復方利多卡因乳膏體外透皮研究

賀亞靜 ，武學鑫 ，周 潔 ，沈 騰 ，賀吉香

(1.山東中醫藥大學藥學院，山東 濟南 250355;2.復旦大學藥學院藥劑學教研室，上海 201203;3.山東宏濟堂制藥集團有限公司，山東 濟南 250355)

復方利多卡因乳膏是由2.5%利多卡因和2.5%丙胺卡因通過形成低共熔混合物而制成的水包油型乳膏，是臨床常用的皮膚表面局部麻醉制劑，常用于靜脈穿刺、靜脈插管和各種外科小手術操作的鎮痛，尤其適用于兒童[1－3]。藥代動力學研究顯示，復方利多卡因乳膏涂于無損的皮膚時，有5%～10%的利多卡因和丙胺卡因被吸收，最高血漿藥物濃度在中毒濃度以下，這表明該藥在一定程度上能透皮進入血液循環。目前關于復方利多卡因乳膏的離體透皮規律少見報道[4]。因此，筆者采用離體大鼠腹部皮膚和改良Franz擴散池進行體外透皮試驗，研究復方利多卡因乳膏的透皮規律，并與國外已上市產品(商品名為Emla)比較體外透皮規律的一致性。現報道如下。

1 儀器、試藥與動物

Agilent－1260型高效液相色譜(HPLC)系統(美國Agilent公司);BT25S型分析天平(賽多利斯科學儀器＜北京＞有限公司);H1650型高速離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司);PB－10型pH計(賽多利斯科學儀器＜北京＞有限公司);TK－20A型透皮擴散試驗儀(上海鍇凱科技貿易有限公司)。復方利多卡因乳膏(陜西興邦藥業有限公司，批號為120601，規格為每克膏體含利多卡因25 mg與丙胺卡因25 mg);Emla(英國阿斯利康公司，批號為PC5722A1，規格為每克膏體含利多卡因25 mg與丙胺卡因25 mg);空白復方利多卡因乳膏(批號為120601，陜西興邦藥業有限公司);利多卡因對照品(批號為100342－201003，含量為99.9%，中國藥品生物制品檢定所);鹽酸丙胺卡因對照品(批號為P2939060，歐洲藥典標準品);水(Millipore超純水)，甲醇(色譜級，Merk公司)，磷酸二氫銨(批號為F20110923，國藥集團化學試劑有限公司)。SD大鼠，雄性，體重250 g(上海西普爾－必凱實驗動物有限公司，動物合格證號為SYXK＜滬2011－0099＞)。

2 方法與結果

2.1 含量測定[高效液相色譜(HPLC)法]

2.1.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 －0.5%磷酸二氫銨(70 ∶30，pH=7.0);流速:1 mL/min;檢測波長:220 nm;柱溫:35℃;進樣量:20 μL;理論板數不低于5 000。

2.1.2 溶液制備

分別精密稱取利多卡因7.0 mg和鹽酸丙胺卡因7.0 mg(相當于丙胺卡因6.01 mg)，置50 mL容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，得質量濃度為140 μg/mL的貯備液。

2.1.3 方法學考察

專屬性試驗:取空白復方利多卡因乳膏，按2.2.2項下方法試驗，8 h后取出接受液，作為陰性對照品溶液;取接受液的陰性對照品溶液A、供試品溶液B和標準溶液C(利多卡因5.6 μg/mL和丙胺卡因4.8μg/mL)，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見圖1。利多卡因的保留時間約為6.2 min，丙胺卡因約為9.8 min，表明接受液中的雜質對測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察:精密量取貯備液 0.04，0.10，0.20，1.00，2.00，3.00 mL，置25 mL容量瓶中，用流動相稀釋并定容至刻度，得系列質量濃度的利多卡因和丙胺卡因混合標準溶液。將上述標準溶液注入HPLC儀，以峰面積(A)與標準溶液質量濃度(C)進行線性回歸，回歸方程利多卡因為 C=0.014 1A+0.004 1(r=0.999 99)，丙胺卡因為 C=0.018 4 A+0.000 6(r=0.999 98)。結果表明，利多卡因和丙胺卡因質量濃度分別在 0.224 ～16.8 μg/mL 和0.192 ～14.414 μg/mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

回收試驗:取空白復方利多卡因乳膏，均勻涂抹于離體皮膚上，按2.2.2項下方法試驗，8 h后取出全部接受液，作為空白透皮接受液;精密吸取貯備液 0.1，1，3 mL，置 10 mL容量瓶中，用空白透皮接受液稀釋至刻度。每個濃度平行制備6份，過濾，取續濾液測定。結果低、中、高質量濃度的平均回收率利多卡因分別為97.20% ，99.03% ，98.36%(n=6)，丙胺卡因分別為 94.69% ，99.13%，97.82% ，RSD 均小于 3%(n=6)。

