冠心病患者可溶性低密度脂蛋白受體相關蛋白1的表達變化及臨床意義

王韶屏，廖 瑋，王 健，李世英，李 芳，程姝娟

(1.首都醫科大學附屬北京安貞醫院心內科28病區，北京市心肺血管疾病研究所，北京 100029；2.四川省醫學科學院·四川省人民醫院，四川 成都 610072)

冠心病患者可溶性低密度脂蛋白受體相關蛋白1的表達變化及臨床意義

王韶屏1，廖 瑋2，王 健1，李世英1，李 芳1，程姝娟1

(1.首都醫科大學附屬北京安貞醫院心內科28病區，北京市心肺血管疾病研究所，北京 100029；2.四川省醫學科學院·四川省人民醫院，四川 成都 610072)

目的 觀察冠心病患者血漿可溶性低密度脂蛋白受體相關蛋白1(sLRP1)濃度的變化，并分析其與基質金屬蛋白酶9(MMP-9)和高敏C反應蛋白(hsCRP)濃度變化的相關性。方法 選取2013年8～10月北京安貞醫院心內科住院的12例穩定型心絞痛(SAP)、32例急性冠脈綜合征(ACS)，同期冠脈造影陰性的患者8例為對照組。于介入術前空腹檢測血漿sLRP1、MMP-9和hsCRP的濃度，比較三組之間差異。介入術后第一天空腹檢測患者血漿sLRP1，并與術前相比較，分析冠心病患者sLRP1與MMP-9、hsCRP的相關性。結果 術前ACS組sLRP1、MMP-9和hsCRP濃度顯著高于SAP組和對照組，差異有統計學意義(均P< 0.01)，而SAP組和對照組比較差異無統計學意義(P> 0.05)。ACS組患者介入術前和術后sLRP1差異無統計學意義(P> 0.05)。ACS患者sLRP1與hsCRP濃度顯著正相關(r=0.713，P= 0.000)，與MMP-9濃度無相關性。結論 sLRP1可能是反映ACS炎癥狀態的一個指標。

急性冠脈綜合征；炎癥；可溶性低密度脂蛋白受體相關蛋白1；基質金屬蛋白酶9；C反應蛋白

冠狀動脈內不穩定粥樣斑塊破裂后導致急性血栓形成是急性冠脈綜合征(ACS)的病理基礎，常伴隨著大量的單核-巨噬細胞的激活，炎癥因子的釋放，如C反應蛋白(CRP)[1]和基質金屬蛋白酶9(MMP-9)[2]。低密度脂蛋白受體相關蛋白(LRP1)是低密度脂蛋白受體(LDLR)家族的成員之一，具有抗炎作用，可保護血管的完整性[3]。除了錨定于細胞膜的LRP1外，在人的血漿和腦脊液中還發現有可溶性的LRP1(sLRP1)[4]。研究顯示，sLRP1是一種與炎癥相關的蛋白，可在慢性炎癥性疾病，如類風濕性關節炎和系統性紅斑狼瘡患者血漿中顯著增高，而sLPR1本身也可能具有一定的炎癥調控作用[5]。目前尚不清楚sLRP1是否和冠心病，尤其是ACS具有相關性。本研究觀察了冠心病患者血漿sLRP1濃度的變化，探討sLRP1與MMP-9和CRP的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年8～10月北京安貞醫院心內科28病房收治的12例穩定型心絞痛(SAP)和32例ACS組。診斷均符合2012年中國經皮冠狀動脈介入治療指南[6]，所有患者均接受了介入治療。對照組8例為冠脈造影陰性，排查冠心病的患者。所有入選患者均排除2周內急慢性感染、風濕免疫系統疾病史、惡性腫瘤、嚴重肝臟疾病、嚴重腎臟疾病、心肌炎、心肌病、嚴重的心力衰竭(紐約心臟病協會分級IV級)以及近一個月內他汀類藥物服用史者。三組一般資料比較差異無統計學意義(表1)。本試驗符合倫理委員會相關規定，入選患者均簽署知情同意書。

表1 三組患者一般資料比較

BMI：體重指數；SBP：收縮壓；DBP：舒張壓；FBS：空腹血糖；eGFR()：腎小球濾過率。

1.2 方法 ①常規術前檢查，術前生化指標包括高敏C反應蛋白(hsCRP)(免疫比濁法)。②術前以及介入術后第一天空腹抽取肘靜脈血，置于含肝素抗凝劑的離心管中，離心(3000 r/min，10 min)，取血漿分裝至EP管中，-80 ℃保持備用。sLRP1 96孔檢測試劑盒(Corning Inc.，Corning，NY，USA)包埋有0.5 μg/孔的GST-RAP，5%BSA孵育1小時阻斷非特異性結合位點。每孔加入不同濃度的sLRP1(1～500 ng)，4 ℃孵育1小時后，20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，pH 7.4，and 0.1%Tween-20洗滌5次，加入LRP1特異性抗體8 g1，4 ℃孵育1小時，再次洗滌5次后，與HRP標記的二抗4 ℃孵育1小時，徹底洗滌后加入底物顯色。酶標儀450 nm波長讀取OD值。標準曲線在20～500ng呈線性(r2>0.95)。患者血漿樣本稀釋后進行檢測分析。③術前空腹采血檢測MMP-9，操作步驟按照試劑盒說明進行。

