蒙醫(yī)五味甘露浴對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清白介素的影響

陳英松　水玲　烏云格日樂　吳七柱

【摘 要】 目的：觀察蒙醫(yī)五味甘露浴對佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）大鼠的血清IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-a含量的影響。方法：將40只SD雄性大鼠隨機(jī)分為四組，每組10只。模型組、來氟米特組、五味甘露藥浴組三組大鼠進(jìn)行造模，無菌條件下在右后足趾部注射01ml的CFA（完全弗氏佐劑）致炎，正常對照組注射同劑量的生理鹽水。造模后第3d開始對五味甘露藥浴組進(jìn)行1次/d，30min/次，連續(xù)藥浴治療15d，溫度為40±2℃。正常對照組和模型組做溫水浴對照，來氟米特組以017g/kg劑量灌胃來氟米特治療15d。采用ELISA法檢測大鼠血清白介素含量。結(jié)果：模型組與正常對照組相比血清IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-a的含量明顯升高（P<005），來氟米特組和五味甘露浴組與模型組相比血清IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-a的含量明顯降低（P<005），蒙醫(yī)五味甘露藥浴組與來氟米特組比血清白介素顯著降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。結(jié)論：蒙醫(yī)五味甘露藥浴可通過調(diào)節(jié)AA大鼠血清白介素IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-a的含量，起到免疫調(diào)節(jié)作用。

【關(guān)鍵詞】 蒙醫(yī)；五味甘露浴；AA大鼠；白介素

【中圖分類號】R29 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2015）13-0001-02

蒙醫(yī)在千百年的應(yīng)用形成了簡、便、驗(yàn)、廉且療效獨(dú)特等優(yōu)點(diǎn)。五味甘露浴是以小白蒿、水柏枝、麻黃、杜鵑葉、刺柏等五種藥物組成，臨床應(yīng)用治療RA等風(fēng)濕病方面具有一定的療效。本研究采用CFA誘導(dǎo)的佐劑性關(guān)節(jié)炎模型大鼠，檢測治療前后血清IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-a的含量的影響，探討蒙醫(yī)五味甘露浴的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。

1 材料

11 實(shí)驗(yàn)動物 清潔級雄性SD大鼠40只，4～6周齡，體重180～200g，由北京實(shí)驗(yàn)動物科技有限公司提供，適應(yīng)性飼養(yǎng)3天，自由飲水和攝食。

12 藥物與試劑 完全弗氏佐劑（CFA，Sigma 公司產(chǎn)品），IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-a ELISA檢測試劑盒，（批號分別為：DZE30419、DZE30648、DZE30646、DZE30635，北京新亞太生物科技有限公司）；五味甘露浴劑（批號：720121110，內(nèi)蒙古自治區(qū)中蒙醫(yī)醫(yī)院中心制劑室提供），來氟米特（國藥準(zhǔn)字號：H20000550，蘇州長征一欣凱制藥有限公司）。

13 儀器 80-2式離心機(jī)（金壇市化城敏科實(shí)驗(yàn)儀器廠）；特制浴療器等。

2 方法

21 動物分組與造模 將40只SD大鼠，隨機(jī)分為正常對照組、模型組、來氟米特組和五味甘露浴組，每組10只。模型組、來氟米特組、五味甘露浴組大鼠進(jìn)行造模。無菌條件下在右后足趾注射01ml的CFA（內(nèi)含01℅滅活結(jié)核桿菌）致炎[1]，正常對照組注射同劑量的09%的生理鹽水，之后針眼處涂抹紫藥水。

22 給藥方法 正常對照組在第3d開始進(jìn)行溫水浴治療，1次/d，30min/次，連續(xù)治療15d。水浴方法為在50×30×20cm的半透明塑料容器中加入溫度為40±2℃的清潔飲用水1000ml，將大鼠的四肢和尾部浸泡在溫水中，治療結(jié)束后用清潔毛巾擦拭干凈后放入鼠籠中。模型組在造模之后的浴療方法同正常對照組。來氟米特組在造模后第3d開始灌胃來氟米特，017g/kg的給藥量1次/d，連續(xù)灌胃15d。藥浴組在造模后第3d開始進(jìn)行溫五味甘露浴（334%）治療，浸泡方法同正常對照組。

23 取材、檢測方法 末次治療后24h，用烏拉坦腹腔麻醉大鼠，切開腹腔用5ml注射器抽取約4-5ml腹主動脈血，注入管中，靜放1-2h后，4000 r/min離心10 min，取上清液。采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測大鼠血清白介素IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-a含量，按試劑盒說明操作。

24 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 130統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間單因素方差分析法，P<005表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

模型組與正常對照組比血清白介素IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-a的含量明顯升高（P<005），來氟米特組和五味甘露浴組與模型組比血清白介素含量明顯降低（P<005），蒙醫(yī)五味甘露浴組與來氟米特組比血清白介素顯著降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。

