影響雜交蘭組培快繁各個階段主要因素的研究

范俊強 張善信 鄭貴朝

摘 要：該試驗以3個雜交蘭品種為試驗對象，對影響雜交蘭組培快繁各個階段的主要因素進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：基因型是影響雜交蘭組培快繁的主要因素，其次是激素組合。通過研究影響雜交蘭組培快繁的因素，為雜交蘭育種和規(guī)?；a(chǎn)提供技術(shù)支持。

關(guān)鍵詞：雜交蘭;組培快繁;階段;因素

中圖分類號 S68文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A ?文章編號 1007-7731（2015）13-28-02

雜交蘭在我國是指大花蕙蘭與國蘭之間經(jīng)過雜交培育出的蘭花新品種[1]。它既具有大花蕙蘭的花大、色艷、花期長的優(yōu)點，又具有國蘭的幽香、典雅和韻味，既滿足歐美消費者的消費需求，又符合中國、日本、韓國等亞洲人的審美情趣;更重要的是，雜交蘭克服了組培快繁和新品種選育等核心技術(shù)難題，能進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，能夠快速生產(chǎn)，滿足市場需求。因此雜交蘭自投入市場以來，受到歐、美及日本、韓國、中國等亞洲消費者的普遍青睞，形成量價齊升的態(tài)勢，是市場前景非常廣闊的一個新興年宵花品種。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 雜交蘭品種綠寶石、桃花、紫元素3個品種當(dāng)年生新芽。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體消毒 選擇生長健壯、無病蟲害的母株，控制澆水14d，將當(dāng)年生新芽從母株基部小心切下，去除外層葉片，并將葉片從頂部切斷，保留5cm左右長度。用飽和洗衣粉溶液浸泡30min左右，再剝?nèi)ヒ粚尤~片，用流水清洗30min左右。將外植體拿到超凈工作臺上，用刀片將外植體截斷從頂端截短至2cm左右，從基部將黑色部分切除。先放到70%酒精中浸泡5s，再轉(zhuǎn)到含0.1%升汞溶液中浸泡5～10min，然后用無菌水清洗4～5次，用消毒刀剝?nèi)ニ腥~片，從基部將短縮莖切成1cm大小備用。

1.2.2 原球莖誘導(dǎo) 將消毒后的外植體正向插入原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基為以MS為基本培養(yǎng)基，激素組合分別為①6-BA1.0mg/L+NAA0mg/L，②6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L，③6-BA0mg/L+NAA0.2mg/L。先放在暗光下培養(yǎng)1～2d，然后轉(zhuǎn)到光照下培養(yǎng)30～40d誘導(dǎo)原球莖，培養(yǎng)條件為光照強度40～60lx，光照時間16h。

1.2.3 原球莖增殖與分化 將原球莖轉(zhuǎn)到繼代培養(yǎng)基上繼代增殖與分化，繼代周期為40～50d。增殖分化以MS為基本培養(yǎng)基，激素組合分別為①6～BA2.0mg/L+NAA0mg/L，②6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L，③6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，④6-BA0mg/L+NAA0.1mg/L。先在暗光下放置1～2d，再轉(zhuǎn)到光照下培養(yǎng)。培養(yǎng)條件同原球莖誘導(dǎo)。

1.2.4 生根 將長度4cm以上，生長健壯的單芽切下，轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根。生根培養(yǎng)基為1/2MS，附加①NAA0.5mg/L+IBA0.5mg/L，②NAA1.0mg/L+IBA1.0mg/L③NAA0.5mg/L+IBA0mg/L，活性炭2g/L，蔗糖20g/L，培養(yǎng)條件同上。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒時間對外植體滅菌效果的影響 外植體消毒后7d，在部分外植體表面和與培養(yǎng)基接觸部分長出細(xì)菌，部分外植體表面白化、失綠，表明消毒過久，外植體死亡。統(tǒng)計各品種在不同消毒時間下的消毒成功率，如表1所示。隨著消毒時間的增加，外植體污染率逐漸降低，但因消毒造成白化、死亡的外植體數(shù)量也在增加。對于此3個品種，消毒8min時，外植體消毒效果最佳。

表1 不同消毒時間對外植體滅菌效果的影響

[品種＼&消毒時間（min）＼&外植體數(shù)（個）＼&污染數(shù)（個）＼&成功

個數(shù)＼&消毒成功率（%）＼&紅美人＼&5＼&13＼&6＼&7＼&53.85＼&＼&8＼&18＼&5＼&13＼&72.22＼&＼&10＼&16＼&3＼&11＼&68.75＼&綠寶石＼&5＼&15＼&7＼&8＼&53.33＼&＼&8＼&18＼&5＼&13＼&72.22＼&＼&10＼&20＼&3＼&14＼&70.00＼&桃花＼&5＼&12＼&4＼&8＼&66.67＼&＼&8＼&16＼&3＼&13＼&81.25＼&＼&10＼&17＼&3＼&12＼&70.59＼&]

