前列腺增生癥合并前列腺炎患者促炎性細胞因子的變化特點

李海寬，王瑞，周增祥

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論著·臨床

前列腺增生癥合并前列腺炎患者促炎性細胞因子的變化特點

李海寬，王瑞，周增祥

目的 觀察促炎性細胞因子在前列腺增生癥合并前列腺炎患者中的變化特點。方法 選取2012年6月—2014年1月住院的前列腺疾病患者70例，前列腺增生癥合并前列腺炎患者35例為觀察組，單純患有前列腺增生癥患者35例為對照組。采用免疫組化方法和免疫熒光定量PCR檢測法對患者的促炎性細胞因子進行檢測，包括白介素8(IL-8)、成纖維生長因子2(FGF-2)和基質金屬蛋白酶2(MMP-2)、轉化生長因子-β(TGF-β1)。然后再通過免疫組織化學法檢測患者的腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)和分化簇3(CD3)的含量；最后對檢測結果進行統計分析。結果 觀察組IL-8、FGF-2和MMP-2蛋白及IL-8 mRNA、FGF-2 mRNA和MMP-2 mRNA水平均高于對照組(t=2.540 1、2.859 9、12.755 1、19.124 5、12.294 4、8.532 3，P均<0.01)； TNF-α水平高于對照組但差異無統計意義(t=1.427 5,P>0.05)，IL-6、CD3水平高于對照組(t=3.942 0、6.988 1,P<0.01)；bFGF-2蛋白表達中度以上患者對照組占37.1%低于觀察組的80.0%，TGF-β1蛋白表達情況中度及以上患者對照組占20.0%低于觀察組的82.8%(χ2=2.721 8、2.678 4，P<0.01)。結論 促炎性細胞因子在前列腺增生癥合并前列腺炎患者中均較單純前列腺增生癥患者高表達，前列腺炎可能影響前列腺增生癥的變化。

促炎性細胞因子；前列腺增生癥；前列腺炎

現代社會老齡化日益嚴重，前列腺增生癥(BPH)是中老年男性十分常見和多發的一種病癥，對患者的生活質量有著嚴重的影響[1，2]，目前治療手段也相對單一[3]。而且前列腺增生癥合并前列腺炎的發生也日益增多，為了研究促炎性細胞因子在前列腺增生癥合并前列腺炎患者的作用[4，5]，現選取本院前列腺疾病患者70例，分析前列腺增生癥合并前列腺炎發生中的相關因素，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2012年6月—2014年1月本院診治前列腺疾病患者70例，均前列腺增生癥合并因前列腺炎或單純前列腺增生癥經過尿道前列腺電切手術，前列腺增生癥合并前列腺炎35例為觀察組，年齡35～70(59.4±8.8)歲，病程3～8(4.5±0.7)年，前列腺囊腫4例(11.43%)；單純前列腺增生癥35例為對照組，年齡40～75(63.2±9.3)歲，病程4～10(5.8±0.9)年，前列腺囊腫6例(17.14%)。臨床表現：尿急、尿頻，排尿時間長、尿斷續、射程較短等。觀察組患者還有下腹部疼痛，腹股溝、恥骨等區域酸脹。患者均無相關遺傳病。患者年齡、病程、并發癥等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究均在患者知情同意下進行，并經過我院倫理委員會批準實施。

