降鈣素基因相關肽調節核轉錄因子-κB信號轉導對缺氧c-kit+心臟干細胞凋亡的影響

龍仙萍，鄭小宇，王冬梅，許官學，趙然尊，石蓓

降鈣素基因相關肽調節核轉錄因子-κB信號轉導對缺氧c-kit+心臟干細胞凋亡的影響

龍仙萍，鄭小宇，王冬梅，許官學，趙然尊，石蓓

目的探討降鈣素基因相關肽(CGRP)對缺氧環境下c-kit+心臟干細胞凋亡的影響。方法體外建立c-kit+心臟干細胞缺血缺氧模型，實驗分為缺氧+CGRP組，缺氧+CGRP8-37(CGRP拮抗劑)組，細胞缺氧對照組，常氧細胞組，缺氧+BAY11-7082[核轉錄因子-κB(NF-κB)抑制劑]組。采用免疫熒光檢測細胞缺氧后NF-κB轉位情況；采用Western blotting檢測NF-κB通道蛋白的表達，同樣方法檢測CGRP干預后NF-κB轉位及通道蛋白表達。同時用流式細胞儀檢測CGRP干預后細胞凋亡率。結果在缺氧狀態下，NF-κB信號通路被激活，NF-κBP65發生核轉位(呈現紅色熒光)。與細胞缺氧對照組比較，缺氧+CGRP組NF-κB相關信號蛋白P-I-κB、NF-κBP65及NF-κBP50表達減少(P<0.05)；與缺氧+CGRP組比較，CGRP+CGRP8-37組上述NF-κB相關信號蛋白表達增加(P<0.05)。在細胞凋亡方面，與缺氧對照組比較，缺氧+CGRP組早、晚期細胞凋亡率均降低(P<0.05)；與缺氧+CGRP組比較，缺氧+CGRP8-37組細胞早期凋亡增加(P<0.05)。結論CGRP在調節NF-κB信號的同時抑制了缺氧環境下c-kit+心臟干細胞的凋亡。

降鈣素基因相關肽；NF-κB；缺氧；c-kit+心臟干細胞；細胞凋亡

細胞療法是目前治療缺血性心肌病的重要手段之一[1]，以往研究主要集中在骨髓間充質干細胞(BMSCs)作為細胞移植的種子細胞[2-3]。本課題組以往研究顯示，BMSCs移植在一定程度上能改善心肌梗死后心臟功能，并可減少血管成形術后再狹窄的發生[4]。心臟干細胞(CSCs)具有組織特異性和專一性，可分化為心肌細胞、平滑肌細胞和內皮細胞。目前多項研究已證實，與BMSCs相比，CSCs具有更強的心肌修復作用[5]。然而無論何種細胞作為細胞療法的種子細胞，皆受困于心肌梗死后局部惡劣的微環境使移植細胞存活數量極少[6-8]。目前，人們正尋求各種方法來增加移植細胞的存活力。本課題組前期研究顯示，降鈣素基因相關肽(calcitonin gene related peptide，CGRP)干預BMSCs后，在體外觀察到CGRP抑制核轉錄因子-κB(NF-κB)轉錄，增強缺氧狀態下BMSCs的存活，并且BMSCs的增殖分化不受影響[9]。針對是否CGRP對缺氧狀態下CSCs也具有同樣的保護作用，本實驗建立體外細胞缺血缺氧模型，觀察CGRP對缺氧狀態下c-kit+CSCs凋亡的影響，并觀察抑制NF-κB信號轉導對上述CGRP 在c-kit+CSCs凋亡中的作用，以期能為心臟干細胞有效治療心肌梗死提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料 隨機選擇清潔級4～6周齡小鼠，雌雄不限，購自第三軍醫大學實驗動物中心。大鼠/小鼠CGRP多肽(Phoenix Pha Rmaceuticals，美國)，大鼠/小鼠CGRP8-37多肽(Phoenix Pharmaceuti Cals，美國)，兔抗小鼠NF-κBP50抗體(博士德公司)，兔抗小鼠NF-κBP65抗體(Santa Cruz公司)，兔抗小鼠IκB-a(Phospho-Ser32/Ser36)，兔抗小鼠IκB-a抗體、NF-κB激活-核轉運檢測試劑盒、BAY11-7082(NF-κB抑制劑)(碧云天公司)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠c-kit+CSCs的獲取 無菌下處死4～6周齡小鼠，分離小鼠雙側心耳，剪碎成大小為1mm3的組織塊后置于15ml離心管中，加入0.1% Ⅱ型膠原酶，于37℃恒溫水浴鍋中邊搖晃邊消化約1h；1200r/min離心5min，棄上清。Ham's/F-12完全培養基重懸并分裝于細胞培養瓶內，37℃、5%CO2孵箱中孵育。待細胞鋪滿瓶底至80%～90%時，棄培養基，加入0.05%胰蛋白酶消化分離貼壁細胞，1200r/min離心5min，棄上清。1%BSA封閉，含1%FBS的Ham's/F-12培養基5ml(不含雙抗)重懸細胞，加入兔抗小鼠c-kit抗體(1:250)，垂直混合儀上4℃旋轉孵育1h；1200r/min離心5min，棄上清，Ham's/F-12培養基3ml重懸細胞，加入羊抗兔二抗包被磁珠(1:150)，再次置于垂直混合儀上，4℃孵育0.5h。孵育完后置于DYNAL磁力架上，移液槍輕輕吸除管中液體(不可觸碰管壁一側附著的棕褐色磁珠)，培養基重懸細胞，于37℃、5%CO2孵箱中孵育，每隔2d全量換液一次。待c-kit+CSCs鋪滿瓶底至80%～90%時，流式細胞儀檢測細胞表面抗原c-kit、CD34、CD45的表達。

