2）：16-17.

[3] 姚火春，杜興念，方定一，等.獸醫微生物學實驗指導[M].北京：中國農業出版社.2006（2）：43-45.

[4] 付志新，梁建蘭.雞大腸桿菌病的治療試驗及藥敏試驗[J].黑龍江畜牧獸醫，2009（3）：90-91.□