消癌解毒方對膽囊癌患者細胞增殖及凋亡的影響

李廣林，張 勇

戶縣中醫醫院普外科，陜西 戶縣 710300

消癌解毒方對膽囊癌患者細胞增殖及凋亡的影響

李廣林，張 勇

戶縣中醫醫院普外科，陜西 戶縣 710300

目的：探討消癌解毒方治療膽囊癌與K i 67基因、Fas基因表達的關系。方法：將46例原發性膽囊癌患者隨機分為對照組23例和治療組23例。治療組口服消癌解毒方和化療藥物，2次/d；對照組入院后僅使用化療藥物，劑量與治療組一致。2組患者均連續治療6周，治療后進行手術，術中均取瘤體。用免疫組化SP法檢測腫瘤組織中K i 67、Fas基因的表達水平。結果：治療組膽囊癌患者組織Fas陽性率明顯高于對照組(P＜0.05)；治療組K i 67的陽性表達率明顯低于對照組(P＜0.05)。結論：消癌解毒方可抑制膽囊癌細胞的增殖，促進癌細胞凋亡，這可能是消癌解毒方治療原發性膽囊癌的作用機制。

消癌解毒方；膽囊癌；K i 67；Fas

消癌解毒方是在國醫大師周仲瑛教授“癌毒”理論指導下經長期臨床總結而成的有效抗癌方藥。周紅光等［1-2］研究表明，消癌解毒能提高中晚期惡性腫瘤近期臨床療效，明顯提高患者的生活質量，減少化療藥物的毒副反應。Ki67是增殖細胞核抗原，是可靠而全面的反應細胞群體增殖活性的客觀指標，Fas是細胞凋亡的信號分子，以二聚體與Caspase-8結合形成死亡誘導信號復合體，最終激活Caspase-3而導致表達Fas的靶細胞凋亡［3-8］。為進一步探討消癌解毒方治療膽囊癌的機理，近年來，筆者就消癌解毒方對原發性膽囊癌組織中細胞核增殖抗原Ki67及促細胞凋亡因子Fas表達的影響進行了觀察，現報道如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料 將2011年5月至2014年5月在戶縣中醫醫院就診的46例膽囊癌患者隨機分為2組。治療組23例，其中男13例，女10例；年齡32～74歲，平均(58.7±13.1)歲；膽囊結石13例，膽管結石3例，急性膽囊炎3例，膽囊息肉6例，均有不同程度的食欲降低、肝功能異常、腹水。對照組23例，其中男12例，女11例；年齡35～78歲，平均(59.3±12.7)歲；膽囊結石8例，急性膽囊炎3例，膽管結石2例，膽囊息肉8例，均有不同程度的食欲降低、肝功能異常、腹水。2組患者年齡、性別、合并癥等臨床資料比較，差異無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 納入標準 納入：1)符合膽囊癌診斷標準者；2)符合知情同意原則。

1.3 排除標準 排除：1)不符合上述納入標準者；2)對受試藥物過敏者；3)中途退出治療者。

1.4 治療方法 對照組僅給予化療藥物治療，方案為：培他濱片(上海羅氏制藥有限公司生產，批號：20110117)1 500 mg/m2，每日分2次口服，21天為1個周期，共觀察2個周期。治療組在對照組的基礎上加服消癌解毒方(消癌解毒方是根據我國著名中醫藥專家周仲瑛教授的“癌毒”理論，在辨證與辨病相結合的基礎上組方，主要由半枝蓮、白花蛇舌草、蜈蚣、漏蘆、僵蠶、太子參等藥物組成［9］)，1劑/d，水煎300 mL，分早晚2次服用，21天為1周期，連續服用2個周期。2組患者末次服用后第2天行膽囊癌切除手術。

1.5 免疫組化及結果判定 采用SP法二步操作，具體實驗步驟按照試劑說明書進行，用PBS替代一抗作為陰性對照。采用雙盲法觀察陽性反應。以細胞被染成黃色或棕色為陽性細胞，隨機選擇6個高倍視野，每個視野計數400個細胞，計算陽性細胞數所占的百分比均值，當此均值＞10%即為陽性表達［10］。

1.6 統計學方法 采用SPSS 17.0統計軟件進行相關統計學處理，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

Ki67陽性率治療組為30.4%，對照組為86.9%，2組比較差異有統計學意義(P＜0.05)；Fas陽性率治療組為91.3%，對照組為34.8%，2組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。Ki67和Fas免疫組化蛋白表達情況見圖1—2。