1.2.2 體外CSCs缺血缺氧模型的建立 取c-kit+CSCs，并將培養基更換為無血清Ham's/F-12培養基后繼續孵育24h，使細胞達到同步化狀態。移至37℃三氣孵箱中進行缺氧處理，孵箱內3種氣體比例分別為N2 94%、CO25%、O21%，缺氧12h進行后繼實驗。

1.2.3 免疫熒光檢測NF-κB信號通路核轉位情況 實驗分為5個組，分別是缺氧+CGRP組、缺氧+CGRP8-37(CGRP拮抗劑)組、缺氧+BAY11-7082(NF-κB抑制劑)組、細胞缺氧對照組、常氧細胞組。參考前期課題組方法[4]，收集不同干預組細胞標本后，固定洗滌細胞，然后加入封閉液，室溫封閉1h。吸除封閉液后加NF-κBP65抗體，4℃孵育過夜。洗滌后加抗兔Cy3，室溫孵育1h，洗滌后加細胞核染色液(DAPI)，室溫染色5min左右。吸除核染色液，洗滌后滴加抗熒光淬滅封片液，封片后熒光顯微鏡下觀察。

1.2.4 Western blotting檢測NF-κB及相關信號蛋白表達 實驗分為5個組，分別是缺氧+CGRP組、缺氧+CGRP8-37(CGRP拮抗劑)組、缺氧+BAY11-7082(NF-κB抑制劑)組、細胞缺氧對照組、常氧細胞組。參考前期課題組方法[4]，分別收集各組蛋白樣品進行SDS-PAGE凝膠電泳、轉膜及封閉后，分別加入兔抗小鼠IκB-a抗體(1:200)、兔抗小鼠IκB-a(Phospho-Ser32/Ser36)抗體(1:500)、兔抗小鼠NF-κBP50抗體(1:200)、兔抗小鼠NF-κBP65抗體(1:200)、兔抗小鼠β-actin抗體(1:400)、兔抗小鼠GAPDH抗體(1:200)4℃孵育過夜，加入HRP標記山羊抗兔IgG二抗，室溫孵育1h后顯影。采用Biorad GelDoc XR成像系統對目的蛋白進行定性及定量分析。

1.2.5 流式細胞儀檢測細胞凋亡 實驗分為4個組，分別是缺氧+CGRP組、缺氧+CGRP8-37(CGRP拮抗劑)組、細胞缺氧對照組、常氧細胞組。收集各干預組細胞，加入Ham's/F-12完全培養基重懸細胞，取1×105個重懸細胞，1200r/min離心5min，棄上清，加入195μl Annexin V-FITC結合液+5μl Annexin V-FITC混勻并重懸細胞。室溫(20～25℃)避光孵育10min，1200r/min離心5min，棄上清，加入190μl Annexin V-FITC結合液+10μ碘化丙啶(PI)染色液混勻并重懸細胞，冰浴避光放置。另設3管對照，分別為空白細胞管、僅加5μl Annexin V-FITC管及僅加10μl PI管。上機前向各管中再加入300μl Annexin V-FITC結合液，槍頭輕輕吹打混勻，進行流式細胞儀檢測。