1.3 統計學方法 采用SPSS 18.0 統計軟件包進行。計量資料以均數±標準差表示，符合正態分布的兩組間比較采用t檢驗，多組間比較選用方差分析及SNK法；不符合正態分布的計量資料組間比較采用非參數檢驗。計數資料比較采用卡方檢驗。相關分析時，服從雙變量正態分布的計量資料采用Pearson方法，不服從雙變量正態分布資料采用Spearman法。P< 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組sLRP1、hsCRP及MM-9比較 ACS組術前MMP-9、hsCRP及血漿sLRP1濃度顯著高于SAP組和對照組，術后sLRP1濃度顯著高于SAP組，差異均有統計學意義(P< 0.01)。SAP組和對照組血漿sLRP1、MMP-9和hsCRP濃度差異均無統計學意義(P> 0.05)，見表2。

2.2 ACS患者sLRP1與MMP-9、hsCRP的相關性 ACS組患者血漿sLRP1與MMP-9濃度無相關性 (r=-0.317，P= 0.077)，見圖1a；而與hsCRP顯著正相關 (r=0.713，P= 0.000)，見圖1b。

表2 三組sLRP1、hsCRP及MMP-9比較

*與ACS組比較，P< 0.01

圖1 ACS組介入術前血漿sLRP1與MMP-9、hsCRP的相關性分析

3 討論

sLRP1被發現于20世紀末，其生物學意義一直備受關注。近年的研究表明，sLRP1可能是急慢性炎癥性疾病的一個生物標記物。如Wygrecka等[7]發現，在急性呼吸窘迫征患者的支氣管肺泡灌洗液中有sLRP1濃度的顯著增高，并與疾病的嚴重程度相關。Gorvoy等[5]也證實，與正常對照和骨性關節炎患者相比，風濕性關節炎和系統性紅斑狼瘡患者的血漿sLRP1濃度顯著增高。ACS的病理機制涉及不穩定斑塊的破裂、血栓形成和大量炎癥因子的釋放。已有多個炎癥因子已被證實與其密切相關。我們的實驗結果首次證實，sLRP1濃度也與ACS密切相關，但與SAP無關聯。但是在SAP和ACS患者行經皮冠狀動脈血管成形術后sLRP1水平較術前無顯著增高，說明斑塊破裂本身并不能引起sLRP1增高，而提示sLRP1的增高可能是觸發斑塊破裂的原因。

與對照組和SAP患者相比，ACS患者血漿hsCRP和MMP-9濃度顯著升高，該結果與之前的研究報道一致。CRP是一種急性期蛋白，可反應患者體內炎癥的活動程度，包括動脈粥樣硬化斑塊的急性炎癥過程，是預測未來急性心血管事件發生的獨立危險因子，是ACS預后的一個指標[1]。MMP-9是基質金屬蛋白酶家族中的一個蛋白分子，可降解斑塊處的纖維帽，促使斑塊破裂發生。MMP-9水平反映了斑塊的穩定性，是冠心病患者危險分層的一個指標[2]。既往的研究發現，ACS患者MMP-9的升高水平與發病當時hsCRP的升高水平無相關性，與之后的hsCRP峰值水平也無相關性[2]。hsCRP和MMP-9可能是與動脈粥樣硬化斑塊發生、發展及破裂有著不同關系兩個蛋白分子。進一步分析ACS患者sLRP1與hsCRP和MMP-9濃度的相關性發現，sLRP1和hsCRP具有顯著的相關性，而與MMP-9無關。該結果提示sLRP1的生物學意義可能與hsCRP類似，是反映機體炎癥狀態的一個指標。由于研究樣本量有限，尚不明確sLRP1對冠心病患者遠期預后的影響。

綜上，本研究提示sLRP1可能是反映ACS患者炎癥水平的一個指標，其與動脈粥樣硬化的發生、發展以及斑塊的穩定性有待進一步研究。

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Expression and clinical significance of soluble low density lipoprotein receptor related protein 1 in patients with coronary artery disease

WANG Shao-ping1，LIAO Wei2，LI Shi-ying1，WANG Jian1，LI Fang1，CHENG Shu-juan1

(1.The 28thWard，Department of Cardiology，Beijing Anzhen Hospital，Capital Medical University & Beijing Institute of Heart，Lung and Blood Vessel Diseases，Beijing 100029，China.2.Sichuan Academy of Medical Sciences & Sichuan Provincial People’s Hospital，Chengdu 610072，China)

CHENGShu-juan

Objective To observe the changes of soluble low density lipoprotein receptor related protein 1(sLRP1) concentration in coronary artery disease and its association with matrix metalloproteases-9 (MMP-9) and C reactive protein (CRP).Methods Patients with stable angina pectoris (SAP，n=12)，acute coronary syndrome (ACS，n=32) and control subjects (n=8) from August to October，2013 in Beijing Anzhen Hospital were enrolled in the study.The plasma concentration of sLRP1，MMP-9 and hsCRP was tested by specific ELISA analysis.Differences in these three markers were compared among the three groups.Furthermore，sLRP1 in fasting plasma was detected on the first day after intervention and compared to before intervention，and explore the correlation between the SLRP1 and MMP-9、hsCRP.Results The plasma concentration of sLRP1 was increased in patients with ACS when compared to patients with SAP (P<0.01) and the control group (P<0.01).However，no significant difference was found between the SAP group and control group.The concentration of MMP-9 and hsCRP were increased in the ACS group compared to the SAP and control groups.However，there is no significant difference between the SAP and control groups.The concentration of sLRP1 was correlated to hsCRP significantly (P= 0.000) but not MMP-9.Conclusion sLRP1 may reflex inflammatory status of patients with acute coronary syndrome.

Acute coronary syndrome；Inflammation；Soluble low density lipoprotein receptor related protein 1；Matrix metalloproteases-9；C reactive protein

國家自然科學基金青年科學基金資助項目(編號：81000131)；北京市自然科學基金資助項目(編號：7122058)

程姝娟

R541.4

A

1672-6170(2015)04-0030-03

2015-04-25；

2015-05-12)