貓須草提取工藝研究

楊江媛

【摘要】目的：考察貓須草的最佳醇提取工藝。方法：以貓須草提取物中總黃酮的含量為指標，對不同的提取方法及提取工藝進行考察，以確定貓須草的最佳提取工藝。結果： 95%的乙醇提取烘干的水提藥渣，乙醇用量為15BV/次，提取次數為2次，每次2.5h。提取方法經過中試放大試驗后干粉收率達到20%以上，總黃酮達到70%以上。結論：收率較好，該工藝條件可行。

【關鍵詞】貓須草；總黃酮；提取工藝；收率.

【中圖分類號】R284.2【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2015）10-0020-02

貓須草Clerodendranthus spicatus （Thunb.）C. Y. Wu又名腎茶、牙努秒、貓須公，為唇形科腎茶屬植物。我國貓須草主要分布于廣東、海南、廣西南部、云南南部、臺灣及福建，常生于林下潮濕處。從上世紀起，我國多地引種栽培，其中以云南種植最多[1] 。貓須草是一種藥食兩用的植物，具有利尿、抗菌、消炎、溶石、排石和抗腫瘤等多種藥理學作用[2] 。有文獻報道貓須草中的主要化學成分為黃酮類、酚性化合物、二萜類、三萜類、木脂素類等，其中黃酮類化合物為其主要脂溶性化合物[3-4] 。為提高貓須草有效成分提取效率，本實驗以乙醇為提取溶劑，對貓須草的提取工藝進行研究和優化，為貓須草的優質開發利用提供理論依據。

1材料

1.1試驗器材電子天平（十萬分之一，賽多利斯科學儀器有限公司）；電子天平（萬分之一，賽多利斯科學儀器有限公司）；NKSY型智能恒溫水浴鍋（常州諾基儀器有限公司）；36952型紫外分光光度計（菲爾伯恩實業發展有限公司）；昆山超聲清洗儀（安徽東南儀誠試驗室設備有限公司）；R-1001-L旋轉薄膜蒸發儀（鄭州長城儀器有限公司）；SHZ-D型真空泵（鄭州博科儀器設備有限公司）

1.2對照品蘆丁（中國食品藥品檢驗所，批號：121268-200904）。

1.3藥材貓須草水提取后低溫干燥的藥粉。

2方法與結果

2.1總黃酮含量測定方法

2.1.1對照品溶液制備精密稱取蘆丁對照品16.42mg，甲醇適量置水浴上微熱使溶解，放冷，甲醇定容至50ml，搖勻，即得濃度為0.3284mg/ml的蘆丁對照品溶液。

2.1.2標準曲線的制備精密量取對照品溶液0.5、1、1.5、2、3、4、5、6ml，分別置25ml量瓶中，各加水至6.0ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15min，以相應的試劑為空白，按紫外-可見分光光度法（附錄ⅤA），在509nm波長處測定吸光度。

以蘆丁含量（μg/ml）為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制出總黃酮的標準曲線為：Y=0.0107X+0.0012，R2=0.9993，線性范圍為6.568～78.816μg/ml。

表1總黃酮含量測定標準曲線的繪制

蘆丁含量/μg/ml吸光度蘆丁含量/μg/ml吸光度

6.5680.07039.4080.416

13.1360.14252.5440.555

19.7040.21465.6800.715

26.2720.29578.8160.849

2.1.3供試品制備稱取浸膏適量，精密稱定，置25 ml錐形瓶中，加甲醇10 ml超聲處理10 min，放冷，精密稱定，甲醇補足重量，搖勻。精密量取5 ml，置10 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取3ml，置25 ml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加水至6 ml”起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的濃度（μg/ml），計算即得。

2.1.4醇提液供試品溶液的制備稱取各個單因素考察后的干浸膏約0.05g至錐形瓶中，精密稱定，甲醇30ml浸泡1h，超聲提取30 min，放冷，過濾，回收濾液至10ml，用0.45μm的微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.2提取工藝考察

2.2.1乙醇濃度取水提后烘干的藥渣10g，分別加入10倍量濃度為55%、65%、75%、85%、95%的乙醇溶液浸泡藥渣2h后，80℃加熱回流2h，過濾，收集濾液，濾渣同法提取1次，合并濾液，減壓回收溶劑至干，稱定浸膏量及測定總黃酮含量，結果見表2。

