分化型甲狀腺癌中雌激素受體、孕激素受體和增殖細胞核抗原的表達及臨床意義

黃霞，劉景麗，吳健松，李向榮，陳亮

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論著·臨床

分化型甲狀腺癌中雌激素受體、孕激素受體和增殖細胞核抗原的表達及臨床意義

黃霞，劉景麗，吳健松，李向榮，陳亮

目的 研究分化型甲狀腺癌中雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和增殖細胞核抗原(PCNA)的表達及臨床意義。方法 收集甲狀腺相關疾病患者105例，其中甲狀腺乳頭狀癌患者33例，甲狀腺濾泡癌患者24例，甲狀腺腺瘤24例，結節性甲狀腺腫患者24例。使用免疫組化法測定各標本中ER和PR及PCNA的表達情況，分析三者的臨床意義。結果 甲狀腺乳頭狀癌中，<45歲者的ER陽性表達率顯著高于≥45歲者，有淋巴結轉移者的ER陽性表達率亦顯著高于無淋巴結轉移者(χ2=3.945、3.688，P<0.05)；甲狀腺濾泡癌中，有淋巴結轉移者的ER陽性表達率顯著低于無淋巴結轉移者(χ2=4.232，P<0.05)。甲狀腺乳頭狀癌無淋巴結轉移者的PR陽性表達顯著高于有淋巴結轉移者(χ2=3.861，P<0.05)。甲狀腺濾泡癌有淋巴結轉移者的PCNA陽性表達率顯著高于無淋巴結轉移者(χ2=4.231，P<0.05)。甲狀腺乳頭狀癌的ER及PCNA陽性表達率均顯著高于甲狀腺腺瘤及結節性甲狀腺腫者(χ2=6.561、8.412、4.520、7.695，P<0.05)。甲狀腺乳頭狀癌的PR陽性表達率顯著高于結節性甲狀腺腫者(χ2=5.519，P<0.05)。甲狀腺乳頭狀癌者的ER、PR及PCNA染色陽性分級顯著高于甲狀腺腺瘤及結節性甲狀腺腫者(χ2=4.520，5.988，3.256,3.635,3.968,5.509，P均<0.05)。Spearman相關性結果表明，甲狀腺乳頭狀癌及甲狀腺濾泡癌中，ER與PR呈正相關(r=0.459、0.618，P<0.05)。甲狀腺乳頭狀癌中，PCNA蛋白表達與ER及PR均呈負相關(r=-0.456、-0.442，P均<0.05)。甲狀腺濾泡癌中，PCNA蛋白表達與ER呈負相關(r=-0.635，P<0.05)。結論 分化型甲狀腺癌中ER、PR、PCNA表達陽性率高于良性甲狀腺腫瘤組織，ER、PR、PCNA在分化型甲狀腺癌的發病、進展中起重要作用，且三者存在相關性，因此聯合檢測ER、PR、PCNA對分化型甲狀腺癌的診治具有重要價值。

分化型甲狀腺癌；雌激素受體；孕激素受體；細胞核增殖性抗原；表達；價值

目前，對甲狀腺結節進行良惡性診斷在臨床上是一個難點，現有的影像學手段及病理檢查均存在一定的缺陷，尋找一種簡單快速的腫瘤標志物組合對甲狀腺結節進行診斷已成為臨床急需解決的問題之一[1]。國外有研究顯示[2]，雌激素受體(estrogen receptor，ER)、孕激素受體(progesterone receptor，PR)及增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)在診斷乳腺癌、肺癌等方面具有較好的診斷價值，但在分化型甲狀腺癌中的應用較少。現檢測分化型甲狀腺癌中ER、PR及PCNA的表達及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2012年3月—2013年3月在我院接受治療的甲狀腺相關疾病患者105例作為研究對象。其中甲狀腺乳頭狀癌患者33例，男16例，女17例；年齡28～72(42.8±1.6)歲；病程6～12(8.9±1.1)個月；合并高血壓12例，糖尿病18例，冠心病3例；既往有癌癥家族遺傳史者17例。甲狀腺濾泡癌患者24例，男8例，女16例；年齡28～70(42.5±1.3)歲；病程7～12(8.6±1.3)個月；合并高血壓10例，糖尿病13例，冠心病1例；既往有癌癥家族遺傳史者13例。甲狀腺腺瘤24例，男9例，女15例；年齡30～72(42.6±1.7)歲；病程7～12(8.4±1.5)個月；合并高血壓11例，糖尿病12例，冠心病1例；既往有甲狀腺疾病家族遺傳史者12例；結節性甲狀腺腫患者24例，男5例，女19例；年齡30～74(42.5±1.3)歲；病程8～12(8.6±1.2)個月；合并高血壓13例，糖尿病10例，冠心病1例。既往有甲狀腺疾病家族遺傳史者10例。納入標準[3]：(1)所有患者的病理標本均由2位以上有經驗的專家進行診斷；(2)手術前無放、化療及內分泌治療史；(3)滿足WHO關于分化型甲狀腺癌的診斷標準。排除標準[4]：(1)有出血和感染，以及組織壞死嚴重者；(2)癌灶過小亦或是蠟塊較小者，因連續切片遺漏病變形成假陰性者；(3)年齡≤20歲者。獲取其后期手術切除所得甲狀腺組織進行進一步研究。本研究經醫院倫理委員會批準，患者及家屬同意并簽署知情同意書。