1.3 統計學處理 采用SPSS 19.0軟件進行統計分析。計量資料以表示，組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用SNK-q檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 c-kit+CSCs的分離、培養及鑒定 原代CSCs貼壁生長12d后，倒置顯微鏡下可見細胞形態一致，呈長梭狀或多角形，分布不均勻(圖1A)。待原代細胞基本鋪滿細胞瓶底時，行免疫磁珠分選法分選出c-kit+CSCs繼續培養，細胞生長約6d時，高倍顯微鏡下可見細胞體積與未分選前相比稍有增大，周圍附有數個半透明折光度強的圓形小磁珠(圖1B)。行FACS鑒定示c-kit+CSCs表面抗原的表達為c-kit陽性，而CD34、CD45為陰性。

2.2 Western blotting檢測c-kit+CSCs上CGRP受體表達情況 CGRP受體由受體活性修飾蛋白-1(receptor activity modifying protein-1，RAMP1)、降鈣素受體樣受體(calcitonin receptor-like receptor，CRLR)和受體組成蛋白(receptor component protein，RCP)組成。CGRP通過與細胞表面CGRP受體即RAMP1/CRLR復合物結合發揮作用。Western blotting結果顯示，c-kit+CSCs上有RAMP1、CRLR及RCP受體的表達(圖2)。

圖1 大鼠c-kit+CSCs細胞培養(×200)Fig.1 Cultivation of rat c-kit+CSCs (×200) A. Primary generation of CSCs cultivated for 12d; B. c-kit+CSCs after magnetic beads separation

圖2 Western blotting檢測c-kit+CSCs上CGRP受體的表達Fig.2 Expression of CGRP receptor in c-kit+CSCs (Western blotting)RAMP1. Receptor activity modifying protein-1; RCP. Receptor component protein; CRLR. Calcitonin receptor-like receptor

圖3 免疫熒光檢測CGRP對NF-κB信號通路核轉位的影響(×200)Fig.3 Effect of CGRP on the nuclear translocation of NF-κB signal pathway (Immunofluorescence ×200)

2.3 CGRP調節缺氧c-kit+CSCs中NF-κB信號通路

2.3.1 CGRP對NF-κB信號通路核轉位的影響 未被激活的NF-κB和IκB-α形成一個復合物，分布在細胞質內，當其被外界因素激活，IκB-α發生磷酸化后與NF-κB解離，NF-κB的亞基p65及p50進入至細胞核內。應用免疫熒光法檢測細胞缺氧后NF-κB轉錄，轉錄后NF-κBP65呈紅色熒光，細胞核呈藍色熒光。免疫熒光法檢測結果顯示，常氧細胞組和缺氧+BAY11-7082組的細胞核內幾乎無紅色熒光，而細胞缺氧對照組與缺氧+CGRP8-37組見大量紅色熒光表達，缺氧+CGRP組細胞內紅色熒光較少(圖3)，表明缺氧下誘導NF-κB信號轉錄，CGRP對NF-κB信號通路有調控作用。

2.3.2 CGRP調節NF-κB信號通路蛋白的表達Western blotting檢測結果(圖4)顯示，細胞缺氧后12h，與常氧細胞組比較，細胞缺氧對照組P-I-κB、NF-κBP65及NF-κBP50表達增加(P<0.05)，進一步證實缺氧誘導NF-κB轉錄。與細胞缺氧對照組及缺氧+CGRP8-37組比較，缺氧+CGRP組P-I-κB、NF-κBP65及NF-κBP50表達降低(P<0.05)，與細胞缺氧對照組比較，缺氧+CGRP8-37組上述NF-κB通道蛋白表達差異無統計學意義(P>0.05)，然而，與缺氧+BAY11-7082組比較，缺氧+CGRP組中P-I-κB、NF-κBP65及NF-κBP50蛋白表達明顯增加(P<0.05)。

圖4 Western blotting法檢測CGRP對NF-κB信號通道蛋白的影響Fig.4 Effect of CGRP on NF-κB signal channel protein (Western blotting)(1)P<0.05 compared with normal oxygen group; (2)P<0.05 compared with hypoxia control group; (3)P<0.05 compared with hypoxia+CGRP group; (4)P<0.05 compared with hypoxia+CGRP8-37group

