胃癌患者VEGF及SSTR表達及與胃癌的相關性研究

梁君銘 曾寬 駱雪梅

胃癌的死亡率在全世界惡性腫瘤中居第二位，是臨床最為常見的惡性腫瘤之一[1]。提高胃癌早期診斷率是降低死亡率的重要途徑。多項研究表明胃癌的浸潤轉移是多種基因及其蛋白表達產物協同作用的結果[2]。本研究通過檢測胃癌組織血管內皮生長因子（VEGF）及生長抑素受體（SSTR）的表達情況，同時以健康者作為對照，以評判其在胃癌浸潤和轉移過程中的作用，為臨床早期防治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1月-2014年12月就診于本院的胃癌患者90例為胃癌組，其中男69例，女21例，年齡44~76歲，平均（59.24±7.19）歲，所有患者均經鏡及病理檢查確診。90例胃癌患者中腺癌84例，原位癌4例，鱗癌1例，惡性間質瘤1例；分級結果：高分化18例，中分化49例，低分化23例；低分化腺癌39例，未分化癌17例。胃癌浸潤深度：浸潤達漿膜層者64例，未達漿膜層者26例；病理分期結果：Ⅰ期24例，Ⅱ期11例，Ⅲ期34例，Ⅳ期21例；胃周淋巴結轉移情況：發生轉移者61例，未發生淋巴結轉移者29例。另取同期于本院體檢的60例健康者作為對照組，其中男32例，女28例，年齡33~69歲，平均（58.24±6.31）歲。

1.2 主要試劑 兔抗人SSTR1、SSTR2、SSTR3多克隆抗體（美國santa cruz公司），VEGF單克隆抗體（福州邁新公司），SP-9000試劑盒及DAB試劑盒均購自北京中杉金橋公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 免疫組織化學染色 將組織蠟塊制成厚約4 μm的切片，按照SP試劑盒說明書內容嚴格操作。使用已知陽性切片作為陽性對照，PBS代替一抗做陰性對照。

1.3.2 結果判讀 （1）SSTR結果判讀：光鏡下進行觀測，陽性表達位于細胞漿，呈黃棕色顆粒時為陽性反應，出現陽性反應的細胞即為陽性細胞。依據染色深淺與視野內陽性細胞所占比例評定陽性反應的強度。觀察時每張切片上選取5個高倍視野，每個視野計數細胞100個，按照觀察視野中陽性細胞所占的百分比例進行評分：百分比≤5%時為0，6%~25%之間為1，26%~50%之間為2，51%~75%之間為3，≥76%時為4。按照染色強度進行評分：0為陰性，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。最后按兩者乘積將標本的陽性反應分成4個等級：分別為陰性：1級（0、1、2）；弱陽性：2級（3、4）；中度陽性：3級（6、8）；強陽性：4級（9、12）。兩者相乘得分≥2分時為陽性表達，<2分時為陰性表達。（2）VEGF結果判讀：VEGF陽性判定方法同SSTR，按照腫瘤細胞的染色比例進行分級，胞質染色<10%為陰性表達，≥10%為陽性表達[3]。

1.4 統計學處理 使用SPSS 20.0統計軟件進行分析，VEGF和SSTR在不同組織中的表達差異比較采用 字2檢驗，兩者的相關性分想要的采用Spearman相關性檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 胃癌組織和正常胃黏膜組織的VEGF表達 胃癌組VEGF表達陽性56例，陽性率為62.2%；對照組正常胃黏膜組中VEGF表達陽性5例，陽性率為8.3%，胃癌組VEGF表達陽性率顯著高于對照組，比較差異具有統計學意義（ 字2=43.328，P<0.05）。見表 1。

2.2 胃癌組織和正常胃黏膜組織的SSTR1~3表達胃癌組SSTR1表達陽性73例，陽性率為81.1%；SSTR2表達陽性67例，陽性率為74.4%；SSTR3表達陽性47例，陽性率為52.2%。對照SSTR1表達陽性47例，陽性率為78.3%；SSTR2表達陽性56例，陽性率為93.3%；SSTR3表達陽性51例，陽性率為85.5%。兩組SSTR1陽性表達差異無統計學意義（P>0.05），胃癌組SSTR2、SSTR3表達陽性率低于對照組，比較差異具有統計學意義（P<0.05）。

2.3 VEGF與SSTR在胃癌組織中表達的相關性 VEGF與SSTR2~3在胃癌組織中的表達存在顯著相關性（P<0.05），而與SSTR1的表達并未見顯著相關（P>0.05）。見表 1。

表1 VEGF與SSTR在胃癌組織中表達的交叉表 例

3 討論

惡性腫瘤的發生與發展機制繁雜，不同腫瘤間的機制存在差異性，但其中的某些關鍵步驟基本相同，例如在腫瘤的轉移與浸潤過程中，細胞因子發揮著重要作用。胃癌的發生與發展涉及到原癌基因激活和抑癌基因失活等一系列改變，其中細胞周期調控基因的變異發揮著關鍵作用[4-6]。生長抑素（SS）是細胞周期調控過程的重要抑制激素，通過SSTR相關亞型的介導而發揮抑癌作用，對多種惡性腫瘤的生長具有抑制作用[7]。SSTR是一種G蛋白偶聯受體，共包括SSTR1~5等5個亞型，各亞型通過不同的傳導途徑發揮抗腫瘤細胞增殖作用[8]。Reubi等[9]研究發現人的正常胃黏膜主要表達SSTRl。本實驗中，胃癌組SSTR1表達陽性73例，陽性率為81.1%，SSTR2表達陽性67例，陽性率為74.4%，SSTR3表達陽性47例，陽性率為52.2%。對照組SSTR1、SSTR2、SSTR3的表達陽性率分別為78.3%、93.3%與85.5%。兩組SSTR1陽性表達差異無統計學意義（P>0.05），胃癌組SSTR2、SSTR3表達陽性率低于對照組，比較差異具有統計學意義（P<0.05），與相關研究[10]結論一致。提示在胃癌的發生發展中伴有SSTR的丟失，SSTR表達率的降低影響了SS的抑制效應的發揮，從而在某種程度上促進了胃癌的發生與發展。