1.2 觀測方法與判定標準

1.2.1 方法 使用免疫組化法測定各標本中ER、PR及PCNA的表達。將制作好的標本蠟塊行4 μm切片，脫蠟至水后置于蒸餾水內漂洗5 min，高壓修復后將切片置于蒸餾水內沖洗2次，5 min/次。將切片擦干，滴入1滴3%過氧化氫，放在37℃下溫育15 min，再置于蒸餾水內沖洗2次，5 min/次。擦干切片，滴入pH 7.8胃蛋白酶，在37℃下溫育30 min。用蒸餾水及PBS液各沖洗5 min。而后滴入封閉液，在37℃下溫育15 min。擦干切片，添加一抗，ER與PR稀釋度1∶100，而PCNA稀釋度1∶200。于4℃下過夜。在蒸餾水及PBS液下各沖洗5 min。擦干切片并滴入二抗，在37℃下溫育40 min。用蒸餾水沖洗2次，5 min/次。各切片滴入2滴DAB液，在顯微鏡(XSP-8型, 上海普丹光學有限公司)下觀察10～30 min，檢測顯色過程，終止反應過程。以自來水沖洗和蘇木紫染色2 min，30 s分化液，30 s返藍。利用酒精和二甲苯依次行脫水處理。利用中性樹膠進行封片和晾干，使用PBS替代一抗用作陰性對照。

1.2.2 判定標準[5]： ER及PR蛋白的陽性產物主要存于胞漿及胞核中，而PCNA通常表達在細胞核內，為黃色或者棕黃色顆粒。其中免疫組化判定標準：陽性細胞數<10%記0分，10%～25%記1分，26%～50%記2分，51%～75%記3分，>75%記4分。染色程度評價：淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。統計二者乘積，所得結果<3記為陰性，≥3記為陽性。根據分數對表達程度進行劃分，0～2分記為陰性(-)、3～4分記為低表達(+)、5～8分記為中表達(++)、≥9分記為高表達(+++)，將低、中、高表達記為陽性。為Log-rank檢驗的對數秩值。

2 結 果

2.1 癌組織ER、PR及PCNA表達與相關指標的關系 甲狀腺乳頭狀癌中，ER陽性表達率<45歲高于≥45歲者(χ2=3.945，P=0.033)，有淋巴結轉移者高于無淋巴結轉移者(χ2=3.688，P=0.042)；甲狀腺濾泡癌中，ER陽性表達率有淋巴結轉移者低于無淋巴結轉移者(χ2=4.232，P=0.000)。甲狀腺乳頭狀癌中，PR陽性表達率無淋巴結轉移者高于有淋巴結轉移者(χ2=3.861，P=0.035)。甲狀腺濾泡癌中，PCNA陽性表達率有淋巴結轉移者高于無淋巴結轉移者(χ2=4.231，P=0.000)。見表1。

2.2 ER、PR及PCNA在甲狀腺組織中的分布 ER、PR及PCNA在甲狀腺乳頭狀癌及甲狀腺濾泡癌組織中的分布差異無統計學意義(χ2=0.081、0.081、1.852，P=0.776、0.776、0.174)；甲狀腺乳頭狀癌的ER及PCNA陽性表達率均顯著高于甲狀腺腺瘤及結節性甲狀腺腫者(χ2=6.561、8.412；4.520、7.695,P均=0.010、0.004；0.033、0.006)。甲狀腺乳頭狀癌的PR陽性表達率高于結節性甲狀腺腫者(χ2=5.519，P=0.019)。見表2。

