種植體周圍炎患者齦溝液中IL-8、IL-18的水平檢測及意義

酈 興 壽建剛 何 謹(jǐn) 朱滕飛

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種植體周圍炎患者齦溝液中IL-8、IL-18的水平檢測及意義

酈 興 壽建剛 何 謹(jǐn) 朱滕飛

目的 探討IL-8、IL-18在種植體周圍炎齦溝液(GCF)中的表達(dá)及意義。方法 選擇2011年1月～2013年12月期間40例種植體周圍炎患者為研究對象。另選擇健康種植體患者40例。選擇健康人群50例為健康對照組。統(tǒng)計(jì)3組探診深度(PD)、齦溝出血指數(shù)(SBI)、IL-8、IL-18質(zhì)量濃度，并對GCF中IL-8、IL-18質(zhì)量濃度與性別、年齡、PD、SBI進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果 種植體周圍炎組PD、SBI、GCF均高于健康種植體組和對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；但健康種植體組和對照組PD、SBI、GCF差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；種植體周圍炎組IL-8、IL-18水平高于健康種植體組和對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，健康種植體組IL-8、IL-18水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；不同性別種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；≥60歲組IL-8、IL-18水平高于<60歲組和對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，<60歲組IL-8、IL-18水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；GCF 與PD、SBI、IL-8、IL-18呈正相關(guān)(P<0.05)；IL-8、IL-18與年齡、PD、SBI呈正相關(guān)(P<0.05)；IL-8和IL-18之間呈正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 IL-8、IL-18在種植體周圍炎患者GCF中呈高表達(dá)；GCF中IL-8、IL-18的特異性表達(dá)與種植體周圍炎密切相關(guān)。

種植體周圍炎 齦溝液 細(xì)胞因子 炎性反應(yīng) 免疫功能

種植體周圍炎是種植體周圍組織的炎性反應(yīng)，可導(dǎo)致患者支持骨喪失，甚至引起種植體脫落，可嚴(yán)重影響患者的口腔健康，對該病盡早診治對病情的控制和改善具有重要意義[1，2]。口腔炎性疾病時(shí)患者體內(nèi)細(xì)胞因子可出現(xiàn)異常表達(dá)，表明機(jī)體存在一定的炎性反應(yīng)和免疫紊亂[3]。本研究通過檢查種植體周圍炎患者齦溝液(gingival crevicular fluid，GCF)中白細(xì)胞介素8(IL-8)、IL-18的質(zhì)量濃度，旨在探討IL-8、IL-18在種植體周圍炎GCF中的表達(dá)及意義。

資料與方法

1.一般資料：選擇2011年1月～2013年12月期間被筆者醫(yī)院收治的50例種植體周圍炎患者為研究對象，符合種植體周圍炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，患者年齡20～70歲，平均年齡為39±4歲，男性23例，女性27例。另選擇同期被筆者醫(yī)院收治的健康種植體患者50例，患者年齡21～65歲，平均年齡為40±4歲，男性22例，女性28例。選擇同期在筆者醫(yī)院門診體檢的健康人群50例為健康對照組，患者年齡19～65歲，平均年齡37±3歲，男性22例，女性28例。3組在年齡、性別等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究均獲受試者知情并簽署知情同意書。

2.納入排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)納入標(biāo)準(zhǔn)[3]：患者年齡16～35歲；符合種植體周圍炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)；無全身系統(tǒng)疾病；近半年內(nèi)未接受牙周治療、未服用抗生素；無其他原發(fā)腦部器質(zhì)性病變；知情同意。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)[3]：有種植體周及牙周組織疾病治療史者；有精神疾病史；有酒精、藥物濫用史；近半年內(nèi)服用免疫抑制劑、避孕藥者；孕婦；吸煙者；未完成隨訪者。

3.研究方法：(1)GCF的采集：將Whatman 3號(hào)濾紙裁成寬2mm×20mm的紙條，置于干凈容器中備用。采集GCF：用無菌干棉球擦干牙面，隔濕，去除較大的菌斑，輕吹牙齦，將制備好的濾紙條插入種植體頰側(cè)近遠(yuǎn)中、舌(腭)側(cè)近遠(yuǎn)中齦溝中，1min后取出，用游標(biāo)卡尺測量并記錄浸濕長度，剪去干燥部分，置于裝有1ml生理鹽水的Eppendorf管中，每管含1個(gè)樣本的4條濾紙，離心半徑8cm，10000r/min，4℃離心10min，取上清液，-70℃冷凍保存。(2)GCF定量:將健康者血清0.1～2.0μl分為20組(以0.01μl遞增)，用 5μl進(jìn)樣器取各組標(biāo)準(zhǔn)量血清滴于相同的Whatman 3號(hào)濾紙條，每組3條濾紙，游標(biāo)卡尺測量濾紙浸濕長度。根據(jù)健康者血清量與濾紙浸濕面積的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算GCF量，經(jīng)計(jì)算，正常人血清體積與濾紙浸濕面積呈直線線性相關(guān)(r=0.978，P=0.000)。(3)標(biāo)本檢測:室溫下解凍標(biāo)本20min，1000r/min離心10min，取上清液，采用雙抗體夾心ELISA法檢測所有受試者GCF中IL-8、IL-18含量，試劑盒購自于上海華大科技有限公司。嚴(yán)格按照說明書操作[1]。(4)統(tǒng)計(jì)指標(biāo):統(tǒng)計(jì)3組探診深度(PD)、齦溝出血指數(shù)(SBI)、受試者GCF中IL-8、IL-18質(zhì)量濃度，并對GCF中IL-8、IL-18質(zhì)量濃度與性別、年齡、PD、SBI進(jìn)行相關(guān)性分析。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:使用SPSS 19.0軟件，計(jì)量資料執(zhí)行t檢驗(yàn)或單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.3組患者PD、SBI、GCF:3組間PD、SBI、GCF的比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，3組間PD、SBI、GCF差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；種植體周圍炎組PD、SBI、GCF均高于健康種植體組和對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；但健康種植體組和對照組PD、SBI、GCF差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)。