惡性腫瘤的局部生長和轉移離不開血管新生，后者需要血管生成因子如VEGF、PDGF及IL-8等的生成和分泌[11-12]。VEGF是一種二聚體糖蛋白，具有特異性促進內皮細胞分裂增殖的作用，同時能以自分泌或旁分泌形式刺激腫瘤細胞發生分裂，在諸多血管生長因子中誘導腫瘤血管生成的作用最強[13-14]。研究表明VEGF過度表達通過多種途徑參與了腫瘤血管的形成，在腫瘤的生長、轉移及預后中具有重要作用[15]。本研究中，胃癌組VEGF表達陽性56例，陽性率為62.2%，對照組正常胃黏膜組中VEGF表達陽性5例，陽性率為8.3%，組間比較胃癌組VEGF表達陽性率高于對照組，差異具有統計學意義（P<0.05）。提示VEGF的高表達促進了腫瘤生長和血管形成，在胃癌的進展中發揮重要作用。

此外，對胃癌組織中VEGF與SSTR表達的相關性進行研究發現，VEGF與SSTR2~3在胃癌組織中的表達存在顯著相關性（P<0.05），而與SSTR1的表達并未見顯著相關（P>0.05）。VEGF與SSTR2~3表達存在負相關，與兩者在胃癌組織中的表達陽性率結果相一致。

綜上所述，VEGF在胃癌組織中高表達，而SSTR在胃癌組織中低表達，兩者間顯著負相關，在胃癌的發生發展調控中信號傳導在上調VEGF的同時伴發SSTR的丟失。

[1] Onogawa S， Kitadai Y， Amioka T， et al. Expression vascular endothelial growth factor （VEGF）-C and VEGF-D early gastric carcinoma correlation with clinicopathological narameters[J]. Cancer Lett，2005，226（1）：85-90.

[2]黃慧，廖文軍，粟鈺淇，等.TGF-β1、HIF-1α、VEGF在胃癌組織及癌旁組織中的表達及臨床意義[J].現代生物醫學進展，2014，14（18）：3524-3527.

[3]羅慧英，楊林，王曉鵬，等.siRNA沉默胃癌SGC-7901細胞COX-2基因對VEGF-C表達與細胞遷移的影響[J].中國臨床藥理學與治療學，2014，19（9）：961-966.

[4]侯亞莉，王國榮，邱健，等.HP感染與胃癌組織中VEGF、MK蛋白表達的關系[J].現代腫瘤醫學，2014，22（10）：2370-2374.

[5]顧金花，顧濤，周麗娜，等.血清VEGF CEA CA19-9和SF水平變化在晚期胃癌患者化療療效評估中的價值[J].國際檢驗醫學雜志，2014，35（18）：2459-2461.

[6]黃美君，梁小裕，管敏昌，等.胃癌患者血清VEGF和IL-8水平變化及臨床意義[J].中國衛生檢驗雜志，2014，24（19）：2796-2798.

[7]武華，王小明，常杰.生長抑素受體亞型在胃癌中的表達及意義[J].腫瘤基礎與臨床，2009，32（4）：297-301.

[8]宋成村，薛宏偉，趙燕偉，等.生長抑素受體亞型SSTR2、SSTR3在淋巴瘤中的表達及臨床意義（英文）[J].現代生物醫學進展，2012，12（22）：4351-4354.

[9] Reubi J C， Waser B， Schaer J C， et al. Sanatostatin receptor sstl-5 expression in normal and neoptastic hum an tissues using reczptor autoradiography with subtype-selective ligands[J]. Eur J NuclMed，2001，28（7）：836-846.

[10]杜有鳳.生長抑素受體亞型SSTR1與SSTR3在胃癌組織中的表達及意義[J].山西醫藥雜志，2010，39（5）：423-424.

[11] Sepeshazi K， Schallv A V， Nary A， et al. Preclinical evaluation of therapeutic effects of targeted cytotoxic analogs of somatostatin and bombesin on human gastric carcinomas[J]. Cancer，2003，98（7）：1401-1410.

[12]邵國慶，張南征.生長抑素對裸鼠人胃癌種植瘤內VEGF和bFGF表達的影響[J].世界華人消化雜志，2014，36：5659-5664.

[13] Cahuk D， Basaran G， Celikel C， et al. Vascular endothelial growth factor， hypoxia-inducihle factor Ⅰ alpha and CD34 expressions in early-stage gastric tumors： relationship with pathological factors and prognostic impact on survival[J]. Oncoloyv，2007，72（1-2）：111-117.

[14]于海英，劉暢，高鳳蘭，等.胃癌組織中MMP-9、CD44v6和VEGF的表達變化及意義[J].山東醫藥，2011，51（26）：78-79.

[15]劉清濤，趙文慧，牛冰.胃癌組織中CD_（44）v6和VEGF的表達變化及意義[J].山東醫藥，2011，51（30）：75-76.