圖5 流式細胞儀檢測CGRP調節NF-κB信號通路后c-kit+CSCs存活的影響Fig.5 Influence of CGRP regulating NF-κB signal channel on c-kit+CSCs survival (Flow cytometry)Q1. Dead cells; Q2. Late apoptotic cells; Q3. Survived cell ; Q4. Early apoptotic cells. (1)P<0.05 compared with normal oxygen group; (2)P<0.05 compared with hypoxia control group; (3)P<0.05 compared with hypoxia+CGRP group

2.4 CGRP對c-kit+CSCs細胞凋亡的影響 流式細胞儀檢測細胞凋亡結果(圖5)顯示，與常氧細胞組比較，細胞缺氧對照組心臟干細胞早、晚期凋亡率均明顯增高(P<0.05)，與細胞缺氧對照組比較，缺氧+CGRP組CSCs細胞早、晚期凋亡率明顯降低(P<0.05)，且細胞存活率升高；然而CSCs缺氧并加入CGRP受體拮抗劑(CGRP8-37)后，與缺氧+ CGRP組比較，缺氧+CGRP8-37組早期細胞凋亡增加(P<0.05)，晚期細胞凋亡率差異無統計學意義(P>0.05)。

3 討 論

在心臟干細胞移植治療心肌梗死的過程中，最棘手的難題則是如何提高移植細胞的存活率及分化率，以減輕心肌梗死后微環境對移植細胞的損傷，并且最大限度的發揮細胞效應。Hong等[8]發現經冠脈內輸注CSCs至心肌梗死小鼠心臟后的5min，不足40%的CSCs存在于心臟中，而接下來的24h內，心臟中大于85%的移植CSCs丟失，細胞移植后第7天，僅有3.56%±2.03%的細胞存活，而在移植后的35d，細胞存活率下降至2.46%±0.46%。以上結果表明心肌梗死后局部缺氧、炎癥等微環境的改變對移植細胞的存活起了關鍵性作用。

NF-κB是炎癥信號激活通路，各種促炎因子和細菌產物均可激活NF-κB信號通路，導致促炎基因的轉錄調控，從而促進炎癥進程[10]。靜息狀態下NF-κB亞基p65通常與I-κB結合，覆蓋p50蛋白的核定位信號，以無活性的三聚體形式存在于細胞質中。當細胞受到炎癥、應激及氧化劑等刺激時，I-κB磷酸化并水解，與NF-κB解離，活化的NF-κBp65和p50亞基轉位至細胞核內，啟動炎性因子及凋亡基因的轉錄[11]。其中，p65亞基主要發揮促炎、促纖維化及凋亡作用的。Gordon等[12]證實NF-κB的激活也可引起炎性因子(TNF-α、IL-6 及ICAM-1)表達增加、促凋亡基因(Fas-L、Fas、C-mys)表達上升和抑凋亡基因(Bcl-2、Bcl-XL)表達下降。Yang等[13]發現抑制NF-κB/I-κBα/IKK信號通路后，細胞黏附分子和組織因子的表達均減少，炎癥反應亦減輕。由此本實驗設想，如果抑制了NF-κB信號通路，可否明顯改善移植細胞不利的炎癥微環境，從而增加移植細胞的存活率。Guan等[14]亦發現CGRP連接至RAMP1/CLR受體二聚體上可增加細胞cAMP水平，激活PKA，活化的PKA通過干擾I-κBα磷酸化降解來抑制NF-κB的活性，進而促進DNA連接抑制劑p50/p50二聚體形成。因此，CGRP 對NF-κB炎癥通路應該是發揮抑制作用的。為了驗證CGRP能否通過直接抑制NF-κB炎癥通路發揮抑制細胞凋亡的作用。

本實驗用細胞免疫熒光法觀察NF-κBp65亞基的核轉位情況，結果顯示細胞缺氧后12h，激活NF-κB轉錄入核，當抑制缺氧細胞中的CGRP受體后，缺氧+CGRP8-37組見大量紅色熒光表達，NF-κBP65轉錄表達增加，缺氧+CGRP組細胞核紅色熒光少，NF-κBP65表達減少。用Western blotting法檢測各組中NF-κB通道蛋白P-I-κB、I-κB、NF-κBP65及NF-κBP50的表達水平，得到類似結果，即，缺氧組中，P-I-κB、NF-κBP65及NF-κBP50的表達明顯增加(P<0.05)，提示缺氧狀態下，c-kit+CSCs中的NF-κB信號通路被激活。使用CGRP處理細胞后，上述蛋白的表達明顯下降，但與NF-κB抑制劑(BAY11-7082)作用的缺氧細胞比較，CGRP處理細胞后其NF-κB相關信號蛋白表達仍增加，為了進一步證實CGRP 對NF-κB信號通路的作用，在缺氧細胞中加入CGRP受體拮抗劑后，觀察到NF-κB相關信號蛋白的表達接近于細胞缺氧對照組，以上結果表明，雖然CGRP對NF-κB通道的抑制作用較NF-κB抑制劑低，但CGRP能明顯抑制NF-κB信號轉錄。