表1 3組患者PD、SBI、GCF比較

與健康種植體比較,**P<0.01；與對照組比較,##P<0.01

2. 3組GCF中IL-8、IL-18質(zhì)量濃度:3組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，3組間IL-8、IL-18水平存在明顯差異；種植體周圍炎組IL-8、IL-18水平高于健康種植體組和對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，健康種植體組IL-8、IL-18水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表2)。

表2 3組GCF中IL-8、IL-18水平比較

與健康種植體比較,**P<0.01；與對照組比較,##P<0.01

3.不同性別種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18水平:50例種植體周圍炎患者中，男性23例，女性27例，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，檢測結(jié)果顯示，不同性別種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表3)。

表3 不同性別種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比較

與對照組比較，**P<0.01

4.不同年齡段種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18水平:將50例種植體周圍炎患者按照年齡段分為≥60歲組(20例)和<60歲組(30例)兩組。組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，不同年齡段種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，≥60歲組IL-8、IL-18水平高于<60歲組和對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，<60歲組IL-8、IL-18水平高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，表4)。

表4 不同年齡段種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18水平比較

與<60歲組比較，**P<0.01；與對照組比較，##P<0.01

5.GCF中IL-8、IL-18的表達(dá)與性別、年齡、PD、SBI的相關(guān)性分析:采用Pearson檢驗(yàn)對GCF中IL-8、IL-18表達(dá)與性別、年齡、PD、SBI進(jìn)行相關(guān)性分析，GCF 與PD、SBI、IL-8、IL-18呈正相關(guān)(P<0.05)；IL-8、IL-18與年齡、PD、SBI呈正相關(guān)(P<0.05)；IL-8和IL-18之間呈正相關(guān)(P<0.05，表5)。

表5 GCF中IL-8、IL-18的表達(dá)與性別、年齡、PD、SBI的相關(guān)性

討 論

IL-8可由巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌，是一種重要的炎性因子，具有多重作用，既可介導(dǎo)炎性反應(yīng)過程，亦可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移，促進(jìn)血管生成[3]。IL-8作為介導(dǎo)炎癥進(jìn)展的重要細(xì)胞因子，與口腔炎性疾病的發(fā)病密切相關(guān)，在口腔炎性疾病的發(fā)病過程中亦起重要作用[4～6]。本研究檢測種植體周圍炎患者GCF中IL-8含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，種植體周圍炎患者GCF中IL-8的檢測含量明顯高于健康種植體者和健康人群。與Severino等[3]的報(bào)道基本一致。健康人群GCF中無明顯炎性反應(yīng)，因此GCF中IL-8可正常表達(dá)；本研究中健康種植體患者IL-8檢測含量高于健康人群，表明其亦存在一定的炎性反應(yīng)，但相較種植體周圍炎患者，健康種植體患者炎性反應(yīng)較弱，因此其GCF中IL-8質(zhì)量濃度檢測結(jié)果介于健康人群與種植體周圍炎患者之間，這表明IL-8與種植體周圍炎的發(fā)生密切相關(guān)[3，7]。

IL-18為近年來發(fā)現(xiàn)的白介素因子，其具有免疫調(diào)節(jié)功能，可參與機(jī)體免疫反應(yīng)[8]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，IL-18在口腔疾病中可出現(xiàn)異常表達(dá)，與口腔相關(guān)炎癥性疾病的發(fā)病密切相關(guān)。本研究檢測種植體周圍炎患者GCF中IL-18含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，種植體周圍炎患者GCF中IL-18檢測含量高于健康種植體患者和健康人群。健康人群和健康種植體患者GCF中無炎性反應(yīng)或炎性水平較弱，因此GCF中IL-18可正常表達(dá)或表達(dá)水平介于健康人群與種植體周圍炎之間[9]。而種植體周圍炎患者存在免疫紊亂和炎性反應(yīng)，因此IL-18可出現(xiàn)高表達(dá)，表明種植體周圍炎患者體內(nèi)存在由IL-18誘導(dǎo)的免疫激活，IL-18的表達(dá)狀況與種植體周圍炎的發(fā)生同樣密切相關(guān)，推測可能機(jī)制為，IL-18通過調(diào)節(jié)血中5-HT水平變化進(jìn)而激活免疫反應(yīng)[9，10]。