表2醇提濃度考察

醇提濃度/%干浸膏含量/g總黃酮含量/%加權評分

550.40110.660.5306

650.40250.650.5262

750.41420.710.5621

850.41190.710.5610

950.39970.730.5648

由上表數據，當用95%的乙醇提取藥渣時，總黃酮含量最高，此時的加權評分最高，因此選擇95%的乙醇提取水提藥渣。

2.2.2乙醇用量取水提后烘干的藥渣10g，按照提取工藝，分別加入6、8、10、12、15倍量濃度為95%的乙醇溶液浸泡藥渣2h后，80℃加熱回流2h，過濾，收集濾液，濾渣同法提取1次，合并濾液，減壓回收溶劑至干，稱定浸膏量及測定總黃酮含量，結果見表3。

表3乙醇用量考察

醇提用量/BV干浸膏含量/g總黃酮含量/%加權評分

60.41550.690.5528

80.44250.690.5662

100.44830.720.5842

120.44170.750.5958

150.45000.770.6100

由上表數據，隨著乙醇用量的增加，加權評分越高，提取藥材時每次選擇15倍量的乙醇為最適提取用量。

2.2.3提取時間取水提后烘干的藥渣10g，按照提取工藝，加入15倍量濃度為95%的乙醇溶液浸泡藥渣2h后，分別80℃加熱回流0.5、1.0、1.5、2.0、2.5h，過濾，收集濾液，濾渣同法提取1次，合并濾液，減壓回收溶劑至干，稱定浸膏量及測定總黃酮含量，結果見表4。

表4醇提時間考察

醇提時間/h干浸膏含量/g總黃酮含量/%加權評分

0.50.42530.770.5976

1.00.43210.780.6060

1.50.43950.790.6148

2.00.44170.850.6458

2.50.44520.880.6626

由上表數據，乙醇提取時間越長，浸膏含量越高，加權評分越大，但隨著提取時間的增加，經濟成本增加，因此本工藝選擇乙醇提取時間為每次2.5h。

2.2.4醇提優選試驗方案由以上單因素考察的結果可知，藥材的醇提最佳提取工藝條件為：95%的乙醇提取烘干的水提藥渣，乙醇用量為15BV/次，提取次數為2次，每次2.5h。

2.3乙醇提取小試結果取水提后烘干的藥渣5份，每份10g，加入15倍量濃度為95%的乙醇溶液浸泡藥粉1h后，分別80℃加熱回流2.5h，過濾，收集濾液，濾渣同法提取1次，合并濾液，減壓回收溶劑至干，測定浸膏出膏率及總黃酮含量，結果見表5。

表5醇提小試結果

提取藥材編號干浸膏含量/g總黃酮含量/%加權評分

10.4250.710.568

20.4450.720.582

30.4360.780.608

40.4100.690.550

50.4290.750.490

均值0.4290.730.560

RSD/%3.044.847.92

由小試結果看出，醇提取工藝重復提取5份藥材RSD值滿足要求，表明該提取工藝穩定可行。

3結論

3.1貓須草中化合物的類型主要為總黃酮及黃酮苷類化合物，其中脂溶性成分主要為黃酮類化合物，因此本實驗在水提取后的基礎上，將水提取后的藥材烘干后再用醇提取能得到純度較高的醇提取物。

3.2采用紫外分光光度法對貓須草中總黃酮含量進行測定，操作簡單、準確度高、重現性好，所建立的標準曲線線性范圍能滿足同時測定藥材、水提取物、醇提取物中總黃酮的含量。

貓須草是我國西南地區特有的少數民族藥，經過長期實踐，貓須草在治療泌尿系統疾病方面具有顯著的療效。然而，由于缺乏系統完整的研究，大多數民族藥還停留在地區甚至更小的范圍內用藥，一些具有顯著療效的民族藥還沒有得到充分的推廣使用。對貓須草提取工藝的研究，不僅有利于民族醫藥的推廣使用，而且也對民族醫藥的發展起到極大的推動作用。

參考文獻

[1] 許娜，許旭東，楊峻山. 貓須草的研究進展[J] .中草藥，2010，41（5）：12-16.

[2] 任文輝，洪儷芳.貓須草的藥理作用研究進展[J] .中草藥，2013，44（20）：2946-2950.

[3] 高增平，王寶華，江佩芬.不同產地貓須草化學成分預試及熊果酸含量對比[J] . 北京中醫藥大學學報，1999，22（5）：78-79.

[4] 顏文祝，呂于謀，沈文通.貓須草主要化學成分初步預試[J] .海峽藥學，1995，7（3）：3-4.

（收稿日期：2015.03.03）