結合以上實驗結果，可以初步認為，在c-kit+CSCs中，CGRP能夠抑制P-I-κB、NF-κBP65和NF-κBP50的表達，干擾NF-κB亞基發生核轉位，對炎癥通路NF-κB信號通路有著明確的抑制作用。那么，CGRP是否通過抑制NF-κB信號通路增加c-kit+CSCs的抗凋亡能力呢？流式細胞儀結果顯示，與常氧CSCs比較，細胞缺氧對照組細胞早、晚期凋亡率均增高。在缺氧細胞中加入CGRP干預后，與細胞缺氧對照組比較，其細胞早期和晚期凋亡率均降低，但拮抗CGRP作用后，細胞凋亡率明顯增高。本實驗初步觀察到了CGRP對細胞凋亡的作用，結合上述研究結果，CGRP能明顯抑制NF-κB信號轉錄，由此推斷CGRP可能通過調節NF-κB信號通路來調節c-kit+CSCs細胞凋亡。本課題組下一步將研究干擾NF-κB信號通道后CGRP對c-kit+CSCs細胞凋亡的影響，以期為CGRP通過調節NF-κB信號通路抑制細胞凋亡提供更有力的證據。

[1]Li ZQ, Zhang WW. Development and application of new stem cells[J]. Chin J Pract Intern Med, 2011, 31(10): 750-752. [李占全, 張薇薇. 新型干細胞的研發及應用進展[J]. 中國實用內科雜志, 2011, 31(10): 750-752.]

[2]Zhao Y, Li T, Wei X,et al. Mesenchymal stem cell transplantation improves regional cardiac remodeling following ovine infarction[J]. Stem Cells Transl Med, 2012, 1(9): 685-695.

[3]Go AS, Mozaffarian D, Roger VL,et al. Executive summary: heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the American Heart Association[J]. Circulation, 2014, 129(3): 399-410.

[4]Shi B, Liu ZJ, Zhao RZ,et al. Effect of mesenchymal stem cells on heart function and restenosis of injured artery after myocardial infarction[J]. Natl Med J China, 2011, 91(32): 2269-2273. [石蓓, 劉志江, 趙然尊, 等. 骨髓間充質干細胞移植對心肌梗死后心臟功能及損傷血管再狹窄的影響[J]. 中華醫學雜志, 2011, 91(32): 2269-2273.]

[5]Wang G, Liu YQ, Zhang XC,et al. Study on the preparation and multipotent differentiation of c-kit-positive cardiac stem cells[J]. J Logist Univ PAPF (Med Sci), 2013, 22(11): 972-975, 1054.[王剛, 劉燕青, 張新昌, 等. 大鼠c-kit陽性心臟干細胞制備及多能分化研究[J]. 武警后勤學院學報(醫學版), 2013, 22(11): 972-975, 1054.]

[6]Li QH, Guo Y,Ou QH,et al. Intracoronary administration of cardiac stem cells in mice: a new, improved technique for cell therapy in murine models[J]. Basic Res Cardiol, 2011, 106(5): 849-864.

[7]Shintani Y, Fukushima S, Varela-Carver A,et al. Donor celltype specific paracrine effects of cell transplantation for postinfarction heart failure[J]. J Mol Cell Cardiol, 2009, 47(2): 288-295.

[8]Hong KU, Guo Y, Li QH,et al. c-kit+cardiac stem cells alleviate post-myocardial infarction left ventricular dysfunction despite poor engrafment and negligible retention in the recipient heart[J]. PLoS One, 2014, 9(5): e96725.

[9]Long XP, Wang S, Zhao RZ,et al. Lentivirus-mediated calcitonin gene-related peptide transfection enhances endothelial differentiation of rat bone marrow mesenchymal stem cell[J]. Chin J Pathophysiol, 2013, 29(8): 1515-1519. [龍仙萍, 汪松,趙然尊, 等. 慢病毒介導的降鈣素基因相關肽轉染對大鼠骨髓間充質干細胞內皮分化的影響[J]. 中國病理生理雜志, 2013, 29(8): 1515-1519.]