本研究中不同性別的種植體周圍炎患者之間GCF中IL-8、IL-18的檢測含量并無顯著差異，但不同年齡段的種植體周圍炎患者GCF中上述指標(biāo)檢測含量存在明顯差異，表明種植體周圍炎中IL-8、IL-18等指標(biāo)的表達(dá)與性別無相關(guān)性，但與年齡有關(guān)，相關(guān)性結(jié)果亦進(jìn)一步證實(shí)了這一點(diǎn)。60歲以上的種植體周圍炎患者GCF中IL-8、IL-18的表達(dá)存在異常，分析可能與以下因素有關(guān)：老年人群本身免疫功能已經(jīng)開始減退，相較60歲以下人群，發(fā)生炎性反應(yīng)時(shí)老年患者免疫紊亂和炎癥程度較重，因此GCF中上述指標(biāo)檢測結(jié)果存在明顯異常。

本組資料相關(guān)性分析結(jié)果顯示，PD、SBI與IL-8、IL-18、GCF呈正相關(guān)，IL-8、IL-18的表達(dá)之間呈正相關(guān)。表明上述指標(biāo)之間存在較為復(fù)雜的相關(guān)性，在種植體周圍炎中IL-8、IL-18等指標(biāo)可能并不單獨(dú)起作用。種植體周圍炎患者GCF中IL-8檢測水平越高，IL-18表達(dá)亦增強(qiáng)，即IL-8、IL-18均呈高表達(dá)，表明機(jī)體所產(chǎn)生的炎性反應(yīng)越劇烈，免疫紊亂越嚴(yán)重，表現(xiàn)為種植體周圍的PD和SBI越顯著[11]。

國內(nèi)有關(guān)GCF中IL-8、IL-18表達(dá)與種植體周圍炎之間的研究較少，因此本研究具有一定的創(chuàng)新性。IL-8、IL-18在種植體周圍炎患者GCF中呈高表達(dá)；GCF中IL-8、IL-18的特異性表達(dá)與種植體周圍炎密切相關(guān)。

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(修回日期：2015-03-16)

IL-8,IL-18 Expression in Peri-implant Gingival Crevicular Fluid and Clinical Significance.

LiXing,ShouJiangang,HeJin,etal.

ShaoxingCentralHospitalofZhejiang,ShaoxingHospitalofChinaMedicalUniversity,Zhejiang312030，China

Objective To study IL-8,IL-18 expression in peri-implantitis gingival crevicular fluid and clinical significance. Methods Between January 2011 and December 2013, 40 patients with peri-implantitis were selected as the research object. 40 cases of healthy implant patients were selected. 50 cases of healthy people healthy were selected as the controls. The probing depth (PD), sulcus bleeding index (SBI), GCF IL-8,IL-18 mass concentration in the three groups were tested, and correlation analysis between IL-8,IL-18 mass concentration in GCF and gender, age, PD and SBI were made. Results PD and SBI, GCF in peri-implant group were higher than healthy implant group and the control group, and the difference was statistically significant (P<0.01). But the PD and SBI, GCF of healthy implant group and the control group B had no obvious difference (P>0.05); IL-8,IL-18 in peri-implant group was higher than healthy implant group and the control group, and the difference was statistically significant (P<0.01). IL-8,IL-18 levels in healthy implant group was higher than the control group, and difference was statistically significant(P<0.01). Peri-implant patients with different gender in GCF IL-8,IL-18 levels, and there was no statistically significant difference (P>0.05). IL-8,IL-18 levels of patients whose ages were 60 or higher in peri-implant group were higher than the < 60 years old group and the control group,and the difference was statistically significant (P<0.01).IL-8,IL-18 levels in the < 60 years old group were higher than the control group, and difference was statistically significant (P<0.01). The GCF was positively correlated with PD, SBI, IL-8, IL-18 (P<0.05). IL-8, IL-18 was positively correlated with age, PD, SBI (P<0.05).There was a positive correlation between IL-8 and IL-18 (P<0.05). Conclusion IL-8,IL-18 show high expression in GCF in peri-implantitis. The specific expressions of IL-8,IL-18 in GCF are closely related to peri-implantitis.

Peri-implantitis; Gingival crevicular fluid; Cytokines; Inflammatory reaction; Immune function

312030 中國醫(yī)科大學(xué)紹興醫(yī)院口腔科

R78

A DOI 10.11969/j.issn.1673-548X.2015.10.044

2015-02-04)