4 討論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthriti，RA）是以損害滑膜、軟骨和骨的一種慢性、炎癥性自身免疫性疾病。大鼠佐劑性關(guān)節(jié)（Adjuvant arthritis，AA）模型在臨床表現(xiàn)、病理學(xué)、免疫學(xué)改變和病理機(jī)制等與RA具有許多相似特征，是研究RA病理機(jī)制和評價RA治療藥物較理想的動物模型[2]。蒙醫(yī)五味甘露浴療效確切，臨床應(yīng)用廣泛，在白脈病、腰腿痛、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、強(qiáng)直性脊柱炎、胃病、皮膚病、骨關(guān)節(jié)病等具有較好的作用。在作用機(jī)制研究也取得了一定進(jìn)展[3]，是治療RA的藥浴代表療法之一。

CFA誘導(dǎo)的動物模型是一種免疫性關(guān)節(jié)炎模型，主要表現(xiàn)為多發(fā)性關(guān)節(jié)炎；組織學(xué)特點(diǎn)包括關(guān)節(jié)局部炎癥細(xì)胞的大量浸潤，增生性滑膜炎，關(guān)節(jié)軟骨及骨組織的破壞；在免疫功能方面不僅在細(xì)胞免疫有表現(xiàn)，而且在體液免疫也有一定的體現(xiàn)。IL-1β具有多種生物學(xué)特性，是免疫反應(yīng)、炎癥及組織損傷的主要介質(zhì)之一，可刺激滑膜細(xì)胞生成，活化滑膜細(xì)胞及破骨細(xì)胞產(chǎn)生金屬蛋白酶和膠原酶，從而造成骨與關(guān)節(jié)的破壞。TNF-a是RA發(fā)病機(jī)制的促炎性因子，參與整個RA的病變過程[4]。IL-6作用于IL-1β、TNF-a不同，它不能直接刺激骨膜成纖維細(xì)胞和軟骨細(xì)胞產(chǎn)生金屬蛋白和膠原酶，但能誘導(dǎo)肝細(xì)胞分泌急性期蛋白，并誘導(dǎo)其他細(xì)胞因子如IL-1β、IL-2、TNF-a的產(chǎn)生進(jìn)而發(fā)揮致病作用。研究發(fā)現(xiàn)，IL-1β和TNF-a在RA患者外周血和滑膜液中均增高，可激活血管內(nèi)皮細(xì)胞，增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞中黏附分子的表達(dá)，使小分子炎癥介質(zhì)增強(qiáng)，導(dǎo)致骨及軟骨的破壞[5]。

蒙醫(yī)理論認(rèn)為RA病屬“托來”范疇，其主要致病因素是“黃水”，“黃水”與血交搏注關(guān)節(jié)，導(dǎo)致局部氣血運(yùn)行受阻所致。強(qiáng)勞內(nèi)傷，關(guān)節(jié)扭傷，飲食過多，酗酒，汗出受風(fēng)寒，中潮濕之毒等，均為誘發(fā)本病之常見因素。其臨床表現(xiàn)為起病急驟，多在夜半突感關(guān)節(jié)劇痛而驚醒，伴以發(fā)熱等全身癥狀。四肢關(guān)節(jié)顯著紅腫熱痛，患部皮膚偶見紫斑，當(dāng)疾病進(jìn)展時關(guān)節(jié)逐漸肥大，活動漸受限制，其程度隨發(fā)作次數(shù)而增加，最后導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形僵硬。受累關(guān)節(jié)以跖趾關(guān)節(jié)最多，其次為踝、手、腕、膝、肘及足部等其他關(guān)節(jié)，肩及髖關(guān)節(jié)則甚少波及。治宜以燥黃水，舒筋為原則[6]。

蒙醫(yī)五味甘露浴是利用機(jī)械作用（包括浮力作用和壓力作用兩個方面）、溫度作用、化學(xué)作用和蒙醫(yī)五味甘露浴的綜合調(diào)整等協(xié)同作用使人體的外部浸漬，以達(dá)到防治疾病的一種療法，是蒙醫(yī)臨床外治法重要組成部分[7]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蒙醫(yī)五味甘露浴具有較好的免疫調(diào)節(jié)作用，能夠明顯降低CFA誘導(dǎo)的佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-a的含量。提示蒙醫(yī)五味甘露浴通過調(diào)節(jié)AA大鼠血中IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-a的含量，抑制AA大鼠骨與軟骨的破壞，減輕滑膜炎癥，是否有其它因子參與調(diào)節(jié)還有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳柏松，徐玉東，鐘淑琦，等.大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型的建立與評價[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2005，12（6）：489-491.

[2] 李培培，解國雄，宋珊珊，等.大鼠佐劑性關(guān)節(jié)模型表現(xiàn)特征及評價指標(biāo)[J].中國免疫學(xué)雜志，2012，28（5）：453.

[3] 宇妥·元丹貢布.四部醫(yī)典[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1987：298.

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[5] 張良，白人驍.細(xì)胞因子與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療新進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2008，5（11）：27-29.

[6] 蒙古學(xué)百科全書編輯科員會《醫(yī)學(xué)卷》編輯委員會編.蒙古學(xué)百科全書（醫(yī)學(xué)卷）[M].呼和浩特：內(nèi)蒙古人民出版社，2002：724-725.

[7] 陳英松.蒙醫(yī)學(xué)適宜技術(shù)及應(yīng)用[M].呼和浩特：內(nèi)蒙古大學(xué)出版社，2011：93.

（收稿日期：20150416）