1.2 樣本采取處理 患者均在手術前1天早晨空腹抽取肘靜脈血3 ml，置于室溫下2 h后以4 000 r/min 離心5 min，最后將標本置于-20℃保存。手術中行病灶部位組織切除，標本大小約1.5 cm×0.4 cm×0.4 cm，采用甲醛固定。(1)免疫組織化學方法：首先標本經石蠟切片并脫蠟至水，在室溫下經3%雙氧水8～10 min處理消除內源性過氧化物的活性，再用蒸餾水沖洗，浸泡在磷酸鹽緩沖液(PBS)內10 min后進行抗原修復；在室溫下封閉于10%非免疫血清孵育10 min，不沖洗，加入一抗工作液后放在37℃溫度下孵育1～2 h。各種炎性細胞因子在切片上加入蛋白單克隆抗體的條件分別為：白介素-8(IL-8)1∶100、成纖維生長因子-2(FGF-2)1∶50、基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)1∶100、轉化生長因子β1(TGF-β1)1∶200、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)1∶200、IL-6 1∶100、CD3 1∶200稀釋，試用PBS稀釋)。以PBS沖洗，4 min×3次。每張切片上滴加二抗工作液后繼續置于37℃溫度下孵育20 min。以PBS再沖洗，4 min×3次。每張切片上滴加堿性磷酸酶標記的蓮霉卵白素工作液后繼續置于37℃溫度下孵育20 min。PBS沖洗，4 min×3次。通過顯色劑顯色10 min后，觀察，最后用自來水進行充分的沖洗，再次染色、脫水、透明、封片。 對免疫組織化學切片的平均光密度進行測量分析統計。(2)免疫熒光定量PCR方法對患者的IL-8 mRNA、FGF-2 mRNA和MMP-2 mRNA的相對表達量進行檢測。

1.3 觀察指標 對每張切片采用BX51型號的數碼攝像裝備(日本，Olympus)進行圖像采集，放大圖像400倍后隨機選取3個區域統計，使用計算機圖像處理系統(Image-Pro Plus 6.0, 美國)對患者的IL-8、FGF-2、MMP-2、TGF-β1的平均光密度值采用半定量分析；實時熒光PCR觀察指標：使用電腦分析反應結束后的熒光信號，把該分析的信號轉換成CT值(循環閥值)。然后使用2-ΔΔct的計算方法計算IL-8 mRNA、FGF-2 mRNA和MMP-2 mRNA的相對表達量。

2 結 果

2.1 IL-8、FGF-2和MMP-2表達水平比較 觀察組IL-8、FGF-2和MMP-2蛋白表達水平及基因表達水平均高于對照組(P<0.01)。見表1。

2.2 TNF-α、IL-6和CD3蛋白表達水平比較 觀察組TNF-α水平高于對照組，但差異無統計學意義(P>0.05)，IL-6、CD3水平均高于對照組(P<0.01)。見表2。

表2 2組TNF-α、IL-6和CD3蛋白表達水平比較

2.3 FGF-2、TGF-β1蛋白表達水平比較 對照組FGF-2蛋白表達中度以上患者占37.1%，低于觀察組的80.0%；TGF-β1蛋白表達中度以上患者占20.0%，低于觀察組的82.8%，差異均有統計學意義(P<0.01)。見表3。

表1 2組患者IL-8、FGF-2、MMP-2表達水平比較

表3 2組FGF-2、TGF-β1蛋白表達率比較 [例 (%)]