表1 2組中K i 67、Fas抗原檢測陽性結果

圖1 2組中K i 67的細胞核表達情況(左：陰性表達；右：陽性表達)

圖2 2組中Fas的細胞漿表達情況(左：陰性表達；右：陽性表達)

3 討論

近年來，膽囊癌的發病率有逐年上升趨勢，是常見的消化道惡性腫瘤［11］。該病發病機制復雜，病因尚不清楚，與飲食、細菌感染等有一定的關系。膽囊癌屬于中醫“脅痛”“腹痛”“黃疸”等范疇，肝氣郁結，脾氣虛弱，水濕不化，疏泄不利，濕熱交蒸，瘀毒內阻，日久而形成為其主要病因病機。中醫治療以辨證施治為主，也有一些單方、驗方，并可配合使用針刺療法［2］。西醫對膽囊癌以手術根治切除為主，術后采用化療，或放射療法及免疫療法。研究表明，消癌解毒方配合化療使腫瘤患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+數量及NK活性明顯提高，對提高機體抗腫瘤免疫能力也具有一定的療效［12］。有學者以H22荷瘤小鼠為研究對象，消癌解毒方能顯著影響多個與腫瘤生長凋亡和免疫相關的信號通路，并能下調趨化因子信號通路中CCL3、CXCL2等基因的表達，發揮抗腫瘤生長和侵襲的作用［13］。

消癌解毒方能夠明顯抑制人肝癌細胞SMMC-7721的增殖，抑制核轉錄因子NF-κB的異常持續活化，促進腫瘤細胞凋亡［4，14-15］。本研究與其結果一致，本研究用消癌解毒方治療人原發性膽囊癌，可顯著下調細胞增殖抗原Ki67的陽性表達(P＜0.05)，表明消癌解毒方抑制膽囊癌細胞增殖，這可能是消癌解毒方治療膽囊癌的作用機理。此外，本文還研究了消癌解毒方治療膽囊癌與促細胞凋亡因子Fas的表達關系，結果表明，Fas在膽囊癌組織中的陽性表達率明顯增大(P＜0.05)，說明消癌解毒方可能對膽囊癌細胞的凋亡具有一定的促進作用。還有研究報道［16］認為，消癌解毒方能促進肝癌細胞株H22細胞凋亡，抑制Survivin蛋白的表達，這可能是其抗癌機制之一。

綜上所述，消癌解毒方通過抑制原發性膽囊癌組織Ki67基因的表達可降低人膽囊癌細胞的增殖能力，通過上調腫瘤組織Fas基因的表達促進人膽囊癌細胞的凋亡。然而，消癌解毒方治療膽囊癌機制的研究還需要進一步通過大量的臨床試驗進行驗證，以加深對消癌解毒方治療原發性膽囊癌機理的認識。

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Influence of XiaoAi JieDu Prescription on Cellular Proliferation and Apoptosis of the Patients Suffering from Gallbladder Carcinoma

LI Guanglin,ZHANG Yong
Surgery Department of Huxian County TCM Hospital,Huxian 710300,China

Objective:To investigate the correlation between XiaoAi JieDu prescription in treating gallbladder carcinoma and the expressions of Ki67 gene and Fas gene.Methods:All 46 patients were randomly divided into the control group and the treatment group.The treatment group took XiaoAi JieDu prescription and chemotherapy drugs, twice per day;the control group took chemotherapy drugs after hospitalized,and the doses were identical with the treatment group.Both groups were treated for six consective weeks,and accepted the surgery to remove the tumor, the expressions of Ki67 gene and Fas gene in the tissue of the tumor were detected by immunohistochemical SP method.Results:The treatment group was higher than the control group significantly in Fas positive rate(P＜0.05); lower than the control group in Ki67 positive expression rate (P＜0.05).Conclusion:XiaoAi JieDu prescription could inhibit the proliferation of gallbladder carcinoma cells and promote the apoptosis of cancer cells,which might be the mechanism of XiaoAi JieDu prescription in treating gallbladder carcinoma.

XiaoAi JieDu prescription;gallbladder carcinoma;Ki67;Fas

R735.8

B

1004-6852(2015)10-0101-03

2014-12-27

李廣林(1961—)，男，副主任醫師。研究方向：肝膽及腸道腫瘤病的中醫治療。