表1 甲狀腺癌的ER、PR及PNA表達與相關指標的關系 [例(%)]

表2 ER、PR及PCNA在甲狀腺組織中的分布比較 [例(%)]

注：與甲狀腺乳頭狀癌相比，aP<0.05

2.3 ER、PR及PCNA的染色分級比較 甲狀腺乳頭狀癌者的ER、PR及PCNA染色陽性分級顯著高于甲狀腺腺瘤及結節性甲狀腺腫者(χ2=4.520、5.988、3.256、3.635、3.968、5.509，P均<0.05)。與甲狀腺濾泡癌者無明顯差異(χ2=0.140、0.001、2.215，P均>0.05)。見表3。

2.4 相關性分析 在甲狀腺乳頭狀癌及甲狀腺濾泡癌中，ER與PR呈正相關(r=0.459、P=0.012；r=0.618，P=0.015)。甲狀腺乳頭狀癌中，PCNA蛋白表達與ER及PR均呈負相關(r=-0.456、-0.442，P=0.012、0.013)。甲狀腺濾泡癌中，PCNA蛋白表達與ER呈負相關(r=-0.635，P=0.004)；與PR無明顯的相關性(r=-0.389，P=0.092)。

3 討 論

臨床上，甲狀腺癌作為人體頭頸部最為常見的一類惡性腫瘤，近年來發病率明顯呈上升趨勢。甲狀腺癌具有較為復雜的發病機制，且由多因素及多基因的協同作用，是一種經歷多個步驟才可形成的生物學變化過程。有報道稱，甲狀腺具有一定程度的激素依賴性，ER、PR的檢測對乳腺癌及前列腺癌等腫瘤的診斷及治療具有重要意義，但在甲狀腺癌中較少涉及，同時，PCNA為細胞增殖有關核抗原內較為多見的一種，其在細胞核中的陽性表達和細胞增殖的活性緊密相連[6，7]。

表3 不同甲狀腺組織中ER、PR及PCNA染色表達程度比較 [例(%)]

注：與甲狀腺乳頭狀癌比較，aP<0.05

本研究發現，甲狀腺癌與ER、PR及PCNA等的表達緊密相關，主要原因：(1)ER方面：ER主要是介導雌激素針對甲狀腺癌調控性增殖而發揮作用，其主要途徑含基因及非基因方面[8]。此外，雌激素還可通過調節TSH的分泌對甲狀腺癌形成產生間接影響，這是因為甲狀腺各組織增生主要由TSH調控。因此，雌激素能夠間接發揮調控組織增生，進而促進腫瘤細胞增殖。由上述結果可知，甲狀腺癌中ER陽性表達和年齡有一定聯系，提示雌激素結合其受體ER進而刺激了癌癥基因表達，對早期癌細胞增殖有影響作用。分化型的甲狀腺癌較其他種類的惡性腫瘤有著較好的預后，特別是乳頭狀癌，若無淋巴結轉移的影響，患者壽命甚至無明顯影響[9]。國外Shamim等[10]報道，分化型甲狀腺癌形成的雌激素受體具有更好的功能，因此預后較其他類型的腫瘤更佳。(2)PR方面：孕激素能夠抑制患者甲狀腺癌的進一步生長，而淋巴結轉移則顯示惡性腫瘤程度較高，PR表達降低，孕激素抑制作用將無法較好發揮。本文研究結果顯示，PR對癌細胞抑制作用逐漸減弱甚至消失，從而導致癌細胞增殖和轉移，年齡較大者甲狀腺癌惡性程度亦更高，且預后更差。同時，孕激素結合相關受體，通過二聚體形式與靶基因的反應原件進行結合，進而反映出原癌基因表達，更利于癌細胞增殖。(3)PCNA方面：由于PCNA是一種DNA聚合酶性輔助蛋白，可參與到DNA修復和細胞周期調控，與P21產生作用，形成四聚體，進而抑制了相關蛋白激酶活性，對細胞周期產生一定的阻滯作用而影響其表達[11]。PCNA表達程度和腫瘤的惡性程度有緊密聯系，惡性程度越強，即浸潤程度越大，淋巴結的轉移亦越多，則PCNA表達強度越高。