2.2 不同培養(yǎng)基對雜交蘭原球莖誘導(dǎo)的影響 外植體在原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)25d左右，陸續(xù)有外植體誘導(dǎo)出原球莖，其中在②號培養(yǎng)基上誘導(dǎo)率最高，3個品種中‘紅美人原球莖誘導(dǎo)率最高，綠寶石次之，桃花誘導(dǎo)率最低。

圖1不同培養(yǎng)基上雜交蘭原球莖誘導(dǎo)率

2.3 不同激素水平對雜交蘭原球莖增殖與分化的影響 原球莖誘導(dǎo)出來50d左右時，將原球莖切下，大的原球莖從中間切割成0.5cm直徑的小塊，轉(zhuǎn)接到原球莖增殖與分化培養(yǎng)基上，結(jié)果如表2所示。3個品種在②、③兩個培養(yǎng)基上增殖率最高，40～50d增殖率可達(dá)3.0左右;其中桃花增殖率最高，可達(dá)3.3，紅美人增殖率次之，綠寶石增殖率最低。原球莖增殖、分化的過程中，有原球莖分化出芽，其中①號培養(yǎng)基上芽分化率最高，3個品種分化率均比較高，分化率可達(dá)90%以上（表2）。

表2 不同激素水平對雜交蘭原球莖增殖與分化的影響

[品種＼&培養(yǎng)基＼&增殖倍數(shù)＼&分化率（%）＼&紅美人＼&①＼&2.1＼&92.3＼&＼&②＼&2.7＼&91.8＼&＼&③＼&3.2＼&87.6＼&＼&④＼&1.5＼&12.5＼&綠寶石＼&①＼&2.5＼&94.2＼&＼&②＼&2.5＼&93.4＼&＼&③＼&2.4＼&84.5＼&＼&④＼&1.3＼&11.2＼&桃花＼&①＼&1.9＼&95.1＼&＼&②＼&3.2＼&94.7＼&＼&③＼&3.3＼&85.2＼&＼&④＼&1.4＼&13.7＼&]

2.4 不同培養(yǎng)基配方對雜交蘭生根的影響 當(dāng)芽生長到4～5cm長時，將芽從基部切下，轉(zhuǎn)接到生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，結(jié)果如表3所示。綠寶石生根最容易，大約20d左右即有新根長出，30d左右時有根3條以上，根長超過3cm，如圖2所示。其次是紅美人，30d時大部分長出新根，50d左右新根數(shù)超過3條、根長可達(dá)3cm左右。桃花最難誘導(dǎo)生根，50d左右時，只有少部分芽發(fā)出新根，且只有1～2條根，長度僅1cm左右。

表3 不同培養(yǎng)基配方對雜交蘭生根的影響

[品種＼&培養(yǎng)基＼&1個月根長（cm）＼&生根數(shù)（條）＼&生根率（%）＼&紅美人＼&①＼&4.5＼&3.6＼&96.2＼&＼&②＼&4.3＼&4.2＼&100＼&＼&③＼&3.9＼&3.2＼&89.7＼&綠寶石＼&①＼&5.1＼&4.5＼&100＼&＼&②＼&5.3＼&5.6＼&100＼&＼&③＼&5.2＼&4.4＼&95.3＼&桃花＼&①＼&1.1＼&1.2＼&12.5＼&＼&②＼&0.7＼&1.2＼&13.3＼&＼&③＼&0.3＼&1.1＼&7.2＼&]

圖2 紅美人生根狀況

3 結(jié)論與討論

雜交蘭作為大花蕙蘭與國蘭雜交后代，不同雜交蘭品種的遺傳特性有很大差異，其組培快繁的難易程度也有所不同，尤其表現(xiàn)在生根率上有較大差異。其中綠寶石和紅美人品種很容易生根，這與秦麗鳳，石貴玉[2]的結(jié)果相符，而‘桃花品種難以生根，這與黃康康等[3]所示品種難以生根結(jié)果相符。這可能與雜交蘭品種的基因型有關(guān)，說明基因型是決定雜交蘭品種組培快繁的關(guān)鍵因素。

從本試驗3個品種來看，外植體最佳處理時間為8min，原球莖最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為②號，最佳增殖培養(yǎng)基為②、③號，最佳分化培養(yǎng)基為③號，最佳生根培養(yǎng)基為②號。

參考文獻(xiàn)

[1]陳心啟，吉占和.中國蘭花全書[M].北京：中國林業(yè)出版社，1998：18-69.

[2]秦麗鳳，石貴玉.外源激素對雜交蘭組培快繁的效應(yīng)[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報，2013，44（9）：1435-1438.

[3]黃康康，李春楠，楊守雷.不同外源激素對雜交蘭分株繁殖生根的影響[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013（7）：819-820.

（責(zé)編：張長青）