蘿卜硫苷對小鼠遲發型變態反應影響的研究

吳柱 魏丹丹 林海鳴

摘要：目的：考察蘿卜硫苷對小鼠遲發型變態反應的影響，為蘿卜硫苷的開發應用提供參考依據。方法：以二硝基氟苯（DNFB）誘導分組小鼠接觸性皮炎以及誘導耳腫脹，測量誘導相和效應相小鼠的耳廓厚度，通過測量數據來評價蘿卜硫苷提高機體免疫效應 ；結果：隨著蘿卜硫苷劑量的增大，能明顯促進致敏小鼠耳廓腫脹，實驗結果具有統計學意義。結論：蘿卜硫苷能一定程度促進T細胞增殖，具有提高機體免疫的作用。

關鍵詞：蘿卜硫苷； 遲發型變態反應；影響

【中圖分類號】R954 【文獻標識碼】A 【文章編號】1672-8602（2015）06-0247-02

蘿卜硫苷（Glucoraphanin）是硫代葡萄糖苷的一種，其降解產物為異硫代氰酸鹽[1]，硫代葡萄糖苷及其降解產物具有廣泛的生物活性，可以抑制癌細胞繁殖、保護DNA免收損傷、防止抗癌細胞轉移[2][3]，還可以抑制細菌和微生物的生長。為了探討蘿卜硫苷對機體的細胞免疫調節功效，本實驗選用不同劑量的蘿卜硫苷進行動物實驗研究。

1材料

1.1實驗動物： KM小鼠，SPF級，雄性，小鼠體質量18—22g，長沙市天勤生物技術有限公司提供，許可證號：SCXK（湘）2014-0011。

1.2 試劑及藥品：二硝基氟苯（DNFB） ，CMC，綠元膠囊，蘿卜硫苷（九江華漢生物科技有限公司），丙酮，水合氯醛，松香，石蠟

1.3 儀器：電子天平（AL204，梅特勒），青霉素小瓶，250微升注射器，打孔器，凈化工作臺，培養箱

2試驗方法

2. 1 動物分組

KM小鼠，常規飼養，自由采食和飲水，每日光照時間 1 2 h，適應環境1周后，經臨床觀察健康者進行分組。隨機分為4組：模型組、陽性藥組、蘿卜硫苷高低劑量組，每組小鼠各12只 。

2.2 DNFB溶液配制

DNFB應新鮮配制。如欲配制1% DNFB 5ml，可稱取DNFB50 mg，置清潔干燥的青霉素小瓶中，將預先配置好的5ml丙酮-生理鹽水溶液（丙酮：生理鹽水=1：1），倒入小瓶，蓋好并用膠布密封，混勻后，用250微升注射器通過瓶蓋取用。

2. 3 給藥方法[4][5]

模型組包括致敏（背部涂抹DNFB）和誘發（少量DNFB涂耳）步驟，采用灌胃方式給藥，給予藥物用CMC溶液替代；陽性藥組包括致敏（背部涂抹DNFB）和誘發（少量DNFB涂耳）步驟，采用灌胃方式給予綠元膠囊保健品800mg/kg；蘿卜硫苷高低劑量組包括致敏（背部涂抹DNFB）和誘發（少量DNFB涂耳）步驟，采用灌胃方式給予蘿卜硫苷（300、600 mg/kg），連續6天給藥。

2.4 遲發型變態反應

選用KM小鼠，采用5%水合氯醛（10ml/kg）進行麻醉，采用松香和石蠟對以上各組小鼠背部進行物理除毛，范圍約為3cm*3cm，并將1% DNFB丙酮-生理鹽水溶液50微升均勻涂抹致敏。

2.5 TH反應的產生與測定

背部致敏第5天后將1%DNFB溶液10微升均勻涂抹于小鼠右耳（兩面）進行攻擊。攻擊24 h，頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下9mm的耳片，稱重。以左右耳片重量差為腫脹度。

2.6 實驗數據統計

采用spss11.0軟件對實驗數據進行統計分析。

3.試驗結果

結果表明，蘿卜硫苷各劑量組小鼠右耳經1%DNFB丙酮溶液攻擊后明顯腫脹，重量高于左耳，其中，高劑量組左右耳重量的差值明顯高于對照組，且差異有統計學意義（ 見表1，圖1 ） 。

4.結論

本研究通過用蘿卜硫苷遲發型變態反應試驗對小鼠免疫作用的影響進行了初步探究。結果表明，蘿卜硫苷的兩個劑量組均能增加小鼠的腫脹程度，且隨著劑量的增加，其功能增強，表明蘿卜硫苷能在一定程度上促進T細胞增殖，具有提高機體免疫的作用。

參考文獻

[1] 修麗麗，鈕昆亮.十字花科植物中的硫代葡萄糖苷及其降解產物[J].江科技學院學報，2004，16（3）：118-121

[2] 李志邈，曹家樹.蔬菜的抗癌特性[J].北方園藝，2001，4：4-6.

[3] Higdon J V，Delage B，Williams D E，et al.Cruciferous vegetables and human cancerrisk：epidemiologic evidence and mechanistic basis[J].pharmacol Res，2007，55（3）：224-236.

[4] 呂方軍 ，許一平 ，葉國華 ，等.萊陽沙參莖葉提取物對小鼠遲發型變態反應的影響[J].時珍國醫國藥，2012，23（5）：1115-1116

[5] 薛明， 胡建華.兩參芪膠囊對小鼠免疫功能影響的實驗研究[J].江蘇中醫藥，2011，43（12）：78-79