此外，本結果表明ER、PR及PCNA對于甲狀腺癌的發生和發展以及浸潤和轉移等過程中均發揮著十分重要的作用。3種指標間的相互聯系較為緊密，是涉及到多種因素和多類分子，以及多種步驟的復雜進程，對三者進行臨床診斷，建立起相應的特異型分子標志物，能夠更好地提升手術前的診斷準確程度，從而制定出合理治療方案，輔助判斷預后。與國外報道結果相一致[12～16]。

綜上所述，分化型甲狀腺癌中ER、PR、PCNA表達陽性率高于良性甲狀腺腫瘤組織，ER、PR、PCNA在分化型甲狀腺癌的發病、進展中起重要作用，且三者存在相關性，因此聯合檢測ER、PR、PCNA對分化型甲狀腺癌的診治具有重要價值。

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Expression and clinical significance of ER, PR and PCNA in differentiated thyroid cancer

HUANGXia*,LIUJingli,WUJiansong,LIXiangrong,CHENLiang.*DepartmentofOncology,theCentralHospitalofXiaoganCity,HubeiProvinceXiaogan432000,China

Correspondigauthor:CHENLiang,E-mail:15337126775@163.com

Objective To investgate the expression of estrogen receptor(ER),progesterone recepter(PR) and proliferatiing cell nuclear antigen(PCNA) using immunohistochemistry in every specimen, analyzed the clinical significance of the three indexes.Methods From March 2012 to March 2013 in the hospital for treatment of 105 patients with thyroid related diseases as the research object. 33 patients with papillary carcinoma of thyroid cancer. 24 patients with thyroid follicular carcinoma. 24 cases of thyroid adenoma. 24 patients with nodular goiter. Using immunohistochemical method determination of ER and PR in all specimens, and the expression of PCNA, analysis the three parameter’s clinical significance.Results In papillary thyroid carcinoma, < 45 years old patients’ expression of ER positive rate was significantly higher than that of more than or equal to 45 years old patients(χ2=3.945, χ2=3.688,P<0.05), lymph node metastasis of ER positive expression rate was also significantly higher than those without lymph node metastasis; thyroid follicular carcinoma, lymph node metastasis’ ER positive expression rate were lower than that in the lymph node metastasis (χ2=4.232,P<0.05). The PR positive expression of papillary thyroid carcinoma without lymph node metastasis was significantly higher than that of lymph node metastasis(χ2=3.861,P<0.05). Thyroid follicular carcinoma with lymph node metastasis of PCNA positive expression rate was significantly higher than that without lymph node metastasis (χ2=4.231,P<0.05). Papillary thyroid carcinoma with ER and PCNA positive expression rate was significantly higher than that of nodular goiter and thyroid adenoma(χ2=6.561、8.412、4.520、7.695，P<0.05).The positive expression of PR in papillary thyroid carcinoma was significantly higher than that of nodular goiter patients (χ2=5.519,P<0.05). Papillary thyroid carcinoma of ER, PR and PCNA staining positive classification was significantly higher than that of nodular goiter and thyroid adenoma (χ2=4.520,χ2=5.988,χ2=3.256,χ2=3.635,χ2=3.968,χ2=5.509,P<0.05). Spearman correlation showed that the thyroid papillary carcinoma and follicular thyroid carcinoma, ER and PR were positively correlated (r=0.459,r=0.618,P<0.05). In papillary thyroid carcinoma, PCNA protein expression were negatively correlated with ER and PR (r=-0.456,r=-0.442,P<0.05). In thyroid follicular carcinoma, the expression of PCNA protein was negatively correlated with ER (r=-0.635,P<0.05).Conclusion The differentiated thyroid carcinoma in ER, PR, PCNA expression positive rate was significantly higher than that in benign thyroid tumor tissues, the expressions of ER, PR, PCNA play an important role in differentiated thyroid cancer onset and development, and there were correlation among the three indexes. Therefore, combined detection of ER, PR, PCNA in the diagnosis and treatment of differentiated thyroid cancer has important value.

Differentiated thyroid cancer; Estrogen receptor;Progesterone receptor ; Proliferating cell nuclear antigen; Expression; Value

432000 湖北省孝感市中心醫院腫瘤科(黃霞、劉景麗、吳健松、李向榮)； 430064 武警湖北總隊醫院消化內科(陳亮)

陳亮，E-mail:15337126775@163.com

10.3969 / j.issn.1671-6450.2015.06.011

2014-12-16)