[10] Yan ST, Li CL, Lu JM,et al. Expressions of NF-κB and downstream inflammatory factors in the kidney of insulin resistance rat[J]. Med J Chin PLA, 2014, 39(10): 782-786. [閆雙通, 李春霖, 陸菊明, 等. NF-κB及下游炎癥因子在胰島素抵抗大鼠腎臟中的表達[J]. 解放軍醫學雜志, 2014, 39(10): 782-786.]

[11] Hayden MS, Ghosh S. Shared principles in NF-κB signaling[J]. Cell, 2008, 132(3): 344-362.

[12] Gordon JW, Shaw JA, Kirshenbaum LA. Multiple facets of NF-kappaB in the heart: to be or not to NF-kappa B[J]. Circ Res, 2011, 108(9): 1122-1132.

[13] Yang RC, Chang CC, Sheen JM,et al. Davallia bilabiata inhibits TNF-ɑ-induced adhesion endothelial cells[J]. Am J Chin Med, 2014, 42(6): 1411-1429.

[14] Guan H, Hou S, Ricciardi R P,et al. DNA binding of repressor nuclear factor-kappa B p50/p50 depends on phosphorylation of Ser337 by the protein kinase catalytic subunit[J]. J Biol Chem, 2005, 280(11): 9957-9962.

Effect of calcitonin gene related peptide regulated nuclear factor kappa B signal transduction on c-kit+cardiac stem cells in hypoxia state

LONG Xian-ping, ZHENG Xiao-yu, WANG Dong-mei, XU Guan-xue, ZHAO Ran-zun, SHI Bei*
Department of Cardiology, Affiliated Hospital of Zunyi Medical College, Zunyi, Guizhou 563003, China
*< class="emphasis_italic">Corresponding author, E-mail: shibei2147@163.com

, E-mail: shibei2147@163.com
This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (NSFC81360021), and the International Cooperative Project of Guizhou Province [Qiankehewai G (2013)7037]

ObjectiveTo investigate the effects of calcitonin gene-related peptide (CGRP) on the apoptosis of c-kit+cardiac stem cells in hypoxia.MethodsIschemia and hypoxia models of c-kit+cardiac stem cells were reproducedin vitro. The models were divided into hypoxia+CGRP group, hypoxia+CGRP8-37(antagonist of CGRP) group, hypoxia control group, normal oxygen group, and hypoxia+BAY11-7082[antagonist of nuclear factor kappa B (NF-κB)] group. NF-κB translocation after hypoxia was detected by immunofluorescence, and NF-κB channel proteins were determined with Western blotting. The NF-κB translocation and the expression of NF-κB channel proteins after CGRP intervention were detected, and the cell apoptosis rate after intervention was determined with flow cytometry in each group.ResultsUnder hypoxia the NF-κB signal pathway was activated, and nuclear translocation occurred in NF-κBP65(red fluorescence). Compared with hypoxia control group, the expressions of NF-κB related proteins such as P-I-κB, NF-κBP65and NF-κBP50decreased obviously (P<0.05). Compared with the hypoxia+CGRP group, the expressions of NF-κB related proteins increased significantly (P<0.05) as mentioned above in hypoxia+CGRP8-37group. Both the early and late apoptotic rates declined in hypoxia+CGRP group compared with that of hypoxia control group (P<0.05), however, the early apoptotic rate increased markedly in hypoxia+CGRP8-37group as compared with that of hypoxia+CGRP group (P<0.05).ConclusionUnder hypoxia, CGRP may regulate the NF-κB signal pathway, and at the same time suppress the apoptosis of c-kit+cardiac stem cells.

calcitonin gene-related peptide; nuclear factor kappa B; anoxia; c-kit+cardiac stem cells; apoptosis

R363

A

0577-7402(2015)10-0782-06

10.11855/j.issn.0577-7402.2015.10.03

2015-05-22；

2015-08-05)

(責任編輯：張小利)

國家自然科學基金(81360021)；貴州省國際合作項目[黔科合外G字(2013)7037號]

龍仙萍，醫學碩士，副主任醫師。主要從事心肌梗死后心肌細胞再生修復的基礎及臨床研究

563003 貴州遵義 遵義醫學院附屬醫院心內科(龍仙萍、鄭小宇、王冬梅、許官學、趙然尊、石蓓)

石蓓，E-mail：shibei2147@163.com