高效液相色譜法測(cè)定健陽(yáng)片中淫羊藿苷含量

譚安軍

(重慶市永川區(qū)中醫(yī)院，重慶 402160)

健陽(yáng)片是衛(wèi)生部《藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑(第八冊(cè))》(WS3－B－1604－93)收載品種，由淫羊藿提取物、蜈蚣粉、甘草提取物、蜂王漿精制而成的中藥復(fù)方制劑，功效為補(bǔ)腎益精、助陽(yáng)興萎，用于腎虛陽(yáng)衰引起的陽(yáng)萎、早泄等性功能低下癥。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目下只有簡(jiǎn)單的顏色反應(yīng)和薄層鑒別試驗(yàn)。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定本制劑組方中君藥淫羊藿主要成分淫羊藿苷的含量，為完善、提升該制劑質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

Waters Alliance 2695/2996型高效液相色譜儀，Empower色譜工作站(美國(guó)Waters公司)。淫羊藿苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110737－200414);乙腈為色譜純、水為純化水;健陽(yáng)片(市售，批號(hào)為 140501，140502，140503)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Waters Symmetry C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:乙腈 －水(30∶70);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):270 nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液制備

稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.12 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取重量差異項(xiàng)下的本品20片，除去糖衣層，研細(xì)，取0.3 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加甲醇80 mL超聲提取20 min，放冷，用甲醇定容至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按健陽(yáng)片制備工藝，制備缺淫羊藿的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性考察:照上述色譜條件，取2.2項(xiàng)下3種液溶液各10 μL，進(jìn)樣測(cè)定。供試品溶液色譜中，在與淫羊藿苷對(duì)照品溶液色譜圖相應(yīng)位置上有一相應(yīng)色譜峰，陰性對(duì)照品溶液則無(wú)此峰，表明陰性樣品對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，選擇性較好。色譜圖見(jiàn)圖1。

線性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品溶液 2，4，8，16，20 μL，注入液相色譜儀，以淫羊藿苷進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程 Y=210 729X－13 213，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，淫羊藿苷進(jìn)樣量在 0.24 ～2.40 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對(duì)照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果淫羊藿苷峰面積的 RSD為0.94%(n=5)，表明儀器精密度好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別于 0，1，4，8，14 h進(jìn)樣。結(jié)果淫羊藿苷峰面積的 RSD為1.10%(n=5)，表明供試品溶液在14 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn):按擬訂的含量測(cè)定方法，取同一批樣品(批號(hào)為20140501)6份測(cè)定，計(jì)算含量。結(jié)果樣品中淫羊藿苷平均含量為每片含 10.72 mg，RSD 為 1.04%(n=6)。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品(批號(hào)為20140501)6份，分別加入淫羊藿苷對(duì)照品，按擬訂色譜條件，依法測(cè)定淫羊藿苷含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 淫羊藿苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法，并依法測(cè)定樣品中淫羊藿苷含量。結(jié)果批號(hào)為140501，140502，140503樣品每片含量分別為 10.72，10.97，10.66 mg。

3 討論

[1]，選用乙腈－水系統(tǒng)作為流動(dòng)相，基線平穩(wěn)，經(jīng)多次試驗(yàn)，該流動(dòng)相能使樣品中淫羊藿苷峰與相鄰色譜峰達(dá)到基線分離且分離良好，峰形對(duì)稱，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

供試品溶液制備方法參考文獻(xiàn)[2－5]，分別對(duì)提取溶劑的種類、提取次數(shù)、超聲處理時(shí)間進(jìn)行了考察。試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品制備方法采用超聲提取20 min，淫羊藿苷的含量趨于穩(wěn)定，運(yùn)用平行測(cè)定方法，計(jì)算含量的 RSD符合相關(guān)規(guī)定。

根據(jù)文獻(xiàn)[6－9]報(bào)道，分別對(duì)不同廠家、不同規(guī)格的色譜柱進(jìn)行篩選試驗(yàn)。結(jié)果表明，采用Waters Symmetry C18柱色譜圖基線平穩(wěn)，峰形對(duì)稱。

采用高效液相色譜法測(cè)定制劑中淫羊藿苷的含量，方法快速、準(zhǔn)確、峰形對(duì)稱，可用于健陽(yáng)片的質(zhì)量控制。

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