白英乙醇提取物對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)作用

李國(guó)天

白英乙醇提取物對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷的保護(hù)作用

李國(guó)天

目的 觀察白英乙醇提取物(EEST)對(duì)四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)大鼠急性肝壞死的影響。方法 將Wistar大鼠分為五組, 每組10只。對(duì)照組(A組)、CCl4組(B組)、150 mg/kg EEST+ CCl4組(C組)、300 mg/kg EEST+CCl4組(D組)和50 mg/kg Silibinin + CCl4組(E組)灌胃7 d, 1次/d, 0.5 ml/次, 最后1 d, A組腹腔注射生理鹽水, 余各組腹腔注射CCl41 ml/kg。16 h后檢測(cè)血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基酸轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)；肝組織蘇木素-伊紅(HE)染色觀察病變程度；黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法分別檢測(cè)肝勻漿中超氧化物岐化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)和丙二醛(MDA)。結(jié)果 與A組比較, B組血清中ALT、AST、ALP的含量顯著增加, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), HE染色肝組織變性壞死累及全小葉。與B組比較, C、D、E組血清中ALT、AST、ALP的含量顯著下降, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), HE染色病變程度較輕；胞漿中SOD和CAT活性提高、MDA水平降低, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 EEST能顯著減輕CCl4誘導(dǎo)的肝損傷, 可能與EEST抗脂質(zhì)過(guò)氧化作用有關(guān)。

白英；大鼠；四氯化碳；肝損傷

茄科植物白英(solanum lyratum thunb)又名白毛藤, 主產(chǎn)于江蘇、浙江、江西, 據(jù)《中華本草》記載具有清熱解毒、祛風(fēng)利濕、化瘀等作用。臨床常用于治療感冒發(fā)熱、膽囊炎、膽石病、癌癥、子宮頸糜爛、白帶異常等病癥［1-3］。CCl4等直接肝毒性物質(zhì), 除了職業(yè)性接觸外, 越來(lái)越嚴(yán)重的污染到了水源和空氣［4］。鑒于脂質(zhì)過(guò)氧化, 自由基生成是CCl4肝損傷的主要機(jī)制之一, 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察EEST作用于CCl4肝損傷的急性動(dòng)物模型, 探討EEST對(duì)CCl4急性肝損傷的影響。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試劑儀器及EEST的制備 Wistar大鼠［延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科, 合格證號(hào), SCXK(吉)2003-000］, 四氯化碳, 乙醚、HE染液、SOD、CAT、MDA測(cè)定試劑盒、考馬斯亮蘭蛋白測(cè)定試劑盒、多聚甲醛(上海華美生物公司),酶聯(lián)免疫檢測(cè)(RT2100C, 美國(guó)), 顯微鏡及攝像機(jī)(Nikon), Microfuge22R臺(tái)式冷凍離心機(jī)(Beckman Coulter), 全自動(dòng)生化分析儀(Beckman Coulter), 真彩色病理顯微圖像分析系統(tǒng)(CH30RF200)。取干燥的白英400 g(延邊大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科提供)加3000 ml 70%乙醇, 用萃取機(jī)萃取3 h, 將取得的萃取液用濾紙過(guò)濾, 然后使用回轉(zhuǎn)真空濃縮機(jī), 上清液在45℃減壓濃縮, 經(jīng)冷凍干燥得粉末, 臨用前以蒸餾水或生理鹽水配置。

1.2 動(dòng)物分組及給藥與CCl4注射制作方法 Wistar大鼠50只, 清潔級(jí), 雄性, 平均體重(200±30)g, 隨機(jī)分成五組, 每組10只。對(duì)照組(A組)、CCl4組(B組)、150 mg/kg EEST+ CCl4組(C組)、300 mg/kg EEST+CCl4組(D組)和50 mg/kg Silibinin + CCl4組(E組)灌胃7 d, 1次/d, 0.5 ml/次, 最后1 d, A組腹腔注射生理鹽水, 余各組腹腔注射CCl41 ml/kg［5］。16 h后乙醚麻醉打開胸腔取血, 取肝臟。

1.3 血清ALT、AST、ALP測(cè)定和肝組織病理學(xué)觀察 大鼠打開胸腔后, 從左心室直接抽血5 ml, 37℃ 溫浴10 min, 3000 r/min離心, 10 min, 取上血清1000 μl, 全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定ALT、AST、ALP。肝組織學(xué)觀察在同一部位切取1塊肝組織, 以10%甲醛固定后制備石蠟切片, HE染色, 在光鏡下觀察肝組織變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 實(shí)施t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EEST對(duì)血清中ALT、AST、ALP含量的影響 與A組比較, B組血清中ALT、AST、ALP的含量顯著增加, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與B組比較, C、D、E組ALT、AST、ALP下降, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 EEST對(duì)肝勻漿SOD、CAT與MDA的影響 與A組比較, B組胞漿和線粒體中的SOD、CAT活性降低, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), MDA的含量升高, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與 B組比較, C、D、E組胞漿中SOD、CAT的活性顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), MDA的含量顯著降低, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；線粒體中的CCl4活性增加, MDA含量降低差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；C、D組胞漿和線粒體中SOD、CAT活性均顯著增加, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 降低MDA含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表1 EEST對(duì)CCl4所致肝損傷小鼠血清中ALT、AST及ALP活性的影響(-x±s, U/L)