3 討 論

前列腺增生癥(BPH)是一種十分常見多發的男性疾病，對患者的生活有著十分嚴重的影響[6]，現在臨床普遍認為前列腺炎對前列腺增生癥有著一定的影響[7，8]。

在臨床治療中，對于前列腺增生癥合并前列腺炎的患者和單純前列腺增生癥患者而言，促炎性細胞因子是其相關影響因素。相關研究表明：BPH合并CP患者IL-8、FGF-2和MMP-2的平均光密度值顯著高于單純BPH患者[9～11]。本研究數據同樣表明：單純前列腺增生癥患者的IL-8檢測光密度水平顯著高于前列腺增生癥合并前列腺炎患者；單純前列腺增生癥患者的FGF-2檢測光密度水平明顯高于前列腺增生癥合并前列腺炎的患者；單純前列腺增生癥患者的MMP-2檢測光密度水平顯著高于前列腺增生癥合并前列腺炎患者。由此認為IL-8、FGF-2和MMP-2等炎性因子參與了前列腺增生癥及前列腺炎的發展過程。對于促炎性細胞因子中的TNF-α這種多肽類物質來說，在機體的炎性反應和免疫反應中有著十分重要的作用[12，13]。有學者研究指出：BPH合并CP患者的幾率大約為50%，其TNF-α、IL-6和CD3水平會比普通的BPH患者要高[14～16]。本研究中前列腺增生癥合并前列腺炎患者的TNF-α、IL-6、CD3檢測水平均顯著高于單純前列腺增生癥患者。相關文獻指出：前列腺增生癥合并前列腺炎患者的炎性反應原因導致FGFs(成纖維細胞生長因子家族)和TGF-β(轉化生長因子家族)表達增加，同時促進BPH的發展[17～19]。本結果表明：前列腺增生癥合并前列腺炎的患者的FGF-2、TGF-β1水平明顯高于單純前列腺增生癥患者，前列腺增生癥合并前列腺炎的患者FGF-2水平中度以上患者占比80.0%，TGF-β1水平中度以上患者占比82.8%；單純前列腺增生癥患FGF-2水平中度以上患者僅占37.1%，TGF-β1水平中度以上患者僅占20.0%，所以對于FGF-2、TGF-β1水平的檢測可以了解到患者的前列腺的具體病變。

綜上所述，促炎性細胞因子在前列腺增生癥合并前列腺炎患者中均較單純前列腺增生癥患者高，前列腺炎可能影響前列腺增生癥的變化，同時也有利于指導患者的臨床治療。

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Variation characteristics of proinflammatory cytokines in patients with prostatitis and benign prostatic hyperplasia

LIHaikuan,WANGRui,ZHOUZengxiang.DepartmentofUrologySurgery,FisrtHospitalofYulinCity,Yulin718000,China

Objective To observe the variation characteristics of proinflammatory cytokines in patients with prostatic hyperplasia and prostatitis.Methods From 2012 June to 2014 January, 70 cases of hospitalized patients with disease of prostate, prostatic hyperplasia and prostatitis patients of 35 cases as the observation group, patients only with hyperplasia of prostate in 35 cases as the control group. Immunohistochemistry and immuno fluorescence quantitative PCR detection method were used for detection of proinflammatory cytokines, including interleukin 8 (IL-8), fibroblast growth factor 2 (FGF-2) and matrix metalloproteinase 2 (MMP-2), transforming growth factor beta (TGF-β1). And then through the immunohistochemical method to detect the tumor necrosis factor alpha (TNF-α),interleukin 6 (IL-6) and cluster of differentiation 3 (CD3) content; finally, the detection results were statistical analyzed.Results The observation group’s IL-8, FGF-2 and MMP-2 protein and IL-8 mRNA, FGF-2 mRNA and MMP-2 mRNA were higher than those in control group (t=2.540 1,t=2.859 9,t=12.755 1,t=19.124 5,t=12.294 4,t=8.532 3,P<0.01); TNF-α level was higher than the control group but the difference was not statistically significance (t=1.427 5,P>0.05), IL-6, CD3 level were higher than that of the control group (t=3.942 0,t=6.988 1,P<0.01); bFGF-2 protein with moderate expression in the control group was 37.1%, which was lower than those in the observation group’s 80%, the TGF-β1protein moderate and above expression in the control group was 20%, which was lower than that of the observation group’s 82.8% (χ2=2.721 8,χ2=2.6784,P<0.01).Conclusion The expression of proinflammatory cytokines in patients with benign prostatic hyperplasia and prostatitis was higher than patients with benign prostatic hyperplasia, prostatitis may change benign prostatic hyperplasia.

Proinflammatory cytokines; Benign prostatic hyperplasia; Prostatitis; Related factors

718000 陜西省榆林市第一醫院泌尿外科

10.3969 / j.issn.1671-6450.2015.05.015

2014-12-25)