最低定量限及最低檢測限確定:以信噪比3∶1時作為最低檢測限，信噪比10∶1時作為最低定量限。結果利多卡因和丙胺卡因的最低檢測限為9.8 ng，最低定量限為26.4 ng。

精密度試驗:取回收試驗中的供試品溶液，按擬訂色譜進樣，分別連續進樣6次，結果利多卡因和丙胺卡因的 RSD分別為0.12%和0.55%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取回收試驗中的供試品溶液，于 0，1，2，4，8，12，24，48 h時進樣，記錄峰面積。結果低、中、高質量濃度的 RSD值，利多卡因分別為 0.817% ，0.212% 和 0.227%(n=8)，丙胺卡因分別為 1.134% ，0.656% ，0.507%(n=8)，表明供試品溶液在48 h內穩定。

2.2 體外透皮試驗

2.2.1 大鼠腹部皮膚處理

取SD大鼠，水合氯醛麻醉，使用電動剃毛刀和眼科剪去除腹部毛發，將大鼠斷頸處死，剝離腹部皮膚，去除皮下組織，用生理鹽水沖洗，于－20℃條件下保存，備用。

2.2.2 體外透皮試驗

采用改良Franz擴散池進行體外透皮試驗。離體皮膚固定于供給池與接受池之間，皮膚的角質層面向供給池，有效涂藥面積約 3.14 cm2，以約 17 mL的水為接受液，將擴散池置于(37±0.5)℃的恒溫水浴中，開動電磁攪拌，轉速為200 r/min。分別于0.5，1，2，3，4，5，6，8 h 取接受液 10 mL，并立即補充等量、等溫度的接受液。接受液經0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液進行HPLC測定。

2.3 試驗結果

供試藥和對照藥于不同時間點所測定的利多卡因和丙胺卡因的累積透皮量(Q)見圖2。供試藥和對照藥中利多卡因8 h累積透皮量分別為2.11 mg和2.04 mg;丙胺卡因8 h累積透皮量分別為 2.41 mg和 2.38 mg。經 t檢驗，均無顯著性差異(P ＞0.05)。將達穩態的累積透皮量與時間 t進行線性回歸，得線性方程和流通量(J)，結果見表1。可見，各線性方程的相關系數良好，復方利多卡因乳膏透皮行為符合零級動力學方程。供試藥和對照藥中利多卡因和丙胺卡因的流通量經 t檢驗，無顯著性差異(P＞0.05)。

圖2 供試藥和對照藥不同時間的累積透皮量

表1 利多卡因和丙胺卡因透皮動力學方程擬合結果

3 討論

利多卡因和丙胺卡因的常用檢測波長位于210～265 nm，筆者用流動相分別配制兩藥(質量濃度均為15 μg/mL)進行紫外掃描。結果顯示，丙胺卡因在220～232 nm吸光度幾乎不變，而利多卡因在210～250 nm吸光度隨波長增加而急劇降低。最終采用220 nm的檢測波長，既能同時檢測到兩藥透皮1 h的接受液濃度，又避免了皮膚雜質和有機溶劑截止波長的干擾。國內外文獻報道，利多卡因透皮試驗常見的接收液為水、生理鹽水和pH=7.4的磷酸鹽緩沖液，故需進行溶解度試驗以篩選合適的接受液。結果顯示，在pH=7.4的磷酸鹽緩沖液、水、生理鹽水中，利多卡因的溶解度分別為 9.83，5.31，3.42 g/L;丙胺卡因的溶解度分別為2.71，5.92，1.71 g/L。在本試驗透皮條件下，選擇水作為介質，既滿足漏槽條件，又簡單、方便。

目前，單獨報道利多卡因透皮的試驗比較多[5－7]，但利多卡因與丙胺卡因同時透皮的試驗報道較少。本試驗結果顯示，供試藥和對照藥透皮8 h接受液中利多卡因的累計透皮率分別為34.53% 和 32.37% ，丙胺卡因為 39.55% 和 37.71% 。而 Emla 乳膏人體藥學研究顯示，兩藥有5%～10%被吸收進入體內。本試驗結果顯示，兩藥鼠皮透皮率遠大于人皮，這可能是由于鼠皮與人皮在結構組成和角質層組分差異較大所致。由于人皮難以獲得，故采用鼠皮進行復方利多卡因乳膏體外透皮規律的比較。

對復方利多卡因乳膏的透皮參數進行統計，結果顯示供試藥和對照藥中兩藥的流通量無顯著性差異(P＞0.05)，且均符合零級透皮規律，表明供試藥和對照藥的體外透皮性能一致。通常采用透皮促進劑或者新型給藥技術增加藥物的經皮吸收[8－9]。而復方利多卡因乳膏則是利用利多卡因和丙胺卡因形成低共熔混合物而促進兩藥透皮，其作用機制是藥物熔點降低致使熱力學活度增加，從而有利于提高藥物的流通量，并能降低時滯[10]。表1結果顯示，兩藥的透皮時滯均較低，這顯然有利于更快發揮復方利多卡因乳膏的局部麻醉作用。

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