表2 EEST對(duì)CCl4誘導(dǎo)大鼠肝組織中SOD、CAT及MDA含量的影響( x-±s)

2.3 EEST對(duì)肝組織變性壞死的影響 B組肝細(xì)胞氣球樣變性, 液化性壞死, 變性壞死范圍幾乎波及全小葉, 有多種炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。C、D組變性壞死明顯減少, 炎癥細(xì)胞數(shù)減少。

3 討論

CCl4是氯化烷烴類化合物, 可直接溶解肝細(xì)胞膜, 同時(shí), CCl4經(jīng)肝細(xì)胞色素P450依賴性功能氧化酶的代謝, 生成活潑的三氯甲基自由基和氯基自由基, 啟動(dòng)脂質(zhì)過(guò)氧化作用, 致肝細(xì)胞損傷［6］。CCl4目前主要被用于動(dòng)物肝損傷模型［7］。CCl4導(dǎo)致肝損傷的詳細(xì)機(jī)制仍是不太明確, 目前認(rèn)為與CCl4自身和其自由基代謝產(chǎn)物有關(guān)。CCl4直接導(dǎo)致肝細(xì)胞膜完整性破壞, 可能由于細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)主要成分不飽和脂肪酸的過(guò)氧化,膜蛋白變性所致, CCl4長(zhǎng)期作用后可導(dǎo)致膠原纖維沉積, 可能是CCl4誘發(fā)肝纖維化的機(jī)制之一［8］。絲氨酸蛋白酶凝血酶是中樞因子, 在四氯化碳處理72 h后, 凝血酶原活化達(dá)到最大值, 隨后在168 h降至基礎(chǔ)水平。組織損傷指數(shù)-丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性在處理后36 h顯著升高, 至72 h基本恢復(fù)正常水平。另外, CCl4代謝產(chǎn)物還可以刺激肝臟枯否細(xì)胞, 釋放促炎性細(xì)胞因子, 進(jìn)一步加重肝臟的損傷。脂肪過(guò)氧化的副產(chǎn)物如反應(yīng)性醛類還可以結(jié)合胞內(nèi)正常的蛋白質(zhì)和DNA,具有肝毒性和致癌作用。本研究HE染色病理切片證實(shí)了EEST較CCl4組顯著改善肝小葉變性、壞死的范圍和程度,證明EEST對(duì)CCl4誘導(dǎo)的急性肝損傷有保護(hù)作用。

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Protective effect of Solanum lyratum Thunb ethanol extract for carbon tetrachloride-induced acute liver injury

LI Guo-tian.Department of Neurosurgery, Jilin Yanji City Hospital, Yanji 133000, China

Objective To observe the influence of Solanum lyratum Thunb ethanol extract (EEST) on carbon tetrachloride (CCl4)-induced rats acute liver injury.Methods Wistar rates were divided into five groups, with 10 rates in each group.Control group (group A), CCl4group (group B), 150 mg/kg EEST + CCl4group (group C), 300 mg/kg EEST + CCl4group (group D), and 50 mg/kg Silibinin + CCl4group (group E) all received lavage for 7 d by 0.5 ml each time and once a day.On the last 1 d, group A received intraperitoneal injection of normal saline, and the other groups received intraperitoneal injection of CCl4by 1 ml/kg.Detection after 16 h was made on serum alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), and alkaline phosphatase (ALP).Lesion extent was observed by liver tissue hematoxylin-eosin (HE).Xanthine oxidase method and thiobarbituric acid method were applied respectively in detection of liver homogenate superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and methane dicarboxylic aldehyde (MDA).Results Compared with group A, group B had obviously increased ALT, AST, and ALP contents, and the difference had statistical significance (P＜0.05).HE staining showed degenerative necrosis of liver tissue involved lobule.Compared with group B, groups C, D and E had remarkably decreased ALT, AST, and ALP contents, and their difference had statistical significance (P＜0.05).HE staining showed mild lesion.SOD and CAT had increased activity in cytoplasm, while MDA level was reduced.The difference had statistical significance (P＜0.05).Conclusion EEST can remarkably reduce CCl4-induced liver injury, and it may be correlated with anti-lipid peroxidation effect of EEST.

Solanum lyratum Thunb; Rat; Carbon tetrachloride; Liver injury

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.19.004

2015-02-05］

133000 吉林省延吉市醫(yī)院神經(jīng)外科